早期胃癌及癌前病變組織中LC3、Ki-67、SOX9的表達(dá)及臨床意義*

張興旺,馬艷梅,朱 靜

陜西省榆林市第一醫(yī)院病理科(榆林719000)

胃癌為我國(guó)高發(fā)疾病，調(diào)查顯示，我國(guó)每年約有35萬人因胃癌死亡，嚴(yán)重威脅患者的生命健康[1]。研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者的預(yù)后與病情進(jìn)展密切相關(guān)，早期胃癌經(jīng)及時(shí)診治后，5年生存率可高于90%[2]。目前認(rèn)為，胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中涉及到多種癌基因的活化，了解早期胃癌的發(fā)生機(jī)制，對(duì)患者治療方案的制定以及預(yù)后判斷具有十分積極的意義[3]。LC3能夠有效反映腫瘤組織中自噬的活性，有研究發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)與胃癌的進(jìn)展、浸潤(rùn)程度等密切相關(guān)[4]。Ki-67能夠?qū)δ[瘤組織中細(xì)胞的增殖情況進(jìn)行有效反映，在腫瘤惡性程度、復(fù)發(fā)等的判斷中具有較高的應(yīng)用價(jià)值。SOX9屬于SOX家族的重要成員，在腫瘤干細(xì)胞增殖等方面具有重要的作用，研究發(fā)現(xiàn)，其與胃癌患者病情進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)[5]。本研究旨在明確LC3、Ki-67、SOX9在早期胃癌組織中的表達(dá)情況及與患者臨床特征的關(guān)系，以了解LC3、Ki-67、SOX9在早期胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

1 一般資料 納入2018年3月至2020年2月榆林市第一醫(yī)院收治的早期胃癌患者124例作為胃癌組，男82例，女42例，年齡36～73歲，平均(56.59±8.77)歲。納入同期收治的胃上皮內(nèi)瘤變患者96例，其中低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變(LGIN)47例作為L(zhǎng)GIN組，高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變(HGIN)49例作為HGIN組。LGIN組男30例，女17例，年齡34～70歲，平均(56.79±8.94)歲。HGIN組男33例，女16例，年齡38～75歲，平均(57.36±9.12)歲。同期收治的慢性胃炎患者40例作為胃炎組，男25例，女15例，年齡36～70歲，平均(56.42±8.61)歲。同期入院行胃鏡檢查的健康者40例作為對(duì)照組，男26例，女14例，年齡38～74歲，平均(57.12±9.03)歲。五組患者的年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核后進(jìn)行。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)術(shù)后病理或者胃鏡檢查后，首次明確診斷；病歷資料完整；知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：放化療史；胃部手術(shù)史；合并其他惡性腫瘤；免疫相關(guān)性疾??；近期免疫抑制劑使用史；近期激素使用史。

2 檢測(cè)方法 使用免疫組化法對(duì)五組胃黏膜組織中的LC3、Ki-67、SOX9表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。取胃黏膜石蠟標(biāo)本，在進(jìn)行脫蠟、抗原修復(fù)后，添加LC3、Ki-67、SOX9一抗，工作濃度為1∶50，隨后置于4℃下過夜。洗滌封閉后，添加生物素化二抗，于37 ℃下進(jìn)行孵育，持續(xù)30 min。使用DAB進(jìn)行顯色，隨后進(jìn)行復(fù)染、脫水、封片，置于顯微鏡下觀察。所有試劑均購買自艾博抗(上海)貿(mào)易有限公司。陰性對(duì)照選擇PBS代替一抗進(jìn)行，陽性對(duì)照使用已知的LC3、Ki-67、SOX9陽性切片。切片中出現(xiàn)棕黃色顆粒代表檢測(cè)陽性。

