湘西北某規(guī)?；i場母豬子宮內(nèi)膜炎金黃色葡萄球菌的分離鑒定及耐藥性分析

李淑紅 吳夢婷 彭敬 王京仁

摘要：為查明湘西北某規(guī)模化豬場母豬子宮內(nèi)膜炎的主要病原菌，對8頭患病母豬子宮化膿性分泌物中病原菌采用培養(yǎng)、鑒別、純化、革蘭氏染色和生化試驗(yàn)等方法進(jìn)行分離與鑒定;并對分離菌采用藥物紙片瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。結(jié)果表明，分離出8株金黃色葡萄球菌。28種抗菌藥中金黃色葡萄球菌對頭孢唑啉、多黏菌素B、丁胺卡那等3種藥物表現(xiàn)為中介，中介率為10.71%，金黃色葡萄球菌對其他25種藥物均產(chǎn)生耐藥性，耐藥率為89.29%。說明金黃色葡萄球菌是引起該場母豬子宮內(nèi)膜炎化膿感染的主要致病菌之一，臨床上金黃色葡萄球菌對多種抗菌藥產(chǎn)生了耐藥性，應(yīng)引起高度重視。

關(guān)鍵詞：母豬子宮內(nèi)膜炎;金黃色葡萄球菌;分離鑒定;耐藥性;藥敏試驗(yàn)

中圖分類號(hào)： S855.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2020）18-0175-02

收稿日期：2019-11-22

基金項(xiàng)目：常德市農(nóng)業(yè)生物大分子研究中心資助項(xiàng)目;湖南省科技廳科技特派員項(xiàng)目（編號(hào)：2015NK2116）。

作者簡介：李淑紅（1964—），女，山東禹城人，碩士，教授，主要從事動(dòng)物病癥防治與保健方面的教學(xué)與研究。E-mail：752635080@qq.com。

母豬子宮內(nèi)膜炎是母豬繁殖障礙最主要的細(xì)菌感染性疾病之一，主要由致病微生物入侵母豬子宮黏膜表層或深層，引起子宮黏膜發(fā)生黏液性或化膿性炎癥[1]，如不及時(shí)治療和控制會(huì)給養(yǎng)豬場造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。湘西北某規(guī)模化豬場發(fā)生多頭母豬子宮內(nèi)膜炎病情，為查明引起該豬場母豬子宮內(nèi)膜炎化膿感染的主要病原菌，對患有子宮內(nèi)膜炎的母豬子宮化膿性分泌物進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)，分析病因，以期為該豬場母豬子宮內(nèi)膜炎提供防治方案。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

1.1.1?病料來源

湘西北某規(guī)?；i場患有子宮內(nèi)膜炎化膿癥狀明顯的8頭母豬。

1.1.2?試劑

營養(yǎng)肉湯（NB）、營養(yǎng)瓊脂（NA）、甘露醇氯化鈉瓊脂、血液營養(yǎng)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基（MAC）、伊紅-美蘭培養(yǎng)基（EMB）、SS瓊脂培養(yǎng)基、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、葡萄菌屬細(xì)菌生化鑒定管，結(jié)晶紫、番紅、碘液、香柏油、95%乙醇等，均由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)。

1.1.3?藥敏紙片

環(huán)丙沙星、米諾環(huán)素、氧氟沙星、氨芐西林、慶大霉素、四環(huán)素、紅霉素、丁胺卡那、頭孢他定、頭孢哌酮、萬古霉素、頭孢曲松、頭孢呋辛、頭孢唑啉、復(fù)方新諾明、諾氟沙星、麥迪霉素、新霉素、羧芐西林、青霉素、頭孢拉定、苯唑西林、克林霉素、多西環(huán)素、哌拉西林、頭孢氨芐、卡那霉素、多黏菌素B等28種常見藥敏試紙，均購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.1.4?主要儀器

電子天平（BS223S），購自北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;凈化工作臺(tái)（JH-1），購自北京科偉永興儀器有限公司;立式壓力蒸汽滅菌器（BXM-30R），購自上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司;生化培養(yǎng)箱（LRH-150），購自上海一恒科學(xué)儀器有限公司等。

1.2?試驗(yàn)方法

1.2.1?病料的采集

選取患病癥狀明顯的8頭母豬，對外陰消毒后采用無菌棉拭子插入病豬陰道，旋轉(zhuǎn)取其膿汁，迅速放入裝有滅菌營養(yǎng)肉湯的8支試管內(nèi)，封蓋貼標(biāo)簽，帶回實(shí)驗(yàn)室放入37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)18～24 h。

1.2.2?細(xì)菌的分離培養(yǎng)

取少量用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h的菌液，分別接種于營養(yǎng)瓊脂、甘露醇氯化鈉瓊脂、血液營養(yǎng)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基、伊紅-美蘭培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基、亞硫酸鉍瓊脂等培養(yǎng)基中，置于 37 ℃ 恒溫箱中培養(yǎng)18～24 h，觀察細(xì)菌生長結(jié)果及形態(tài)特征。

