電針“三陰交-懸鐘”對(duì)類(lèi)痛經(jīng)模型大鼠子宮內(nèi)皮素（ET）、一氧化氮（NO）的影響

辛思源 郭建恩 徐大釗 林鳳 李春華

摘 要：通過(guò)觀察電針對(duì)類(lèi)痛經(jīng)模型大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)及子宮內(nèi)皮素（ET）、一氧化氮（NO）的影響，探討針刺緩解胞宮疼痛的作用機(jī)制及“三陰交-懸鐘”的特異性。得出結(jié)論：電針“三陰交-懸鐘”能夠調(diào)節(jié)子宮ET及其ET/NO的比值，以此緩解子宮平滑肌痙攣的狀態(tài)，來(lái)緩解胞宮疼痛，且針刺“三陰交-懸鐘”治療痛經(jīng)具有特異性。

關(guān)鍵詞：電針;三陰交-懸鐘;痛經(jīng);扭體反應(yīng);內(nèi)皮素;一氧化氮

臨床上常用相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”來(lái)治療痛經(jīng)。當(dāng)前，運(yùn)用電針調(diào)節(jié)類(lèi)痛經(jīng)大鼠ET、NO的相關(guān)研究較少，因而，本實(shí)驗(yàn)采用電針模型大鼠相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”、三陰交穴、懸鐘穴以及非穴，觀察子宮ET與NO的水平，用以初步探究電針相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”緩解胞宮疼痛的內(nèi)在機(jī)制，初步探討相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”的特異性。

一、實(shí)驗(yàn)材料

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組方法

本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選用48只清潔級(jí)健康雌性SD大鼠，鼠齡為3個(gè)月，體重為（240±20）g，性成熟且未交配。飼養(yǎng)期給予普通清潔級(jí)飼料和自由飲水，室溫為（20±1）℃，濕度為（45±5）%，日光燈照射。采用完全隨機(jī)法將大鼠分為8組，即對(duì)照組、模型組、三陰交組、懸鐘組、“三陰交-懸鐘”組、非穴組，每組8只。

（二）主要儀器與實(shí)驗(yàn)試劑

G6805-Ⅱ型電針治療儀;一次性針灸針;苯甲酸雌二醇注射液;縮宮素注射液;內(nèi)皮素（ET）ELISA試劑盒;一氧化氮（NO）試劑盒。

（三）模型制備

選擇動(dòng)情間期的大鼠來(lái)制備實(shí)驗(yàn)性類(lèi)痛經(jīng)模型。模型組、各電針組：連續(xù)10d皮下注射苯甲酸雌二醇，第1天和第10天每只大鼠皮下給藥0.5mg，余下日為0.2mg，待第10天注射苯甲酸雌二醇1h后給予腹腔注射縮宮素0.2mL/只。對(duì)照組：每日每只大鼠皮下注射同等劑量的生理鹽水，待第10天皮下注射生理鹽水1h后給予腹腔注射生理鹽水02mL/只。

（四）實(shí)驗(yàn)取穴及針刺方法

實(shí)驗(yàn)取穴：根據(jù)大鼠的生理特點(diǎn)以及形態(tài)和解剖位置，引用《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》穴位定位標(biāo)準(zhǔn)，選取“相對(duì)穴”三陰交-懸鐘穴。三陰交穴位于大鼠后肢內(nèi)踝尖上10mm;懸鐘穴位于大鼠后肢外踝尖上10mm，腓骨前緣;非穴選取與三陰交、懸鐘穴處于同一水平，旁開(kāi)對(duì)照點(diǎn)選各穴左側(cè)旁開(kāi)3mm處。每組皆為雙側(cè)取穴。

