三種側(cè)耳提取物抗氧化活性及對(duì)小鼠免疫功能的影響

王曉巖 劉芳芳 包海鷹

（1長春科技學(xué)院，吉林長春130600；2吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌教育部工程研究中心，吉林長春130118）

糙皮側(cè)耳（Pleurotus ostreatus）又稱平菇，阿魏側(cè)耳（Pleurotus nebrodensis）又稱白靈菇，金頂側(cè)耳（Pleurotus citrinipileatus Sing）又稱榆黃蘑，三種真菌均隸屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycota），傘菌綱（Agaricomycetes），傘菌目（Agaricales），側(cè)耳科（Pleurotaceae），側(cè)耳屬（Pleurotus）[1-4]。側(cè)耳屬真菌具有藥理活性，對(duì)人體具有養(yǎng)身保健作用，是一類良好的具有極大藥用潛質(zhì)和食用價(jià)值的食用菌[5-6]，側(cè)耳屬真菌具有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，包括多糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪酸等，這些生物活性成分具有提高機(jī)體免疫力、延緩衰老、抗疲勞、抗腫瘤、調(diào)節(jié)血糖、調(diào)節(jié)血脂、化學(xué)預(yù)防[7-9]等重要作用。筆者以三種側(cè)耳子實(shí)體為材料研究其不同溶劑提取物的抗氧化活性，并測定了其水提物對(duì)小鼠血清中細(xì)胞因子表達(dá)水平，以評(píng)價(jià)其免疫功能。

1 材料與方法

1.1 供試材料

糙皮側(cè)耳子實(shí)體、阿魏側(cè)耳子實(shí)體及金頂側(cè)耳子實(shí)體均由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)名優(yōu)參茸中心提供。

試驗(yàn)動(dòng)物：健康昆明小鼠110只，雌性，體重（22±2）g，年齡6～8周，由長春生物制品有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK-（吉）2017-0075。

1.2 主要試劑與儀器

苦味酸購自安美實(shí)驗(yàn)器材有限公司；胸腺肽腸溶片購自西安迪賽生物藥業(yè)有限責(zé)任公司；總抗氧化能力檢測試劑盒（ABTS法）及小白細(xì)胞介素2（IL-2）酶聯(lián)免疫試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所；酶標(biāo)儀（TECAN公司Nano Quant infinite 200PRO）。

1.3 成分提取[10]

取干燥的糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳與金頂側(cè)耳子實(shí)體各300 g，粉碎后用1 L石油醚40℃、二氯甲烷50℃、乙酸乙酯55℃、甲醇60℃回流提取3次，減壓回收各有機(jī)溶劑，得石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇浸膏。

1.4 抗氧化試驗(yàn)

將1.3中得到的提取物分別用80%的乙醇配成濃度為0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL的溶液，參照文獻(xiàn)[11]的方法測定其DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基清除能力，根據(jù)文獻(xiàn)[12]的方法測定ABTS自由基清除能力。分別以相同濃度的BHT（抗氧劑264）和Trolox（托倫試劑）為對(duì)照。

1.5 三種側(cè)耳屬水提物對(duì)小鼠血清中IL-2、IFN-γ（干擾素）、SOD（超氧化物歧化酶）和GSH-Px（谷胱甘肽過氧化物酶）的影響[13]

水提物制備：將粉碎的糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳及金頂側(cè)耳子實(shí)體各150 g，加入1 L蒸餾水，65℃提取2 h，重復(fù)3次，合并濾液，減壓濃縮，冷凍干燥得水提物。小鼠分組及給藥：將110只小鼠分組，每組10只。將糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳與金頂側(cè)耳水提物分別設(shè)高（12.5 mg/kg）、中（6.25 mg/kg）、低（3.125 mg/kg）3個(gè)劑量濃度（中劑量組根據(jù)人給藥量的體表面積與小鼠等效計(jì)量換算得到[14]）。

小鼠血清中的 IL-2、IFN-γ、SOD和GSH-Px水平的影響：小鼠取血前一晚禁食不禁水，待眼球取血后，將離心備用的血清按照試劑盒說明書檢測待測指標(biāo)，顯色終止后450 nm處測量OD值，繪制線性標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算各項(xiàng)指標(biāo)實(shí)際濃度并分析。

