長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液對(duì)小鼠肝臟組織抗氧化能力的試驗(yàn)分析*

蔣 鳴

（江蘇醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院藥學(xué)院，江蘇 鹽城 224500）

長(zhǎng)柄側(cè)耳（Pleurotus spodoleucas） 屬于傘菌目（Agaricales） 側(cè)耳科（Pleurotaceae） 側(cè)耳屬（Pleurotus），包含人體所需的基本營(yíng)養(yǎng)元素和氨基酸等成分，人們?cè)谑秤煤笃淇寡趸饔每梢燥@著提升機(jī)體對(duì)其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，在抵抗腫瘤方面同樣具有顯著的效果[1]。

側(cè)耳屬的大多數(shù)食用菌質(zhì)地較好，味道可口，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值出眾，具有良好的開(kāi)發(fā)潛力。為了進(jìn)一步探究長(zhǎng)柄側(cè)耳在免疫力增強(qiáng)和肝臟組織保護(hù)方面的功能，本次研究以食用菌發(fā)酵后獲取的液體作為研究基礎(chǔ)，以長(zhǎng)柄側(cè)耳菌種發(fā)酵作為研究切入點(diǎn)，探究其對(duì)于高膽固醇、高含量甘油三酯的預(yù)防作用，以便為今后的科學(xué)應(yīng)用提供基礎(chǔ)資料。

1 試驗(yàn)方法

1.1 試驗(yàn)材料

本次研究所選擇的試劑材料包括長(zhǎng)柄側(cè)耳菌株、尿素氮、試劑盒、乙醇等。另外本次研究中的30只雄性小鼠全部購(gòu)于四川大學(xué)醫(yī)學(xué)院，平均體重約30 g。液體培養(yǎng)基由2.00%葡萄糖、1.00%蛋白胨、1.00%酵母浸粉和0.05%硫酸鎂組成。研究所用設(shè)備包括離心機(jī)、超微粉碎機(jī)、電熱水浴鍋、小鼠飼養(yǎng)籠、小鼠游泳池、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等。

1.2 試驗(yàn)步驟

1） 試驗(yàn)內(nèi)容

在錐形瓶中裝入液體培養(yǎng)基，高溫滅菌并接種長(zhǎng)柄側(cè)耳菌株后，在30℃培養(yǎng)箱中得到液體菌種。將液體菌種于200 r·min-1的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，過(guò)濾后獲取長(zhǎng)柄側(cè)耳菌株發(fā)酵液。

選擇30只健康雄性小白鼠，將其中20只按照服用劑量的差異劃分為高劑量組和低劑量組，另外10只作為對(duì)照組，只喂食蒸餾水。高劑量組每日灌胃長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液30 mg·kg-1，低劑量組每日灌胃發(fā)酵液 10 mg·kg-1，對(duì)照組每日灌胃蒸餾水 10 mg·kg-1，持續(xù)時(shí)間均為30 d。

在小鼠30 d最后一次灌胃結(jié)束后，將其尾部掛上5%體重重量的金屬塊，并將其放入游泳試驗(yàn)箱中游泳。水溫30℃，水面高度0.5 m，觀察小鼠的游泳情況。若小鼠水下游泳時(shí)間超過(guò)5 s，則做好記錄。

小鼠最后一次灌胃結(jié)束后，還需要進(jìn)行爬桿力量試驗(yàn)。若小白鼠因肌肉疲勞導(dǎo)致爬桿時(shí)出現(xiàn)掉落情況，記錄開(kāi)始爬桿和掉落的持續(xù)時(shí)間。

耐缺氧試驗(yàn)需在廣口瓶中放入石灰，后將小鼠依次放入瓶中，密閉瓶口，不斷晃動(dòng)廣口瓶，記錄小鼠從放置入瓶到死亡的最終時(shí)間。

2） 測(cè)定內(nèi)容

運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)結(jié)束后分離小鼠血清，測(cè)試其中的肝糖原儲(chǔ)存量；眼球取血測(cè)試血乳酸含量，同時(shí)測(cè)試尿素氮的含量。之后取新鮮的肝組織測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA） 與谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px） 活力。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

研究中的所有數(shù)據(jù)全部采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，其中計(jì)量資料以（±s） 表示，組間結(jié)果比較選擇t進(jìn)行檢驗(yàn)，以P＜0.05時(shí)判定數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抗氧化能力研究