電針?lè)椒ǎ喝幗?、懸鐘和非穴均為直?mm左右，相對(duì)穴“三陰交-懸鐘穴”為透刺，透刺方向?yàn)槿幗煌笐溢?，并在穴位的近心端旁開(kāi)約2～3mm處再刺一針，刺入皮膚即可，兩針之間置一棉球，防止短路，并用膠布加以固定。兩針?lè)謩e連電針儀正極、負(fù)極，刺激頻率為2/15Hz，強(qiáng)度為1mA，20min。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始開(kāi)始后的第1、3、5、7d進(jìn)行實(shí)驗(yàn)干預(yù)，共4次。對(duì)照組與模型組以同樣的方法和時(shí)間固定，不給予電針處理。

（五）大鼠扭體反應(yīng)評(píng)定

扭體反應(yīng)是目前公認(rèn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)，扭體行為可分為0至3四個(gè)等級(jí)。0級(jí)表現(xiàn)為正常的姿勢(shì)（前爪平放盒底/正常探查行為）;1級(jí)表現(xiàn)為身體斜向一邊;2級(jí)表現(xiàn)為后肢伸展和后爪背屈，軀體伸展并伴頻繁地盆骨側(cè)向旋轉(zhuǎn);3級(jí)表現(xiàn)為腹部肌肉收縮和后肢后伸。本實(shí)驗(yàn)記錄20min內(nèi)扭體評(píng)分及扭體反應(yīng)潛伏期。扭體評(píng)分：總分=0級(jí)×0分+1級(jí)×1分+2級(jí)×2分+3級(jí)×3分，扭體潛伏期：注射縮宮素后直至出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間段。

（六）實(shí)驗(yàn)取材及檢測(cè)方法

待扭體反應(yīng)評(píng)分結(jié)束，即刻摘取大鼠的子宮，并將其置于生理鹽水中煮沸5min后稱(chēng)重，而后放于玻璃勻漿管，加入1N的HCL1mI，再用勻漿機(jī)勻漿，充分勻漿后室溫放置100min，再加入1N的NaO110.8ml，使之中和到一定的PH值;3500rpm離心15min后，取上清液，置于-70℃保存以備用。模型大鼠子宮ET的含量需用ELISA的方法來(lái)測(cè)定，NO的含量需用化學(xué)發(fā)光法來(lái)測(cè)定。

（七）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）來(lái)表示。各組間差異采用單因素方差分析，并以L(fǎng)SD對(duì)每?jī)山M間的差異加以分析，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

（一）電針對(duì)扭體的影響

與對(duì)照組相比，模型組大鼠的扭體評(píng)分值明顯增高，扭體潛伏期時(shí)長(zhǎng)明顯縮短（P<0.01），證實(shí)模型大鼠已制備成功。與對(duì)照組相比，各電針組大鼠的扭體評(píng)分均明顯增高（P<0.01），扭體潛伏期時(shí)長(zhǎng)（除“三陰交-懸鐘”組）明顯縮短（P<0.01）。與模型組相比，相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”組扭體評(píng)分明顯減少（P<0.01），“三陰交-懸鐘”組，三陰交穴組的扭體潛伏期時(shí)長(zhǎng)明顯延長(zhǎng)（P<0.05，P<0.01）。

各電針組之間比較，相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”組扭體潛伏期較三陰交組、懸鐘組、非三陰交-懸鐘組均明顯延長(zhǎng)（P<0.01）;相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”組的扭體評(píng)分較三陰交組、懸鐘組、非三陰交-懸鐘組均明顯降低（P<0.05，P<0.01）。詳見(jiàn)表1。

（二）電針對(duì)子宮ET和NO的含量、以及ET/NO比值的影響

與對(duì)照組相比，模型組大鼠子宮ET的含量，以及ET/NO的比值明顯升高，而NO的含量則明顯降低（P<0.01），各電針組ET含量（除“三陰交-懸鐘”組）明顯升高，NO含量、ET/NO比值（除“三陰交-懸鐘”組）明顯降低（P<0.01）。與模型組比較，“三陰交-懸鐘”組子宮ET含量明顯降低，NO含量明顯升高，ET/NO比值明顯降低（P<0.01）。