1.2.3?革蘭氏染色

挑取培養(yǎng)基上黃色單菌落涂片，革蘭氏染色后，在顯微鏡下觀察菌體大小、染色特征等。

1.2.4?生化試驗(yàn)

將疑似金黃色葡萄球菌接種至葡萄菌屬細(xì)菌生化鑒定管中，37 ℃恒溫箱培養(yǎng)18～24 h，觀察并記錄結(jié)果。

1.2.5?藥敏試驗(yàn)

選28種藥物敏感試紙，采用紙片瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)[2]，記錄結(jié)果?？咕幖埰N類、含藥量及判定標(biāo)準(zhǔn)均參照文獻(xiàn)，藥物敏感性判定標(biāo)準(zhǔn)分為3級，分別為敏感（S）、中介（I）和耐藥（R）[3]。

2?結(jié)果與分析

根據(jù)細(xì)菌在各培養(yǎng)基上的形態(tài)特征、生化反應(yīng)及革蘭氏染色結(jié)果[4-5]，初步判斷該豬場8頭母豬病樣分離的細(xì)菌為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、綠膿桿菌等4種。其中，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌檢出率為100.0%，沙門氏菌的檢出率為40.0%，綠膿桿菌檢出率為12.5%。

2.1?金黃色葡萄球菌分離鑒定結(jié)果

疑似金黃色葡萄球菌在營養(yǎng)瓊脂、甘露醇氯化鈉瓊脂和血液營養(yǎng)瓊脂平板上均長出表面濕潤、圓形突起、光滑的黃色菌落，在血液營養(yǎng)瓊脂平板上有溶血現(xiàn)象。菌株生化反應(yīng)結(jié)果顯示，細(xì)菌對蕈糖、甘露醇、甘露糖、乳糖、果糖、麥芽糖、蔗糖、硝酸鹽等的反應(yīng)均為陽性，對尿素、木糖等的反應(yīng)均為陰性。顯微鏡下觀察呈紫色，成單、成雙、多數(shù)呈葡萄串狀排列，為革蘭氏陽性球菌，結(jié)合文獻(xiàn)[4-5]符合金黃色葡萄球菌的特征。

2.2?藥敏試驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，金黃色葡萄球菌對頭孢唑啉、多黏菌素B、丁胺卡那等3種藥物的敏感性為中介，中介率為10.71%，在臨床中可加大使用劑量;青霉素等其他25種藥物對金黃色葡萄球菌產(chǎn)生耐藥性，耐藥率為89.29%。

3?討論

金黃色葡萄球菌是自然界中常見的革蘭氏陽性菌，主要引起局部組織化膿性感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎等全身感染，也是引起母豬子宮內(nèi)膜炎的主要致病菌[6]。

本次試驗(yàn)在化膿癥狀明顯的8頭母豬中均分離檢測到金黃色葡萄球菌，檢出率為100.0%，說明金黃色葡萄球菌是引起該規(guī)?；i場母豬子宮內(nèi)膜炎化膿感染的主要致病菌之一。近年來，由于抗菌藥物在豬場廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致金黃色葡萄球菌耐藥性逐年增加，菌株耐藥性惡化，致使金黃色葡萄球菌導(dǎo)致的病害預(yù)防和治療難度加大[7]。試驗(yàn)選用的28種藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明，分離出的8株金黃色葡萄球菌對25種抗菌藥產(chǎn)生耐藥性，只對頭孢唑啉、多黏菌素B、丁胺卡那等3種藥物為中度敏感，這與孫龍等報(bào)道藥敏試驗(yàn)結(jié)果[6，8]存在差異。據(jù)調(diào)查該豬場長期使用青霉素類、頭孢類及喹諾酮類等抗菌藥用于防治母豬子宮內(nèi)膜炎，隨時(shí)間推移，療效不佳，通過試驗(yàn)可知該豬場病豬分離的金黃色葡萄球菌對多種抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性，且耐藥率高達(dá)89.29%，應(yīng)在獸醫(yī)臨床引起高度重視。在依靠抗菌藥物治療患子宮內(nèi)膜炎的病豬時(shí)一定不能盲目用藥，應(yīng)分離病原菌做藥物敏感性試驗(yàn)，篩選敏感藥物，做到選藥準(zhǔn)確，藥物劑量和療程達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。另外，在母豬生產(chǎn)中使用藥物進(jìn)行產(chǎn)后保健時(shí)應(yīng)避免長期使用某一種抗菌藥物，遵循交叉用藥、輪換用藥和配伍用藥的原則，盡量減少細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生[6]， 也可選用有抗菌消炎作用的中草藥用于母豬的生產(chǎn)保健提高抗病性，這樣才能更有效地預(yù)防和治療規(guī)?；i場母豬子宮內(nèi)膜炎，提高豬場的經(jīng)濟(jì)效益。

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