抗氧化能力試驗(yàn)指標(biāo)見(jiàn)表1。

表1 3組小鼠試驗(yàn)后各項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)Tab.1 Statistics of various indicators after the three groups of mice

由表1結(jié)果顯示，3組小鼠在肝糖原、尿素氮、血乳酸、SOD、MDA和GSH-Px幾項(xiàng)指標(biāo)方面具有顯著的差異（P＜0.05），充分說(shuō)明了高劑量組小鼠的抗氧化能力強(qiáng)于低劑量組和一般對(duì)照組，即長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液含量越高，小鼠的抗氧化能力越強(qiáng)。

2.2 抗運(yùn)動(dòng)疲勞能力研究

3組小鼠抗運(yùn)動(dòng)疲勞能力試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 運(yùn)動(dòng)時(shí)間數(shù)據(jù)結(jié)果Tab.2 Results of exercise time data

由表2所示，在抗運(yùn)動(dòng)疲勞能力方面，高劑量組小鼠在游泳時(shí)間、耐缺氧時(shí)間和爬桿時(shí)間3項(xiàng)指標(biāo)顯著優(yōu)于低劑量組小鼠和對(duì)照組小鼠（P＜0.05），說(shuō)明高劑量組小鼠的整體運(yùn)動(dòng)時(shí)間變得更長(zhǎng)，無(wú)論是在游泳還是爬桿的過(guò)程中都具有良好的運(yùn)動(dòng)耐力，進(jìn)而使得其耐缺氧能力時(shí)間加長(zhǎng)。

3 討論

現(xiàn)代人群對(duì)于健康的重視程度越來(lái)越高，與食用菌相關(guān)的研究工作也在不斷深入。特別是信息時(shí)代，人們獲取健康資源的途徑增加，可以深入了解食用菌相關(guān)知識(shí)，更促進(jìn)了食用菌的開(kāi)發(fā)和利用。食用菌不僅具有明確的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，還具一定的藥理活性，在疾病預(yù)防方面效果顯著，符合現(xiàn)代人群的健康發(fā)展理念，也具有較大的市場(chǎng)潛力。

當(dāng)前野生食用菌在市場(chǎng)上出現(xiàn)了供不應(yīng)求的現(xiàn)象。而為了保持生態(tài)平衡，如何有效地開(kāi)發(fā)新類型資源和利用現(xiàn)階段食用菌的生物學(xué)特性，從中篩選出質(zhì)量較好的菌種類型，從其發(fā)酵產(chǎn)物中得到活性成分等研究，也成為了今后工作的重點(diǎn)內(nèi)容。

在長(zhǎng)柄側(cè)耳的相關(guān)研究中，已經(jīng)證實(shí)了其發(fā)酵產(chǎn)物能增強(qiáng)小鼠的機(jī)體免疫力，在抗腫瘤方面也起到了較好效果，可以在一定程度上抑制腫瘤的生長(zhǎng)。如在鄧西貝[1]的研究中提到腫瘤的產(chǎn)生和發(fā)展過(guò)程，常伴隨著機(jī)體免疫系統(tǒng)被破壞后免疫力降低的情況，而胸腺指數(shù)的增加即表明機(jī)體免疫力的提高；小鼠在食用長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液和菌絲后，其胸腺指數(shù)顯著增加，小鼠免疫力有所增強(qiáng)，而小鼠T細(xì)胞與B細(xì)胞增殖能力也得到提升，再次證明了長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液和菌絲在免疫力提高方面起到的作用對(duì)小鼠機(jī)體免疫細(xì)胞的良性影響。

研究結(jié)果也證實(shí)，長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵產(chǎn)物可以被用于相關(guān)的保健品開(kāi)發(fā)工作中?；蛞源藶榛A(chǔ)制造輔助腫瘤治療的藥物，結(jié)合現(xiàn)有動(dòng)物試驗(yàn)，進(jìn)一步明確其抗腫瘤活性。

另外還有研究提出長(zhǎng)柄側(cè)耳對(duì)于高脂血癥、高血糖等也具有良好的控制效果。謝兆莉[2]等的研究中，連續(xù)灌胃45 d長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液后，灌胃給藥的小鼠血清當(dāng)中的膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量?jī)?yōu)于一般小鼠。從這個(gè)角度看，可以在相關(guān)人群的治療過(guò)程中開(kāi)發(fā)研究應(yīng)用其發(fā)酵產(chǎn)物的價(jià)值。

