比色法測(cè)定崗梅根總皂苷含量

劉群娣

【摘 要】 目的：建立比色法測(cè)定崗梅根中總皂苷含量，為崗梅根的質(zhì)量控制提供依據(jù)。 方法：以人參皂苷Re為對(duì)照品、香草醛-高氯酸為顯色劑，在545 nm波長(zhǎng)下測(cè)定。 結(jié)果：對(duì)照品在皂苷質(zhì)量為0.0624 mg至0.1664 mg的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，加樣回收試驗(yàn)與精密度的RSD分別為1.83%與0.76%，方法學(xué)驗(yàn)證的各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求。5批崗梅根總皂苷平均含量分別為2.93%、2.87%、2.21%、2.34%、1.93%。結(jié)論：方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，穩(wěn)定性、重復(fù)性好，可以作為崗梅根及其制劑質(zhì)量檢測(cè)方法之一。

【關(guān)鍵詞】 比色法;崗梅根;總皂苷

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2020）15-0047-03

Abstract： ObjectiveTo establish a colorimetric analysis method for the quantitative determination of total saponins in Radix Ilicis Asprellae （RIA）. Methods The ginsenoside Re was used as the reference substance and Vanillin- perchloric acid was taken as the chromogenic agent， detected at the wavelength of 545 nm. Results The reference substance showed a good linear relationship at a range of 0.0624 mg to 0.1664 mg. The RSD of the recoveries and precision were 1.83% and 0.76%. All the indexes of the methodological investigations meet the requirements. Conclusion The method is simple and accurate. It may be used for quality control of RIA and its preparations.

Keywords：Colorimetric Analysis; Radix Ilicis Asprellae; Total Saponins

崗梅為冬青科植物梅葉冬青Ilex asprella （Hook. et Arn.） Champ. ex Benth. 的干燥根。全年均可采挖，主產(chǎn)于廣東、廣西[1]。本品性味苦寒，有清熱解毒、生津活血的功效，主治熱病、燥渴、熱瀉、咳血、喉痛等癥[2]。據(jù)廣東韶關(guān)地區(qū)藥檢所[3]113抗菌試驗(yàn)表明，崗梅根對(duì)乙型溶血性鏈球菌有輕度抑制作用，對(duì)離體豚鼠心臟注射本品，發(fā)現(xiàn)冠脈流量和心收縮力有所增加。在臨床上也有崗梅根用于防治各類感染的報(bào)道[4]。據(jù)麥海燕等[5]對(duì)崗梅制劑的體外抗菌試驗(yàn)表明，其對(duì)上呼吸道感染常見致病菌有較好的抑菌作用。崗梅是常用的涼茶原料，常與其他清熱涼血的藥材配伍制成合劑使用，如著名的成藥王老吉、六合茶均以崗梅作為主要成分。

崗梅根中含有三萜皂苷（其中包括對(duì)-香豆酰三萜類[6]、齊敦果酸和熊果酸[7]）、內(nèi)酯、生物堿、氨基酸、赪酮甾醇、赪酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷、丁香脂素、丁香脂素-O-β-D葡萄糖苷和19-去氫烏索酸等[8]，其中皂苷類物質(zhì)可能為本品藥理作用的基礎(chǔ)。而對(duì)于崗梅總皂苷的測(cè)定方法和結(jié)果，目前僅見馮達(dá)星等[9]以大孔樹脂富集純化崗梅根總皂苷。文中采取比色法作為測(cè)定方法，對(duì)崗梅根藥材的總皂苷進(jìn)行含量測(cè)定。

1 TU-1810紫外分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn);電子恒溫水浴鍋，汕頭市醫(yī)用設(shè)備廠生產(chǎn); OFY-500藥材粉碎機(jī)，溫嶺市大德中藥機(jī)械有限公司生產(chǎn);AG285電子分析天平，Mettler toledo公司生產(chǎn)。人參皂苷Re，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110754-200320。試劑均為分析純。

崗梅根為廣州的零售藥店收集，產(chǎn)地見表1。

將崗梅根用中藥粉碎機(jī)打碎至粉末狀，于陰涼處封裝保存，供含量測(cè)定用。

2 方法

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Re 對(duì)照品5.2 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制得對(duì)照品溶液，濃度為0.2080 mg/mL。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱取崗梅根粉末約1g，用濾紙包裹，置于索氏提取器中，用20 mL甲醇冷浸過夜。將甲醇浸泡液引流入圓底燒瓶中并補(bǔ)加50 mL新鮮甲醇，回流4 h。合并提取器和圓底燒瓶中的甲醇液，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿，水浴蒸干。殘?jiān)?5 mL蒸餾水分3次溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗。用水飽和正丁醇萃取4次，每次30 mL。合并4次正丁醇萃取液，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿，水浴蒸干。殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0 mL，制得供試品溶液。

