牛肝菌粗多糖抗運(yùn)動(dòng)病作用的原理研究*

王亞濤

（黃河科技學(xué)院公共體育藝術(shù)部，河南 鄭州 450067）

“運(yùn)動(dòng)病”是指特定環(huán)境條件下的各種不規(guī)則運(yùn)動(dòng)所引起的身體反應(yīng)癥狀[1]?！疤囟ōh(huán)境”是指在乘船、飛機(jī)、汽車(chē)等交通工具時(shí)，環(huán)境條件的影響因素是多方面的，有的是汽油、空氣中的特殊氣味，有的是各種外部噪聲，還可能是海浪、周?chē)吧钠鸱兓瘜?duì)視覺(jué)造成的沖擊；所謂的“不規(guī)則運(yùn)動(dòng)”是指顛簸、振動(dòng)、搖晃、擺動(dòng)、旋轉(zhuǎn)等運(yùn)動(dòng)方式；而“身體反應(yīng)的癥狀”則根據(jù)不同的人，“運(yùn)動(dòng)病”會(huì)出現(xiàn)不同反應(yīng)癥狀，如頭暈?zāi)垦?、臉色蒼白、惡心嘔吐、眼花耳鳴，或者出冷汗、昏昏欲睡?！斑\(yùn)動(dòng)病”這種不適應(yīng)性的癥狀產(chǎn)生的原因目前還不是十分清楚，有人認(rèn)為是環(huán)境因素對(duì)聽(tīng)覺(jué)、嗅覺(jué)和視覺(jué)的刺激，也有人認(rèn)為是心理作用，還有研究猜測(cè)是內(nèi)耳內(nèi)人體位置平衡的器官的失調(diào)、植物神經(jīng)功能紊亂等[2-3]。

“運(yùn)動(dòng)病”的治療目前主要通過(guò)鍛煉適應(yīng)能力、服用抗運(yùn)動(dòng)病及鎮(zhèn)靜藥物和日常預(yù)防治療等手段[4]。近年來(lái)，日常預(yù)防和治療手段逐漸被人們所認(rèn)可，通過(guò)調(diào)節(jié)飲食和保健食品的輔助治療取得了一定的效果，其中植物多糖在治療運(yùn)動(dòng)病方面的研究越來(lái)越受到廣泛的關(guān)注[5]。

牛肝菌（Boletus spp.）是牛肝菌科（Boletaceae） 一部分真菌的統(tǒng)稱(chēng)，部分可食用。牛肝菌不僅香味獨(dú)特、營(yíng)養(yǎng)豐富，是不可多得的美味佳肴，同時(shí)其藥用價(jià)值也十分突出，西醫(yī)對(duì)其在糖尿病、抗腫瘤、抗流感病毒[6]的功效十分認(rèn)可，而中醫(yī)則認(rèn)為牛肝菌在治療貧血、體虛、頭暈、耳鳴有特殊功效[7]，這與運(yùn)動(dòng)病的癥狀十分相似。為了解牛肝菌的藥用機(jī)理與生物活性成分，就牛肝菌粗多糖在運(yùn)動(dòng)病防治中的作用機(jī)理進(jìn)行研究，進(jìn)一步探討牛肝菌的食療效功效、探討牛肝菌粗多糖在運(yùn)動(dòng)病治療中的作用。

1 試驗(yàn)方法

1.1 材料與試劑

干牛肝菌子實(shí)體購(gòu)自重慶市謙城鑫泰農(nóng)產(chǎn)品有限公司的“謙誠(chéng)鑫泰”品牌牛肝菌，蟲(chóng)蛀率≤1.0%，雜質(zhì)≤1.0%；水分≤92.0%；灰分≤8.0%。

蒸餾水、95%乙醇、無(wú)水乙醇（分析純） 購(gòu)自西安市灞橋化學(xué)試劑廠；氯仿、正丁醇購(gòu)自山東茂軍化工科技有限公司；無(wú)水乙醚（分析純）、丙酮（化學(xué)純）購(gòu)自河南省新鄉(xiāng)市中原有機(jī)化工有限責(zé)任公司。小鼠5羥色胺 (5-HT)ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

