結(jié)腸癌中PD-L1的表達及其與臨床病理和預(yù)后的關(guān)系

陳珍珠，汪霖，茆智翔

(徐州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院腫瘤科，江蘇 徐州)

0 引言

在惡性腫瘤中，結(jié)腸癌較常見，其對患者生命健康產(chǎn)生了嚴重威脅。當前，隨著腫瘤免疫治療的發(fā)展，程序性死亡分子(PD-1)已被明確為在T淋巴細胞表面誘導表達的抑制性受體，其由程序性死亡因子配體1(PD-L1)和程序性死亡因子配體2(PD-L2)兩個配體分子組成[1]。其中，PD-L1經(jīng)PD-1/PD-L1傳導通路對T細胞分化增殖進行抑制，將信號傳導和多類細胞因子分泌阻斷，造成腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移問題[2]。現(xiàn)如今，有關(guān)PD-L1在結(jié)腸癌中的表達及其與臨床病理、預(yù)后關(guān)系等相關(guān)研究并不是很多。本實驗選取病例進行簡要闡述。

1 資料與方法

1.1 一般資料

實驗時間2018年1月至2018年12月，實驗對象91例結(jié)腸癌患者腫瘤組織。男性45例，女性46例；年齡最小者35歲，年齡最大者78歲，平均年齡(56.54±3.82)歲；按國際抗癌協(xié)會分類標準，實施腫瘤分期、組織學分級：Ⅰ期12例，Ⅱ期25例，Ⅲ期41例，Ⅳ期13例；G1級16例，G2級55例，G3級20例。患者均隨訪1年。

1.2 方法

對PD-L1蛋白實施免疫組化檢測，應(yīng)用標準鏈霉親和過氧化物酶，在特定濃度一抗中放置組織切片，孵育過夜，第二天，再把切片放入羊抗兔lgG內(nèi)(經(jīng)生物素標記)孵育0.5h，繼而轉(zhuǎn)移至經(jīng)過氧化酶標記的鏈霉親和素室溫孵育20min。發(fā)揮0.02%3，3’—二氨基聯(lián)苯胺作用，于50mmol/L Tris-HCI緩沖液(pH7.6)內(nèi)染色，時長6min左右，再用蘇木精復(fù)染，用水清洗，依次進行脫水、清除、封片處理。該背景下，與免疫染色相對應(yīng)的則是借助非免疫山羊或者兔血清對一抗進行替代，在顯微鏡下觀察。

1.3 觀察指標

實施DAKO Hercept Test評分：PD-L1陽性顯色：細胞漿出現(xiàn)黃色至棕黃色顆粒。評分指標包括染色強度、陽性細胞百分數(shù)，在低倍鏡下，選擇5個視野，用高倍鏡觀察。染色強度：0分提示無著色；1分提示淡黃色；2分提示棕黃色；3分提示棕褐色，分值越高，顏色越深。陽性細胞計數(shù)：1分：陽性細胞不足10%；2分：陽性細胞10%-50%；3分：陽性細胞50%以上。PD-L1表達陽性即當染色強度和陽性細胞計數(shù)乘積在3分及以上，反之，則為陰性。

1.4 統(tǒng)計學處理

篩選實驗數(shù)據(jù)用統(tǒng)計學工具(版本：選SPSS 23.0)讀取和處理。計量資料、計數(shù)資料的呈現(xiàn)形式分別為(±s)、(n，%)，驗證方式t、χ2。P值小于0.05提示數(shù)據(jù)有顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 PD-L1蛋白表達

發(fā)揮免疫組化作用，對結(jié)腸癌患者癌組織、癌旁組織、正常組織內(nèi)PD-L1表達進行評估。結(jié)果提示，PD-L1在細胞膜、胞質(zhì)定位，在腫瘤組織內(nèi)，PD-L1高表達25例(27.47%)，中度表達28例(30.77%)，弱表達38例(41.76%)；在癌旁組織、正常組織內(nèi)檢測到的例數(shù)則非常少，分別為10.99%(10/91)和6.59%(6/91)。

