QuEChERS法結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中12種農(nóng)藥殘留量

孔玉婷，陶志成，朱丹倩，丁獻(xiàn)榮

（1.浙江金正檢測(cè)有限公司，浙江義烏 322000；2.贊宇科技集團(tuán)股份有限公司，浙江杭州 310009）

茶葉是我國的一種常見出口農(nóng)產(chǎn)品，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位。目前，我國是世界第二大茶葉出口國，但是近年來隨著茶葉進(jìn)口國對(duì)茶葉食品安全要求的提高，我國茶葉的出口量正在呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)，因此亟須建立一種便捷、快速、高效的檢測(cè)方法用于測(cè)定茶葉中多種農(nóng)藥殘留。

茶葉由于基質(zhì)復(fù)雜，其中含有的色素、茶堿和茶多酚等物質(zhì)會(huì)造成凈化困難，因而其農(nóng)殘檢測(cè)凈化方式多采用傳統(tǒng)方法，如磺化、SPE 及GPC 技術(shù)，但這些前處理技術(shù)存在過程繁瑣耗時(shí)、實(shí)際用量大、檢測(cè)成本高等問題。而QuEChERS前處理方法是近年來在國際上新發(fā)展起來的一種樣品前處理方法，具有便捷、快速、高效及可靠安全等優(yōu)點(diǎn)。因此本文采用QuEChERS 法結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，建立了一種可同時(shí)測(cè)定茶葉中甲萘威、涕滅威、克百威、滅多威等12種農(nóng)藥的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

茶葉：市售。

甲醇，色譜純；乙腈，色譜純，均購于美國大地公司；甲酸，色譜純，購于阿拉丁。

QuEChERS SPE：15mL PSA/C18 凈 化 管，100mgPSA，100mgC18，300mg MgSO4，購于島津。

甲萘威、涕滅威、克百威、滅多威、茚蟲威、抗蚜威、氯唑磷、內(nèi)吸磷、滅線磷、吡蟲啉、多菌靈和氧樂果標(biāo)準(zhǔn)品：100mg/L，均購于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1260 高效液相色譜儀串聯(lián)6460C 三重四極桿質(zhì)譜儀（美國Agilent 公司）；3-18KS 高速冷凍離心機(jī)（德國Sartorius 公司）；純水凈化儀（杭州永潔達(dá)凈化科技有限公司）；MS 3 basic 振蕩器（IKA 公司）。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別移取各標(biāo)準(zhǔn)溶液至10mL 棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配制成10μg/mL，置于4℃下避光保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別精密吸取各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1mL于10mL 棕色容量瓶中，用甲醇稀釋成1μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，置于4℃下避光保存。

基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別精密吸取適量混合標(biāo)準(zhǔn)工作液于10mL 容量瓶中，用陰性基質(zhì)溶液進(jìn)行定容，現(xiàn)配現(xiàn)用。

三是現(xiàn)代技術(shù)。現(xiàn)代技術(shù)的涌現(xiàn)和日新月異，加之現(xiàn)代分析與研究方法的出現(xiàn)，帶動(dòng)了電氣自動(dòng)化向更高級(jí)方向的發(fā)展。

1.3.2 樣品提取與凈化

（1）提取

稱取2g 樣品（精確到0.001g）于50mL 離心管中，加入20.0mL 0.1%甲酸乙腈溶液，2g 氯化鈉，超聲提取30min，6 000r/min 離心4min，收集上清液待凈化。

（2）凈化

上清液中加入QuEChERS SPE 粉包凈化，渦旋振蕩1min，6 000r/min 離心3min，取上清液4.0mL 于40℃水浴氮吹至近干，殘?jiān)?0%甲醇水復(fù)溶并定容至2.0mL。最后經(jīng)0.22μm 微孔濾膜過濾后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

1.3.3 質(zhì)譜與色譜條件

（1）質(zhì)譜條件

（2）色譜條件

色 譜 柱：Poroshell 120 EC-C18 柱（150mm×3.0mm，2.7μm）；柱溫35 ℃；流速0.3mL/min；進(jìn)樣量5μL；流動(dòng)相A 為5mmol/L 乙酸銨-0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B 為乙腈，梯度洗脫程序：0～1min，95%A；1～4min，95%～40%A；4～14min，40%～0%A；14～18min，0%～95%A。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件優(yōu)化