SJBC-1000型立式粉碎機(jī)，臺(tái)州市世金塑膠機(jī)械有限公司；FA2004型電子分析天平，德國(guó)Sartorius公司；JB300-SH數(shù)顯恒速電動(dòng)攪拌器，上海重逢科學(xué)儀器有限公司；DZF-6090型立式真空干燥箱，上海舍巖儀器有限公司；47600小鼠轉(zhuǎn)棒儀，深圳市瑞沃德生命科技有限公司；SA204型Y迷宮實(shí)驗(yàn)分析系統(tǒng)，江蘇賽昂斯生物科技有限公司；BZY-DG-400大小鼠跳臺(tái)記錄系統(tǒng)，東莞博之遠(yuǎn)生物科技發(fā)展有限公司；Allegra X-15R臺(tái)式冷凍離心機(jī)，貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)事業(yè)部。

1.3 牛肝菌粗多糖提取

取牛肝菌干品清洗干凈后切段、烘干、粉碎、過(guò)篩，按照粗多糖水提醇沉法進(jìn)行多糖分離提取[6]。取牛肝菌粉200 g，按料液比1∶10的比例加蒸餾水混合均勻，煎煮2 h；自然冷卻后，靜置沉淀反應(yīng)2 h，重復(fù)3次后進(jìn)行過(guò)濾，將過(guò)濾后得到的煎煮液濃縮至50%得到約1 000 mL的濃縮液，自然冷卻后放入4°C冰箱靜置24 h。采用Sevag法去除蛋白質(zhì)[9]，取出后依次加入200 mL的氯仿、20 mL的正丁醇，用電動(dòng)攪拌器混合15 min后靜置分層，去除水層與溶液交界處的變性蛋白，再加入500 mL的95%乙醇攪拌濃縮，重復(fù)3次后自然冷卻靜置24 h，收集底部沉淀物，依次用無(wú)水乙醇、丙酮和無(wú)水乙醚對(duì)沉淀物進(jìn)行洗滌，除去水分和殘存物，真空干燥即得牛肝菌粗多糖粉末[8]。

1.4 試驗(yàn)分組與試驗(yàn)方法

1.4.1 試驗(yàn)分組

試驗(yàn)用BALB/c小鼠40只，體重 (20±2)g，購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（魯）20190003；按標(biāo)準(zhǔn)小動(dòng)物飼養(yǎng)方式適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分成4組，每組10只。試驗(yàn)開(kāi)始后每天上午定時(shí)給3個(gè)劑量組的小鼠灌胃配制好的牛肝菌粗多糖溶液，高劑量組、中劑量組、低劑量組分別灌胃 400 mg·kg-1、200 mg·kg-1和 100 mg·kg-1濃度的牛肝菌粗多糖溶液；空白對(duì)照組灌胃同樣體積生理鹽水，連續(xù)灌胃1周。

1.4.2 適應(yīng)性訓(xùn)練

1）給藥1小時(shí)后進(jìn)行迷宮適應(yīng)性訓(xùn)練：將小鼠放入Y迷宮中央，讓其自由穿梭于迷宮的3個(gè)臂，適應(yīng)2 min～3 min后開(kāi)始試驗(yàn)。隨機(jī)變換安全區(qū)，電擊小鼠，記錄小鼠逃往安全區(qū)為一次正確反應(yīng)。連續(xù)9次正確反應(yīng)即為學(xué)會(huì)逃避。在每只小鼠試驗(yàn)結(jié)束后，需清理Y迷宮的排泄物。用75%醫(yī)用酒精擦拭，直至酒精揮發(fā)完全再繼續(xù)下一只小鼠的檢測(cè)，以防止氣味影響后續(xù)小鼠的穿梭行為。如小鼠不能學(xué)會(huì)逃避則舍棄不用。

2）跳臺(tái)適應(yīng)性訓(xùn)練：將小鼠放上跳臺(tái)系統(tǒng)的平臺(tái)，觀察小鼠在箱內(nèi)可自由上下適應(yīng)2 min～3 min，然后將跳臺(tái)底部電棒通交流電。小鼠能夠感受到電擊，有正常的跳上平臺(tái)躲避電擊反應(yīng)，訓(xùn)練期內(nèi)如果小鼠未跳下平臺(tái)則舍棄不用。

1.4.3 Y迷宮試驗(yàn)

選擇迷宮適應(yīng)性訓(xùn)練和跳臺(tái)適應(yīng)性訓(xùn)練表現(xiàn)正常的小鼠，在末次適應(yīng)性訓(xùn)練結(jié)束后的第2天上午進(jìn)行Y迷宮試驗(yàn)。首先建立小鼠眩暈?zāi)Ｐ停簩⑿∈笾糜谵D(zhuǎn)棒儀，轉(zhuǎn)速為10 r·s-1，勻速正向旋轉(zhuǎn)60 s急剎停止；立即再進(jìn)行Y迷宮試驗(yàn)，記錄小鼠學(xué)會(huì)逃避所用時(shí)間。