圖1 糙皮側(cè)耳提取物清除DPPH自由基能力

圖2 阿魏側(cè)耳提取物清除DPPH自由基能力

圖3 金頂側(cè)耳提取物清除DPPH自由基能力

圖4 糙皮側(cè)耳提取物清除ABTS自由基能力

2 結(jié)果與分析

2.1 三種側(cè)耳屬提取物的抗氧化能力

2.1.1 各提取物對(duì)DPPH自由基清除作用

由圖1、圖2、圖3可知，糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳與金頂側(cè)耳不同溶劑的提取物均有一定清除DPPH自由基能力。其中，在金頂側(cè)耳中，乙酸乙酯提取物清除DPPH自由基能力最高，也是三種側(cè)耳屬所有試驗(yàn)組中清除DPPH自由基能力最高的；甲醇提取物次之，二氯甲烷提取物較弱，石油醚提取物最弱。糙皮側(cè)耳與阿魏側(cè)耳的乙酸乙酯提取物清除DPPH自由基能力也是各側(cè)耳屬中最高，石油醚層提取物在各側(cè)耳屬中最弱；糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳與金頂側(cè)耳乙酸乙酯提取物在質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時(shí)，DPPH自由基清除率分別達(dá)78.58%、81.79%和91.45%。金頂側(cè)耳的乙酸乙酯提取物IC50為0.172 mg/mL，清除效果明顯高于其他溶劑提取物，并且高于陽性對(duì)照；阿魏側(cè)耳乙酸乙酯提取物IC50為0.186 mg/mL，清除效果較明顯，效果弱于金頂側(cè)耳及陽性對(duì)照，但高于糙皮側(cè)耳（糙皮側(cè)耳乙酸乙酯提取物IC50為0.206 mg/mL）。

2.1.2 對(duì)ABTS自由基清除作用

由圖4、圖5、圖6可知，糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳與金頂側(cè)耳相同提取物在相同濃度下對(duì)ABTS的清除能力相近，其中乙酸乙酯提取物的清除能力最強(qiáng)，糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳與金頂側(cè)耳乙酸乙酯提取物在質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時(shí)，ABTS自由基清除率分別為55.72%、56.37%和65.24%，糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳與金頂側(cè)耳乙酸乙酯提取物IC50分別為0.636 mg/mL、0.581 mg/mL和0.472 mg/mL，其余溶劑提取物對(duì)ABTS清除率很弱，IC50均大于1 mg/mL。

2.2 三種側(cè)耳屬水提物對(duì)小鼠血清IL-2、IFN-γ、SOD和GSH-Px表達(dá)水平的影響

結(jié)果表明，小鼠灌胃不同劑量的糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳與金頂側(cè)耳水提物20 d后，金頂側(cè)耳水提物3個(gè)劑量處理的小鼠血清中IL-2表達(dá)水平明顯高于其他側(cè)耳屬的對(duì)應(yīng)劑量及陽性對(duì)照；阿魏側(cè)耳高劑量處理的小鼠血清中IL-2表達(dá)水平高于糙皮側(cè)耳高劑量及陽性對(duì)照；糙皮側(cè)耳高劑量處理的小鼠血清中IL-2表達(dá)水平略低于陽性對(duì)照；但所有劑量均與陰性對(duì)照有極顯著差異。金頂側(cè)耳與阿魏側(cè)耳高劑量處理的小鼠血清中IFN-γ表達(dá)水平均高于陽性對(duì)照，糙皮側(cè)耳高劑量處理的小鼠血清中IFN-γ表達(dá)水平略低于陽性對(duì)照，但高于陰性。金頂側(cè)耳與阿魏側(cè)耳高劑量處理的小鼠血清中GSH-Px表達(dá)水平略高于陽性，糙皮側(cè)耳高劑量處理的小鼠血清中GSH-Px低于陽性組，但明顯高于陰性組。三種側(cè)耳不同劑量處理小鼠血清中SOD表達(dá)水平與陽性組相差無幾，但均高于陰性組。

圖5 阿魏側(cè)耳提取物清除ABTS自由基能力

圖6 金頂側(cè)耳提取物清除ABTS自由基能力

圖7 三種側(cè)耳屬水提液對(duì)小鼠血清中IL-2水平的影響

圖8 三種側(cè)耳屬水提液對(duì)小鼠血清中IFN-γ水平的影響

圖9 三種側(cè)耳屬水提液對(duì)小鼠血清中GSH-Px水平的影響

圖10三種側(cè)耳屬水提液對(duì)小鼠血清中SOD水平的影響

3 小結(jié)與討論

在清除DPPH自由基抗氧化能力中，糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳與金頂側(cè)耳均有不同程度的抗氧化能力，并且在質(zhì)量范圍內(nèi)均呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，其中糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳與金頂側(cè)耳乙酸乙酯提取物對(duì)DPPH及ABTS的清除率最好。這三種側(cè)耳屬真菌能夠誘導(dǎo)IFN-γ、SOD和GSH-Px等細(xì)胞因子表達(dá)水平，其中金頂側(cè)耳水提物效果明顯，從而提高機(jī)體免疫力，可預(yù)防癌癥、高血壓、糖尿病等疾病的發(fā)生[15-16]。

因此，糙皮側(cè)耳、阿魏側(cè)耳與金頂側(cè)耳有開發(fā)為抗氧化產(chǎn)品或免疫功能產(chǎn)品的良好前景。