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    HBV感染患者外周血T淋巴細胞亞群水平及其與HBV-DNA載量的相關(guān)性研究

    2020-11-16 08:44:59劉亞莉趙康路張玉
    中外醫(yī)學(xué)研究 2020年27期
    關(guān)鍵詞:T淋巴細胞亞群相關(guān)性

    劉亞莉 趙康路 張玉

    【摘要】 目的:探討外周血T淋巴細胞亞群在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者檢測中的價值及其與HBV-DNA載量的相關(guān)性研究,為評估HBV感染患者疾病進展及臨床治療提供參考依據(jù)。方法:選取2018年9月-2019年8月在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第四醫(yī)院就診的103例HBV感染者作為試驗組,按病情分為慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)組36例、乙肝肝硬化(liver cirrhosis,LC)組35例、乙肝病毒相關(guān)性原發(fā)性肝癌(hepatitis B virus-associated primary liver cancer,HBV-PLC)組32例;采用流式細胞術(shù)檢測4組血清T淋巴細胞亞群表達水平,實時熒光定量PCR法檢測3組試驗組HBV-DNA定量,分析HBV載量與T淋巴細胞亞群相關(guān)性。結(jié)果:CHB組、LC組、HBV-PLC組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+表達水平均低于對照組,CD8+表達水平高于對照組,CHB組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+表達水平均高于LC組、HBV-PLC組,CD8+表達水平均低于LC組、HBV-PLC組,LC組CD4+、CD4+/CD8+表達水平均高于HBV-PLC組,CD8+表達水平低于HBV-PLC組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。高、低載量組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于HBV-DNA陰性組,高載量組CD4+、CD4+/CD8+均低于低載量組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。HBV感染者HBV-DNA載量與CD4+ T淋巴細胞表達水平存在負相關(guān)(r=-0.79,P<0.05),與CD8+T淋巴細胞表達水平存在正相關(guān)(r=0.73,P<0.05),與CD4+/CD8+及CD3+T淋T巴細胞表達水平無相關(guān)性(r=0.35、0.41,P>0.05)。結(jié)論:T淋巴細胞亞群比例在HBV感染患者中存在異常,可能成為HBV感染患者臨床不良結(jié)局的預(yù)測因子,監(jiān)測T淋巴細胞亞群對評估HBV感染患者免疫功能及臨床治療可提供一定指導(dǎo)意義。

    【關(guān)鍵詞】 HBV感染 T淋巴細胞亞群 HBV-DNA載量 相關(guān)性

    doi:10.14033/j.cnki.cfmr.2020.27.004 文獻標識碼 A 文章編號 1674-6805(2020)27-00-03

    [Abstract] Objective: To investigate the value of peripheral blood T lymphocyte subsets in the detection of patients with chronic hepatitis B virus (HBV) infection and their correlation with HBV-DNA load, so as to provide reference for the evaluation of disease progression and clinical treatment of patients with HBV infection. Method: A total of 103 patients infected with HBV who visited the Fourth Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine from September 2018 to August 2019 were selected as the experimental group. According to the condition, they were divided into the chronic hepatitis B (CHB) group with 36 cases, the liver cirrhosis (LC) group with 35 cases, hepatitis B virus-associated primary liver cancer (HBV-PLC) group with 32 patients. Flow cytometry was used to detect the expression level of serum T lymphocyte subsets in 4 groups, and real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect HBV DNA quantification in 3 test groups, and the correlation between HBV load and T lymphocyte subsets was analyzed. Result: The expression levels of CD3+, CD4+ and CD4+/CD8+ in CHB group, LC group and HBV-PLC group were all lower than those in the control group, and the expression level of CD8+ was higher than that in the control group, the expression levels of CD3+, CD4+ and CD4+/CD8+ in CHB group were all higher than those in LC group and HBV-PLC group, while the expression levels of CD8+ and CD4+/CD8+ in LC group in HBV-PLC group were all higher than those in HBV-PLC group, and the expression levels of CD8+ were lower than those in HBV-PLC group, the differences were statistically significant (P<0.05). CD3+, CD4+ and CD4+/CD8+ in high load group and low load group were all lower than those in the HBV-DNA negative group, while CD4+ and CD4+/CD8+ in the high load group were all lower than those in the low load group, the differences were statistically significant (P<0.05). HBV-DNA load was negatively correlated with the expression level of CD4+ T lymphocytes (r=-0.79, P<0.05), and positively correlated with the expression level of CD8+ T lymphocytes (r=0.73, P<0.05), and not correlated with the expression level of CD4+/CD8+ and CD3+ T lymphocytes (r= 0.35, 0.41, P>0.05). Conclusion: The proportion of T lymphocyte subsets is abnormal in patients with HBV infection, which may be a predictor of adverse clinical outcomes in patients with HBV infection. Monitoring T lymphocyte subsets can provide certain guiding significance for the evaluation of immune function and clinical treatment in patients with HBV infection.