3 觀察指標(biāo) ①LC3、Ki-67、SOX9的表達(dá)陽性率：對(duì)不同分組LC3、Ki-67、SOX9的表達(dá)陽性率進(jìn)行比較；每個(gè)切片中隨機(jī)選擇10個(gè)視野進(jìn)行分析，根據(jù)染色細(xì)胞占比和染色強(qiáng)度之積對(duì)陽性率進(jìn)行判定，陰性為≤3分，陽性為>3分；其中染色強(qiáng)度分值范圍0～3分，分別為未染色(0分)、淺黃(1分)、棕黃(2分)以及棕褐色(3分)；染色細(xì)胞占比評(píng)分分值范圍0～3分，分別為全陰性或染色細(xì)胞占比低于5%(0分)；5%<染色細(xì)胞占比≤25%(1分)；25%<染色細(xì)胞占比≤50%(2分)；50%<染色細(xì)胞占比(3分)。②胃癌組不同臨床特征患者LC3、Ki-67、SOX9的陽性率：臨床特征包括年齡(≥60歲和<60歲)，性別(男和女)，腫瘤直徑≥2 cm，分化程度(高分化和中低分化)，浸潤(rùn)范圍(局限至黏膜和浸潤(rùn)至黏膜下層)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(是和否)等。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，不同分組LC3、Ki-67、SOX9的表達(dá)陽性率以及胃癌組不同臨床特征患者LC3、Ki-67、SOX9的表達(dá)陽性率以[例(%)]表示，使用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 不同分組LC3、Ki-67、SOX9的表達(dá)陽性率比較 對(duì)照組、胃炎組、HGIN組、LGIN組、胃癌組的LC3表達(dá)陽性率逐漸增加，胃癌組LC3、Ki-67、SOX9的表達(dá)陽性率均明顯高于對(duì)照組、胃炎組、HGIN組和LGIN組(P<0.05)，見表1。

表1 不同分組LC3、Ki-67、SOX9表達(dá)陽性率比較[例(%)]

2 胃癌組不同臨床特征患者LC3的表達(dá)陽性率比較 胃癌組高分化患者LC3表達(dá)陽性率明顯高于中低分化患者(P<0.05)。年齡、性別、腫瘤直徑、浸潤(rùn)范圍、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與LC3表達(dá)陽性率均無明顯關(guān)系(P>0.05)。見表2。

表2 胃癌組不同臨床特征患者LC3陽性表達(dá)率比較[例(%)]

3 胃癌組不同臨床特征患者Ki-67的表達(dá)陽性率比較 年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)范圍、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與Ki-67表達(dá)陽性率均無明顯關(guān)系(P>0.05)。見表3。

表3 胃癌組不同臨床特征患者Ki-67表達(dá)陽性率比較[例(%)]

4 胃癌組不同臨床特征患者SOX9的表達(dá)陽性率比較 胃癌組浸潤(rùn)至黏膜下層的SOX9表達(dá)陽性率明顯高于局限至黏膜(P<0.05)。年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與SOX9表達(dá)陽性率均無明顯關(guān)系(P>0.05)。見表4。

表4 胃癌組不同臨床特征患者SOX9表達(dá)陽性率比較[例(%)]

