高效液相色譜法測(cè)定降糖藥格列喹酮片中格列喹酮的含量

倫琦星 高曉潔

（1.河南省食品藥品審評(píng)查驗(yàn)中心審評(píng)一科，河南鄭州，450000；2.鄭州市中醫(yī)院制劑室，河南鄭州，450000）

在普通群眾的眼中，糖尿病顧名思義就是尿中的糖分過(guò)高。糖尿病其實(shí)本身并不可怕，可怕的是糖尿病帶來(lái)的嚴(yán)重并發(fā)癥。例如糖尿病足、糖尿病腎病、糖尿病心血管疾病、腦血栓、白內(nèi)障等，這些并發(fā)癥都影響甚至是嚴(yán)重威脅人類的生活質(zhì)量和生命安全[1-2]。目前，治療糖尿病主要為注射胰島素和口服降糖藥物兩種方法。相對(duì)來(lái)說(shuō)，口服降糖藥為更多的糖尿病患者所選擇。格列喹酮片是第二代口服磺脲類降糖藥，在臨床上應(yīng)用廣泛[3-4]?！吨袊?guó)藥典》（2015年版）第二部[5]中規(guī)定，在測(cè)定格列喹酮片中格列喹酮片的含量時(shí)，采用的是紫外-可見(jiàn)分光光度法，對(duì)于該方法的影響因素較多。因此，隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展以及高效液相色譜技術(shù)檢測(cè)的大量普及，提供了一種靈敏度高，簡(jiǎn)便快捷準(zhǔn)確的測(cè)定方法。因此，本文通過(guò)高效液相色譜法來(lái)測(cè)定甲苯磺丁脲片中的甲苯黃丁脲含量。測(cè)定結(jié)果顯示，該本方法具有準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)便，樣品穩(wěn)定性好的特點(diǎn)?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)報(bào)告如下。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

Waters 2695型高效液相色譜儀（Empower 3工作站，2998二極管陣列檢測(cè)器），賽多利斯GL2202i電子分析天平，F(xiàn)-008S型超聲波清洗器（深圳福洋科技集團(tuán)有限公司）。

1.2 試劑

格列喹酮對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100280-201403）；異喹啉物對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，100846-201102），色譜純乙腈（MACKLIN），色譜純磷酸（南京化學(xué)試劑股份有限公司），分析純磷酸二氫鈉（蘇州市久恒化工有限公司），水為超純水。格列喹酮片（吉林金恒制藥股份有限公司，批號(hào)：190501、181002、180701）。

1.3 方法

1.3.1 液相色譜條件

shimadzuInertSustainAQ-C18液相色譜柱（4.6×250mm，5μm），乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)pH至4.5）（65：35）為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為232nm，進(jìn)樣體積為10μL，柱溫箱為 30℃。

1.3.2 對(duì)照品貯備液和對(duì)照品溶液的制備

精密稱取上述的格列喹酮對(duì)照品約25mg，置于100mL容量瓶中，加入適宜的流動(dòng)相，超聲溶解后，用流動(dòng)相稀釋至刻度后作為供試品貯備液待用。取供試品貯備液5mL，置于25mL的容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液待用。

1.3.3 供試品溶液的制備

取格列喹酮片20片，精密稱定后，研細(xì)，取細(xì)粉（以格列喹酮計(jì)50mg）置于100mL的容量瓶?jī)?nèi)，加流動(dòng)相超聲溶解后，用流動(dòng)相定容至刻度，過(guò)濾，取續(xù)濾液10mL～100mL的容量瓶?jī)?nèi)，用流動(dòng)相定容至刻度，待用。

1.4 結(jié)果計(jì)算

以格列喹酮的峰面積按外標(biāo)法計(jì)算，即得。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

取格列喹酮對(duì)照品和異喹啉物對(duì)照品各約10mg，置于同一200mL的容量瓶中，加流動(dòng)相溶解后并定容至相應(yīng)的刻度，按照文中上述的色譜條件進(jìn)樣，實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合《中國(guó)藥典》2015年版的相關(guān)規(guī)定。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 系統(tǒng)適用性色譜圖

2.2 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)

精密量取上述的對(duì)照品貯備液 1mL、2mL、3mL、5mL、10mL分別置于100mL的容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至相應(yīng)的刻度，按照上述的色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄其色譜圖。以峰面積(Y)對(duì)濃度（X）進(jìn)行回歸分析，可得回歸方程為Y=5695X+2142（r=0.9999），結(jié)果表明格列喹酮在21.23～137.52μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取文中上述配置的對(duì)照品溶液，按照文中上述的方法連續(xù)進(jìn)樣六次，記錄其色譜圖，通過(guò)計(jì)算可得RSD為0.57%（n=6），結(jié)果表明，在該設(shè)置的條件下，格列喹酮精密度良好。

2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取批號(hào)為190501的樣品6份，按照“1.3.3”項(xiàng)下的條件配置成供試品溶液，按照文中上述的色譜條件分別進(jìn)樣，根據(jù)格列喹酮的峰面積計(jì)算結(jié)果。結(jié)果顯示供試品的RSD為0.45%（n=6）。結(jié)果顯示供試品重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取批號(hào)為190501的樣品，按照文章“1.3.3”中的條件，配置成供試品溶液，室溫下放置。分別在 0h、2h、5h、9h、12h、24h 分別取樣，取樣后立即進(jìn)樣，記錄其色譜圖，根據(jù)格列喹酮的峰面積計(jì)算其RSD為0.65%。結(jié)果證明，供試品溶液在室溫下24h穩(wěn)定。

2.6 回收率實(shí)驗(yàn)

取已知濃度的、批號(hào)為190501的樣品6份（每份約含格列喹酮50mg），按照文中上述的條件制成供試品溶液，另取格列喹酮對(duì)照品6份，分別加入上述供試品溶液，按設(shè)置的色譜圖條件進(jìn)樣，以格列喹酮的峰面積計(jì)算其回收率。見(jiàn)表1。

2.7 樣品含量測(cè)定

取批號(hào)為190501、181002、180701的三批樣品，按照文中設(shè)置的條件分別制成供試品溶液后，按設(shè)置的條件進(jìn)樣。另取批號(hào)為190501、181002、180701的三批樣品，按照《中國(guó)藥典》（2015年版）中規(guī)定的紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定格列喹酮的含量。將這兩種方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果表明，這兩種實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果基本一致。見(jiàn)表2。

表1 格列喹酮回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 不同實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定格列喹酮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

通過(guò)前期查詢文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，流動(dòng)相有用甲醇、乙腈、水、緩沖鹽等系統(tǒng)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，流動(dòng)相在乙腈和磷酸二氫鈉的組合條件下，得到的色譜峰，峰形較好，出峰時(shí)間較快，分離度符合藥典要求。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)可知，使用液相和紫外檢測(cè)，所得的結(jié)果基本一致。但液相可以更準(zhǔn)確的檢測(cè)比較難分離的物質(zhì)，因此，本文可以為格列喹酮片的含量測(cè)定提供一種新的檢測(cè)方法。