    [Key words] HBV infection T lymphocyte subsets HBV-DNA loads Correlation

    First-authors address: The Fourth Affiliated Hospital of Zhejiang University Medical College, Yiwu 322000, China

    乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是DNA嗜肝病毒,感染人體后可造成肝細胞的損傷。多數(shù)為急性感染,主要表現(xiàn)為全身乏力,易疲勞,食欲不振或者黃疸等癥狀,少數(shù)患者因其免疫功能缺陷逐漸發(fā)展為慢性感染,HBV-DNA復(fù)制可進一步使患機體免疫系統(tǒng)功能紊亂,加重肝臟炎癥反應(yīng)及肝細胞的纖維化[1],嚴重者可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌等,甚至危及患者生命,我國乙型肝炎發(fā)病率接近50%,是原發(fā)肝癌的首要致病因素[2]。

    研究報道,免疫功能發(fā)生改變時,T淋巴細胞亞群比例會受到影響,因此T 細胞亞群被認為是免疫功能的評價指標[3]。人體感染HBV后,外周血淋巴細胞亞群數(shù)目和功能的改變預(yù)示各淋巴細胞亞群間的平衡被打破,而這種變化可反映機體的免疫狀態(tài)的失衡[4]。本研究通過對HBV感染者T淋巴細胞亞群水平的測定,探討HBV感染者不同疾病進程中T淋巴細胞亞群與疾病相關(guān)性及其與HBV-DNA載量的相關(guān)性,具體如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2018年9月-2019年8月在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第四醫(yī)院就診的103例HBV感染者作為試驗組,所有患者均符合文獻[5]《慢性乙型肝炎防治指南(2015年)》中HBV感染的診斷標準。所有患者按病情分為慢性乙型病毒性肝炎(CHB)組36例、乙肝肝硬化(LC)組35例,乙肝病毒相關(guān)性原發(fā)性肝癌(HBV-PLC)組32例,以同期35例健康體檢者作為對照組,HBV檢測均為陰性且無肝病史。排除標準:合并其他類型肝炎、脂肪肝、酒精性肝病、伴有嚴重心、腎、肺疾病及腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病等,以及妊娠、哺乳期婦女。CHB組男18例,女18例,平均年齡(54.29±4.98)歲;LC組男18例,女17例,平均年齡(53.34±5.48)歲;HBV-PLC組男17例,女15例,平均年齡(54.26±6.14)歲;健康對照組男17例,女18例,平均年齡(52.75±5.12)歲。各組研究對象性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。所有入組對象均簽署知情同意書,并經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。

    1.2 方法

    1.2.1 淋巴細胞亞群檢測 抽取4組研究對象清晨空腹外周靜脈血5 ml,其中2 ml使用EDTA-K2抗凝,采用美國BD公司流式細胞儀進行淋巴細胞亞群檢測。

    1.2.2 HBV-DNA檢測 無菌采集試驗組清晨、空腹血清標本2~3 ml,置入無菌離心管,室溫保存2 h,1 600 r/min,離心5 min,吸取離心管中血清200 μl,將其轉(zhuǎn)入1.5 ml無菌離心管中。取其中5 μl血清用于DNA提取。采用美國ABI-7300熒光定量PCR(熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng))分析儀進行基因擴增,試劑購自湖南圣湘生物科技有限公司。結(jié)果判斷:HBV DNA<102 copies/ml為陰性。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

    選用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行處理。符合正態(tài)分布計量資料以(x±s)表示,采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用SNK-q檢驗,T淋巴細胞亞群與HBV-DNA相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 試驗組及對照組外周血T淋巴細胞表達水平比較

    CHB組、LC組、HBV-PLC組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+表達水平均低于對照組,CD8+表達水平高于對照組,CHB組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+表達水平均高于LC組、HBV-PLC組,CD8+表達水平均低于LC組、HBV-PLC組,LC組CD4+、CD4+/CD8+表達水平均高于HBV-PLC組,CD8+表達水平低于HBV-PLC組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    2.2 HBV載量與T淋巴細胞亞群分析