1.4.4 跳臺(tái)試驗(yàn)

下午進(jìn)度小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)。同樣方法建立小鼠眩暈?zāi)Ｐ秃?，立即將小鼠放入跳臺(tái)系統(tǒng)，記錄小鼠第一次從平臺(tái)跳下所需要的時(shí)間（潛伏期），記錄5 min內(nèi)小鼠遭受電擊后跳下平臺(tái)的次數(shù)（錯(cuò)誤次數(shù)）。

1.4.5 小鼠血清神經(jīng)遞質(zhì)含量檢測(cè)

建立小鼠眩暈?zāi)Ｐ秃?，無(wú)需麻醉，將小鼠固定，立即對(duì)頭部下頜處進(jìn)行消毒、采血靜置30 min后進(jìn)行冷凍離心機(jī)，在4℃、3 000 r·min-1離心15 min，將分離后的上清液嚴(yán)格按照小鼠5-羥色胺（5-HT）ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）檢測(cè)試劑盒操作步驟和方法，檢測(cè)血清內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)含量。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 小鼠Y迷宮試驗(yàn)結(jié)果

各組小鼠學(xué)會(huì)逃避所用時(shí)間見(jiàn)表1。

表1 Y迷宮試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 The results of Y maze test

由表1可知，與對(duì)照組比較，灌胃牛肝菌粗多糖后，3個(gè)劑量組的小鼠逃避時(shí)間均有所縮短。說(shuō)明牛肝菌粗多糖對(duì)產(chǎn)生眩暈的小鼠判斷力有積極的影響，對(duì)小鼠的機(jī)械旋轉(zhuǎn)所導(dǎo)致的眩暈有一定的抑制作用。而且灌胃劑量與抑制眩暈的效果有一定的正比例關(guān)系。

2.2 小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)結(jié)果

各組小鼠從平臺(tái)跳下時(shí)間和次數(shù)見(jiàn)表2。

表2 跳臺(tái)試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 The results of jumping test

由表2可知，與對(duì)照組比較，3個(gè)劑量組的小鼠的潛伏期均有顯著延長(zhǎng)，其中高劑量組延長(zhǎng)效果最好；而3個(gè)劑量組的錯(cuò)誤次數(shù)均有明顯少，其中高劑量組的減少作用最為明顯。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，灌胃牛肝菌粗多糖對(duì)機(jī)械旋轉(zhuǎn)所導(dǎo)致的小鼠眩暈有一定的抑制作用，且灌胃劑量與抑制眩暈的效果呈現(xiàn)一定的正比例關(guān)系。

2.3 小鼠血清神經(jīng)遞質(zhì)水平變化

小鼠血清中神經(jīng)遞質(zhì)含量的試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 小鼠血清中神經(jīng)遞質(zhì)含量Tab.3 5-HT contents of in serum of mice

由表3可知，與對(duì)照組比較，3個(gè)劑量組的小鼠的神經(jīng)遞質(zhì)5-HT含量均有所降低，而且中劑量組的效果最為明顯。說(shuō)明灌胃牛肝菌粗多糖能夠顯著降低小鼠血清中神經(jīng)遞質(zhì)5-HT的含量，抑制胃腸神經(jīng)的興奮度，減少惡心嘔吐等運(yùn)動(dòng)病癥狀；同時(shí)，灌胃中等劑量的效果要更好些。

3 結(jié)論

通過(guò)試驗(yàn)，顯示出牛肝菌粗多糖中的生物活性物質(zhì)能夠?qū)ι窠?jīng)功能紊亂有一定的抑制作用，對(duì)小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力有一定的提高。這說(shuō)明牛肝菌粗多糖對(duì)運(yùn)動(dòng)病的作用機(jī)理主要是對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)控作用，包括了對(duì)腦神經(jīng)、中樞神經(jīng)等神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。牛肝菌粗多糖的主要功效在于對(duì)神經(jīng)細(xì)胞過(guò)氧化的保護(hù)作用、對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)作用、新陳代謝和免疫力的調(diào)節(jié)作用等。但由于運(yùn)動(dòng)病的產(chǎn)生原因復(fù)雜，與人的心情、對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力和神經(jīng)系統(tǒng)的反應(yīng)等多種因素有關(guān)。因此，后期還需要對(duì)牛肝菌粗多糖對(duì)血液系統(tǒng)和心理方面的影響進(jìn)行研究，進(jìn)一步探討對(duì)運(yùn)動(dòng)病的診斷和治療方法。