2.3 測(cè)定方法 精密量取0.3 mL供試品溶液，置于60 ℃水浴加熱并吹干溶劑。加入0.2 mL的5%香草醛-冰醋酸溶液（新鮮配制）和0.8 mL高氯酸，蓋塞搖勻，置于60 ℃水浴加熱15 min。取出試管并立即用冰水浴冷卻，加入5 mL冰醋酸稀釋，搖勻。自冰水浴冷卻算起30 min后上機(jī)測(cè)量吸光度，以545 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。每次測(cè)量并行空白，自“吹干溶劑”后平行操作。

2.4 吸收光譜的測(cè)定 取一定量的對(duì)照品溶液及按照2.2的方法制備的供試品溶液，按照2.3節(jié)的方法顯色，于400～700 nm進(jìn)行光譜掃描。結(jié)果對(duì)照品溶液與供試品溶液均在545 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故確定測(cè)定波長(zhǎng)為545 nm。

2.5 方法學(xué)驗(yàn)證

2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 按照最佳吸光度區(qū)間設(shè)計(jì)樣品濃度區(qū)間，取6個(gè)濃度點(diǎn)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL，按2.3節(jié)的方法顯色，在545 nm下測(cè)量吸光度，以吸光度為橫坐標(biāo)、皂苷加入質(zhì)量為縱坐標(biāo)作圖，并計(jì)算回歸方程。其結(jié)果如圖2所示。

2.5.3 精密度試驗(yàn) 取編號(hào)D的崗梅根粉末，精密稱取6份，每份約1 g，按2.2節(jié)的方法制備，每份取樣0.3 mL，按2.3節(jié)的方法顯色，在545 nm下測(cè)量吸光度。測(cè)量結(jié)果如表3所示。

按表3結(jié)果計(jì)算，該批次6份樣品的皂苷含量平均值為2.34%，RSD為0.76%。說明用此法測(cè)定崗梅根總皂苷的含量精密度高，完全能滿足樣品分析的要求。

3 結(jié)果

藥材的測(cè)定 準(zhǔn)確吸取供試品溶液0.3 mL，按2.3節(jié)的方法顯色，在545 nm下測(cè)量吸光度，測(cè)定總皂苷的含量。結(jié)果見表4。

4 討論與結(jié)論

4.1 香草醛-高氯酸是常用的皂苷顯色反應(yīng)體系。以此作為比色法的基礎(chǔ)，以人參皂苷Re、黃芪甲苷等穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為對(duì)照品，在同類分析研究中均已建立起成熟、穩(wěn)定的紫外測(cè)定方法，該法在百合[10]、酸棗仁[11]、甘草[12]、屏邊三七[13]等藥材的總皂苷含量測(cè)定中均得到深入的研究與應(yīng)用。

4.2 實(shí)驗(yàn)探索了加熱時(shí)間、加熱溫度、檢測(cè)波長(zhǎng)和檢測(cè)時(shí)間等4個(gè)對(duì)顯色測(cè)定影響較大的因素。最后選定顯色反應(yīng)條件和檢測(cè)條件為60℃加熱15 min、在545 nm下測(cè)定吸光度，放置30 min后測(cè)定，即如2.3節(jié)所述方法，在此法下方法學(xué)驗(yàn)證的穩(wěn)定性、重復(fù)性最好。

崗梅有明確的藥理活性，在廣東地區(qū)作為涼茶的主要原料已使用了幾百年。然而，崗梅并未收載到《中國(guó)藥典》（2015 年版）等國(guó)家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為地方標(biāo)準(zhǔn)《廣東省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（第一冊(cè)）（2004 年版），此標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀、鑒別、檢查項(xiàng)，并無(wú)含量測(cè)定內(nèi)容[3]111。比色法測(cè)定崗梅根總皂苷含量，結(jié)果良好，方法學(xué)驗(yàn)證數(shù)據(jù)符合要求，可作為崗梅有效部位含量測(cè)定的補(bǔ)充。通過進(jìn)一步研究，將此法擴(kuò)展到崗梅根的相關(guān)制劑的總皂苷的測(cè)定中，為崗梅根及相關(guān)制劑的質(zhì)量控制提供更多有價(jià)值的方法與成果。

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（收稿日期：2020-04-13 編輯：劉斌）