    按HBV-DNA載量將試驗組分為HBV-DNA陰性組(HBV-DNA<102 copies/ml,26例)、低載量組(HBV-DNA≥102 copies/ml且<105 copies/ml,41例)及高載量組(HBV-DNA≥105 copies/ml,36例)。

    2.2.1 不同HBV-DNA載量患者淋巴細胞亞群水平比較 高、低載量組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于HBV-DNA陰性組,高載量組CD4+、CD4+/CD8+低于低載量組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    2.2.2 HBV載量與T淋巴細胞亞群的相關(guān)性分析 HBV感染者HBV-DNA載量與CD4+ T淋巴細胞表達水平存在負相關(guān)(r=-0.79,P<0.05),與CD8+T淋巴細胞表達水平存在正相關(guān)(r=0.73,P<0.05),與CD4+/CD8+及CD3+T淋T巴細胞表達水平無相關(guān)性(r=0.35、0.41,P>0.05)。

    3 討論

    有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),人體感染HBV后,病毒不會直接造成肝臟的損傷,肝臟損傷與其介導(dǎo)的免疫損傷有關(guān),HBV抗原引起的免疫應(yīng)答與病情發(fā)展、抗病毒治療停止后病毒的反跳均有密切關(guān)聯(lián),而T淋巴細胞在機體感染HBV后所產(chǎn)生的免疫應(yīng)答中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,因此T淋巴細胞水平的變化在一定程度上反映了機體的免疫水平[6]。機體感染病毒后,其免疫狀態(tài)可通過CD3+ T淋巴細胞反映,CD4+ T淋巴細胞在免疫應(yīng)答中起到清除病毒發(fā)揮中心的作用,CD8+T 淋巴細胞激活和抑制依賴CD4+ T淋巴細胞,表現(xiàn)為CD4+/CD8+比值倒置[7]。

    張健[8]報道乙型肝炎病毒患者的CD4+、CD4+/CD8+低于健康體檢者;孫凱凱等[9]研究發(fā)現(xiàn),HBV感染者免疫功能指標均低于健康人群,其中慢乙肝組免疫功能指標均高于肝硬化組和急慢性肝衰竭組。本研究結(jié)果顯示,與對照組相比,CHB 組、LC組、HBV-PLC組CD3+、CD4+表達水平及CD4+/CD8+均顯著降低,CD8+表達水平均顯著升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),也就是在肝炎、肝硬化、肝癌這一系列疾病發(fā)生及發(fā)展中,CD3+、CD4+表達水平逐漸降低,CD8+表達水平逐漸升高。提示機體感染HBV后,T淋巴細胞亞群表達水平紊亂,從而導(dǎo)致機體細胞免疫功能下降,隨著患者疾病進展,T淋巴細胞亞群紊亂程度加重。

    楊茜等[10-12]在比較HBV感染者T淋巴細胞亞群表達水平與HBV-DNA載量相關(guān)性時發(fā)現(xiàn),隨著患者HBV-DNA載量的提高,CD3+、CD4+T淋巴細胞百分比都有下降的趨勢,而CD8+T淋巴細胞的百分比呈現(xiàn)逐步增加,進而CD4+/CD8+的比值也隨著病毒載量的增加而降低。本研究發(fā)現(xiàn)高、低HBV-DNA載量組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于陰性組,高載量組CD4+、CD4+/CD8+均低于低載量組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。HBV感染者HBV-DNA載量與CD4+ T淋巴細胞表達水平存在負相關(guān)(r=-0.79,P<0.05),與CD8+ T淋巴細胞表達水平存在正相關(guān)(r=0.73,P<0.05),與CD4+/CD8+及CD3+T淋T巴細胞表達水平無相關(guān)性(r=0.35、0.41,P>0.05)。上述研究都證實了HBV的復(fù)制會影響患者T細胞亞群的表達水平,導(dǎo)致免疫功能紊亂,分析其機制可能為機體感染HBV后,HBV-DNA復(fù)制,損耗大量CD4+ T淋巴細胞,而抗原慢性刺激致CD8+ T淋巴細胞表達增加,此HBV感染者免疫功能低于健康體人群。

    綜上所述,機體感染HBV后,體內(nèi)免疫系統(tǒng)功能發(fā)生紊亂,特別是外周血T淋巴細胞亞群比例失衡,而HBV-DNA的高復(fù)制可使T細胞亞群的失衡進一步加重。因此監(jiān)測HBV感染者淋巴細胞亞群對于評估其免疫功能及疾病進展方面,可能具有重要的臨床應(yīng)用價值。

    參考文獻

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    (收稿日期:2020-03-31) (本文編輯:馬竹君)

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