各電針組之間比較，“三陰交-懸鐘”組子宮ET含量、ET/NO比值較三陰交組、懸鐘組、非三陰交-懸鐘組均明顯降低（P<0.01），“三陰交-懸鐘”組NO含量較三陰交組、懸鐘組、非三陰交-懸鐘組均明顯升高（P<0.01）。詳見(jiàn)表2。

三、討論

文獻(xiàn)研究顯示，痛經(jīng)是針灸治療婦產(chǎn)科疾病中應(yīng)用最多的病種[1]，且“三陰交-懸鐘”的聯(lián)合應(yīng)用對(duì)于痛經(jīng)具有較好的治療效果。本研究中模型組大鼠子宮ET的含量、ET/NO比值較對(duì)照組明顯升高，NO含量明顯降低，提示ET對(duì)子宮動(dòng)脈的收縮作用較為敏感，大鼠痛經(jīng)狀態(tài)下，ET增加，使二者比值失衡。有研究發(fā)現(xiàn)，ET/NO比值可以作為瘀血證嚴(yán)重程度的指標(biāo)之一[2]。本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠ET/NO的比值明顯升高，這說(shuō)明二者之間比重失衡，從而導(dǎo)使子宮內(nèi)組織缺血缺氧，發(fā)生或加重痛經(jīng)。

與模型組比較，三陰交-懸鐘組子宮ET含量均明顯降低，NO含量均明顯升高，ET/NO比值均明顯降低，提示：電針“三陰交-懸鐘”可通過(guò)調(diào)節(jié)子宮ET、NO含量及ET/NO比值，使子宮平滑肌的痙攣狀態(tài)得以緩解，進(jìn)而使胞宮疼痛得以緩解。各電針組間相比較，相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”組子宮ET含量、ET/NO比值較三陰交組、懸鐘組、非三陰交-懸鐘組均明顯降低，提示電針“三陰交-懸鐘”可能通過(guò)調(diào)節(jié)子宮ET、NO的含量來(lái)調(diào)節(jié)ET/NO的平衡，其作用較單純電針“三陰交”“懸鐘”非穴更顯著。進(jìn)一步提示“三陰交-懸鐘”在調(diào)節(jié)子宮的平滑肌及其舒縮物質(zhì)方面的有一定的特異性，這或許與相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”的內(nèi)在的協(xié)同增效作用有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)研究初步證實(shí)：電針相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”可調(diào)節(jié)血管舒縮物質(zhì)且其作用有一定的特異性，從而進(jìn)一步證實(shí)疼痛調(diào)控效應(yīng)的存在，初步證實(shí)“三陰交-懸鐘”對(duì)胞宮疼痛的特異性調(diào)控作用，后期將繼續(xù)對(duì)“三陰交-懸鐘”調(diào)節(jié)胞宮疼痛的作用機(jī)制進(jìn)行深入探討。

參考文獻(xiàn)：

[1]杜元灝，李晶，孫冬緯，等.中國(guó)現(xiàn)代針灸病譜的研究.中國(guó)針灸，2017，27（5）：373-378.

[2]余運(yùn)賢，梁暉，黃健，等.急性腦梗塞血瘀證與一氧化氮、內(nèi)皮素相關(guān)性研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2017，20（7）：501-503.

基金項(xiàng)目：2018年4月河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目：基于三陰交-懸鐘對(duì)疼痛的調(diào)控作用探討相對(duì)穴與經(jīng)穴效應(yīng)的相關(guān)性（No.NQ2018082）

作者簡(jiǎn)介：辛思源（1986—），女，漢族，河北承德人，碩士，講師，主治醫(yī)師，研究方向：經(jīng)穴主治規(guī)律研究。

*通訊作者：李春華（1982—），女，漢族，河北保定人，博士，副主任醫(yī)師，研究方向：穴位效應(yīng)特異性研究。