2.2 結(jié)腸癌組織內(nèi)PD-L1表達與病理因素關(guān)系

結(jié)腸癌組織內(nèi)PD-L1表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、腫瘤分期等病理因素有關(guān)。具體見表1。

表1 結(jié)腸癌組織內(nèi)PD-L1表達與病理因素關(guān)系(n，%)

2.3 PD-L1與結(jié)腸癌預(yù)后關(guān)系

TNM分期晚、分化程度低、淋巴結(jié)、遠處轉(zhuǎn)移、PD-L1表達陽性均會對結(jié)腸癌預(yù)后生存產(chǎn)生影響。結(jié)直腸癌PD-L1表達與術(shù)后生存期具有相關(guān)性。具體見表2。

表2 PD-L1與結(jié)直腸癌預(yù)后關(guān)系

3 討論

免疫耐受現(xiàn)象會阻礙腫瘤免疫治療。在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細胞經(jīng)各類機制對自身形成保護，規(guī)避機體免疫反應(yīng)，其主要通過PD-L1表達上調(diào)實現(xiàn)[3]。在免疫應(yīng)答中，PD-L1作為凋亡相關(guān)蛋白，發(fā)揮重要作用，對T淋巴細胞和其配體PD-1結(jié)合起誘導作用，從而把抑制性信號傳遞給T細胞，發(fā)生凋亡，對外周T細胞的免疫耐受進行調(diào)節(jié)[4]。在腫瘤免疫治療中，PD-1/PD -L1通路與腫瘤逃避免疫系統(tǒng)破壞問題備受關(guān)注[5]。發(fā)揮藥物作用，將PD-1/PD-L1通路阻斷，有利于使T細胞功能增強，對腫瘤細胞產(chǎn)生影響，使之裂解，實現(xiàn)腫瘤治療。實驗證實[6-9]，PD-L1在多類腫瘤組織中廣泛表達，但有關(guān)結(jié)腸癌患者PD-L1表達與臨床病理因素、預(yù)后關(guān)系尚不明確。結(jié)果顯示：在腫瘤組織內(nèi)，PD-L1表達顯著升高，其不受年齡、性別、腫瘤大小等因素影響，但與腫瘤的TNM分期、遠處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。結(jié)腸癌患者預(yù)后不良的誘因即腫瘤組織內(nèi)PD-L1高表達，證實了在結(jié)腸癌治療中，PD-L1為重要耙點。

在免疫系統(tǒng)內(nèi)，PD-L1的作用在于維持正常機體保護性免疫和免疫耐受平衡[10-12]。在腫瘤微環(huán)境中，依托各機制，對PD-L1產(chǎn)生影響，使其表達上調(diào)，使PD-1/PD-L1信號通路處于異常激活狀態(tài)，通過各類方式對T細胞增殖、分化進行抑制，通過誘導，使之發(fā)生凋亡，介導腫瘤免疫逃逸[13]。除此之外，PD-L1還能夠?qū)細胞缺失進行有效調(diào)節(jié)?，F(xiàn)如今，有關(guān)PD-1/PD-L1通路機制、是否存在多個受體仍不明確，后續(xù)將通過PD-L1單抗或多抗制備，對該通路今星期有效阻斷，為結(jié)腸癌臨床治療工作的開展奠定良好基礎(chǔ)。

綜上，在腫瘤免疫治療中，PD-1/PD-L1備受認可，其信號通路為結(jié)腸癌治療工作提供了新的分子耙標。在結(jié)腸癌中，PD-L1蛋白表達上調(diào)，相關(guān)因素有TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不良預(yù)后等。故而，PD-L1能夠被看作結(jié)腸癌侵襲、轉(zhuǎn)移的新型生物標志物，未來一段時間，將重點探討結(jié)腸癌免疫治療中，PD-L1能否作用關(guān)鍵耙點發(fā)揮作用及其相關(guān)機制。