討 論

胃癌的發(fā)展需要經(jīng)過復(fù)雜的癌前病變過程，在這個(gè)過程中，腫瘤細(xì)胞性質(zhì)的轉(zhuǎn)變優(yōu)先于形態(tài)學(xué)的變化。研究發(fā)現(xiàn)，在癌前病變向胃癌轉(zhuǎn)變的過程中，腫瘤組織存在多種癌基因的活化[6]。其中自噬為腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要生理過程，可通過對(duì)受損腫瘤細(xì)胞的降解，促進(jìn)腫瘤組織的代謝平衡和生長(zhǎng)。LC3為自噬的主要調(diào)控基因，研究發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)水平可對(duì)腫瘤組織自噬的活性進(jìn)行有效反映，并與腫瘤分期具有密切的關(guān)系[7]。Ki-67為機(jī)體中關(guān)鍵的核增殖基因，能夠?qū)?xì)胞增殖動(dòng)態(tài)進(jìn)行有效反映。有研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67可隨胃部病變的進(jìn)展，表達(dá)陽性率逐漸增強(qiáng)[8]。SOX9參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化等多個(gè)生理過程，據(jù)報(bào)道，SOX9表達(dá)水平過高時(shí)，可通過參與Wnt/β-連環(huán)蛋白的激活，對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖進(jìn)行有效調(diào)控[9]。通過了解癌前病變向早期胃癌的轉(zhuǎn)化機(jī)制，對(duì)胃癌發(fā)病率的降低，以及患者預(yù)后的改善可能具有積極的意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，LC3、Ki-67和SOX9的表達(dá)陽性率因胃部病變類型不同而表現(xiàn)出較大的差異，其中早期胃癌組織中LC3、Ki-67和SOX9的表達(dá)陽性率均明顯高于其他分組。其中正常組織中，為了維持細(xì)胞功能的穩(wěn)定，自噬水平往往較低，胃炎患者的病變組織中，由于細(xì)胞的萎縮以及數(shù)量的降低，使自噬泡等細(xì)胞器聚集于細(xì)胞膜下，使LC3多在細(xì)胞膜或膜下表達(dá)，表達(dá)水平較低[10]。在上皮內(nèi)瘤變中，病變組織的增殖活動(dòng)開始增強(qiáng)，自噬活性逐漸增加。隨著病情的進(jìn)展，當(dāng)處于早期胃癌階段時(shí)，由于細(xì)胞代謝及增殖的進(jìn)一步旺盛，自噬活性明顯增強(qiáng)，使LC3可在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜下進(jìn)行表達(dá)，進(jìn)而使早期胃癌患者腫瘤組織中的LC3水平明顯高于其他病變組織[11]。對(duì)LC3與早期胃癌患者臨床特征的關(guān)系進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，LC3表達(dá)陽性率與分化程度有關(guān)，這可能是由于隨著腫瘤分化程度的下降，侵襲能力上升，使基因發(fā)生突變積累，導(dǎo)致多個(gè)抑癌基因失去表達(dá)能力，進(jìn)而使腫瘤細(xì)胞的自噬水平下降，LC3表達(dá)陽性率下降等因素相關(guān)[12]。

Ki-67作為臨床常用的腫瘤標(biāo)志物，與腫瘤細(xì)胞增殖情況具有一定的相關(guān)性，本研究發(fā)現(xiàn)，隨著癌前病變向胃癌的轉(zhuǎn)變，Ki-67的表達(dá)陽性率提高，這可能與Ki-67能夠提高細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶活性，提高其在腫瘤組織的表達(dá)水平，進(jìn)而促進(jìn)了胃癌的發(fā)生和發(fā)展等因素相關(guān)[13]。然而，本研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67與早期胃癌患者年齡、性別、腫瘤浸潤(rùn)深度、分化程度等均無明顯關(guān)系，提示Ki-67在早期胃癌患者預(yù)后判斷中的應(yīng)用價(jià)值可能有限，具體機(jī)制還需擴(kuò)大樣本進(jìn)行更為深入的研究。

正常組織中，SOX9主要負(fù)責(zé)干細(xì)胞分化的調(diào)控，隨著機(jī)體慢性損傷的加劇，干細(xì)胞活性增強(qiáng)，使SOX9表達(dá)陽性率上升。有研究發(fā)現(xiàn)，SOX9能夠促進(jìn)胃癌的發(fā)展，并在腫瘤細(xì)胞增殖中起到重要作用，具有一定的致瘤效果[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，早期胃癌浸潤(rùn)深度與SOX9相關(guān)，這可能與SOX9能夠通過提高CEACAM1的表達(dá)和抑制腫瘤細(xì)胞凋亡等機(jī)制，而使腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散和增殖能力增強(qiáng)等因素相關(guān)，這也提示SOX9與胃癌進(jìn)展可能具有一定的相關(guān)性[15-16]。

綜上所述，LC3、Ki-67和SOX9的陽性表達(dá)率均隨著胃黏膜病變嚴(yán)重程度的增加而上升，提示三者均可能參與癌前病變向早期胃癌的轉(zhuǎn)化過程中。關(guān)于LC3、Ki-67和SOX9與早期胃癌患者預(yù)后的相關(guān)性還需更為深入的研究。