如現(xiàn)代人群中，喜甜食和喜油脂飲食人群占大多數(shù)，而其對(duì)于長(zhǎng)柄側(cè)耳等菌類食品可降低血脂功效認(rèn)識(shí)不足。因此，應(yīng)該在相關(guān)的藥物研發(fā)工作中，加強(qiáng)對(duì)食用菌產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)工作，加大食用菌營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健價(jià)值的宣傳，促進(jìn)其產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和健康產(chǎn)業(yè)的開(kāi)發(fā)。相比于香菇等常見(jiàn)食用菌，長(zhǎng)柄側(cè)耳菌絲培養(yǎng)難度較低，且不容易出現(xiàn)染菌現(xiàn)象，可以通過(guò)工業(yè)化手段大規(guī)模生產(chǎn)，提供環(huán)保健康的綠色食材。

在李燦[3]等的研究中，通過(guò)長(zhǎng)柄側(cè)耳胞外多糖分離純化方法證實(shí)了其對(duì)糖尿病小鼠的降血糖作用，在合理的劑量下有調(diào)節(jié)糖代謝、降低血糖并改善糖尿病癥狀的作用。據(jù)此試驗(yàn)結(jié)果，可證實(shí)長(zhǎng)柄側(cè)耳胞外多糖的藥理活性作用，進(jìn)一步促進(jìn)其保健價(jià)值的開(kāi)發(fā)。

從現(xiàn)有研究中已了解到長(zhǎng)柄側(cè)耳在疾病治療保健方面的應(yīng)用價(jià)值，但長(zhǎng)柄側(cè)耳在肝臟組織抗氧化方面的作用也不容小覷。對(duì)于人體而言，要想避免身體機(jī)能快速老化失去運(yùn)動(dòng)能力，最重要的就是讓肝臟始終保持活力。

肝臟可以產(chǎn)生身體活動(dòng)所需要的能量，提高機(jī)體抵抗力。但肝臟極易消耗氧氣，且容易產(chǎn)生大量自由基，當(dāng)肝臟清除自由基的能力不足時(shí)，就會(huì)導(dǎo)致肝功能下降[4-5]?，F(xiàn)代科學(xué)有關(guān)抗衰老和抗氧化的理論中，越來(lái)越多的研究也證實(shí)人體衰老與多種疾病的產(chǎn)生與自由基形成之間具有密切聯(lián)系。且自由基的危害作用還涉及肌肉的生理活性和疲勞的產(chǎn)生，因此可以抑制自由基產(chǎn)生而起到抗氧化作用。

試驗(yàn)結(jié)果中，3組小鼠在肝糖原、尿素氮、血乳酸、SOD、MDA和GSH-Px幾項(xiàng)指標(biāo)中均具顯著的差異。說(shuō)明高劑量組小鼠的抗氧化能力強(qiáng)于低劑量組和一般對(duì)照組，即食用菌酵液含量越高，小鼠的抗氧化能力越強(qiáng)。在抗運(yùn)動(dòng)疲勞能力方面，高劑量組小鼠在游泳時(shí)間、耐缺氧時(shí)間和爬桿時(shí)間3項(xiàng)指標(biāo)上顯著優(yōu)于低劑量組小鼠和對(duì)照組小鼠。說(shuō)明高劑量組小鼠的整體運(yùn)動(dòng)時(shí)間變得更長(zhǎng)，無(wú)論是在游泳還是爬桿的過(guò)程中都具有良好的運(yùn)動(dòng)耐力，進(jìn)而使得其耐缺氧能力時(shí)間加長(zhǎng)。

盡管本次研究的結(jié)果只提供了一定的參考指導(dǎo)，但是對(duì)于今后的食用菌保健應(yīng)用領(lǐng)域來(lái)說(shuō)，也為其提供了更為豐富的理論基礎(chǔ)。今后的研究設(shè)計(jì)也應(yīng)考慮如何最大限度地發(fā)揮食用菌發(fā)酵液的抗疲勞、抗氧化與其他保健作用優(yōu)勢(shì)。綜上所述，長(zhǎng)柄側(cè)耳發(fā)酵液可以提升小鼠的肝臟組織抗氧化能力，在抗運(yùn)動(dòng)疲勞方面也能起到穩(wěn)定的效果，據(jù)此可進(jìn)行深層研究，以開(kāi)發(fā)其潛在的藥理活性。