為選取最優(yōu)的流動(dòng)相體系，分別考察了流動(dòng)相A（0.1%甲酸水-乙腈）、B（0.1%甲酸水-甲醇）、C（5mmoL 乙酸銨水溶液-乙腈）、D（5mmoL 乙酸銨水溶液-甲醇）、E（0.1%甲酸5mmoL 乙酸銨水溶液-乙腈）和F（0.1%甲酸5mmoL乙酸銨水溶液-甲醇）6種流動(dòng)相體系，在同一濃度下進(jìn)行峰面積比較。結(jié)果表明，當(dāng)選取流動(dòng)相E 時(shí)，其靈敏度和峰形達(dá)到最佳，因此最終選擇流動(dòng)相E（0.1%甲酸5mmoL 乙酸銨水溶液-乙腈）作為最優(yōu)流動(dòng)相體系。

2.2 提取劑的選擇

為選取最優(yōu)的提取劑，本試驗(yàn)分別對(duì)甲醇、丙酮、乙腈的提取效果進(jìn)行了考察。在相同條件下，作為提取劑，甲醇較難分層，丙酮和乙腈均能得到較好的回收率，但丙酮提取出的雜質(zhì)和色素高于乙腈，因此選擇乙腈。而乙腈中添加1%甲酸作為混合提取劑，因甲酸可抑制目標(biāo)物在水中的電離，回收率與之前相比有了較明顯的提高。因此選擇1%甲酸乙腈作為最適提取劑。

2.3 QuEChERS的影響

為進(jìn)一步降低基質(zhì)效應(yīng)，減少雜峰干擾，提高回收率，選取QuEChERS SPE 進(jìn)行凈化。凈化前，各個(gè)目標(biāo)物的回收率為30%～70%，凈化后，回收率有了明顯的提高，平均回收率在72.5%～118.8%。表明QuEChERS 凈化可行性，因此采用QuEChERS 法對(duì)茶葉進(jìn)行凈化處理。

2.4 方法線性、檢出限與定量限

在上述最優(yōu)條件下，分別以濃度為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到線性方程；3倍信噪比為檢出限（LOD），10 倍信噪比為定量限（LOQ），結(jié)果見表1。12種化合物在2.0～100ng/mL 范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r2均大于0.999。

表1 12種農(nóng)藥的檢出限、定量限

2.5 方法精密度和回收率

在茶葉基質(zhì)樣品中進(jìn)行低中高3個(gè)濃度水平加標(biāo)回收試驗(yàn)，考察方法精密度和回收率，結(jié)果見表2。加標(biāo)回收率和精密度均符合GB/T 27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》的要求。

表2 12種農(nóng)藥的回收率和精密度

續(xù)表

2.6 方法應(yīng)用

應(yīng)用本方法對(duì)市場(chǎng)上所售的茶葉進(jìn)行隨機(jī)抽取檢測(cè)，共計(jì)40個(gè)批次，涉及紅茶、綠茶、普洱茶和烏龍茶4大類。其中有2個(gè)批次的紅茶檢出多菌靈和氧樂果，綠茶、普洱茶和烏龍茶均未檢出這12種農(nóng)藥殘留。

3 結(jié)束語

本文建立一種QuEChERS 法結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中12種農(nóng)藥殘留量的方法，樣品經(jīng)1%甲酸乙腈溶液提取，QuEChERS 法凈化，MRM 監(jiān)測(cè)方式測(cè)定。12 種藥物在2～100ng/mL 濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r2均大于0.999，低中高濃度三個(gè)水平加標(biāo)試驗(yàn)平均回收率在72.5%～118.8%，RSD 在1.3%～8.1%，方法檢出限為0.260～ 11.5μg/kg，定量限為0.864～38.5μg/kg，符合農(nóng)藥殘留分析的要求，該方法適用于大量茶葉樣品農(nóng)藥殘留的快速篩選和定量分析檢測(cè)。