香茅醇亞微乳的處方工藝優(yōu)化研究

楊佳佳 李婉蓉 彭劍青 肖婷 吳林菁 周雪 楊增秋 姜豐 丁楊 沈祥春 陶玲

中圖分類號(hào) R944.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2020）14-1704-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.14.08

摘 要 目的：優(yōu)化香茅醇亞微乳的制備工藝。方法：采用高效液相色譜法測(cè)定香茅醇亞微乳中的香茅醇含量;采用高速剪切分散-高壓均質(zhì)法制備香茅醇亞微乳，以離心穩(wěn)定常數(shù)（ke）、粒徑為指標(biāo)，對(duì)其處方及工藝進(jìn)行優(yōu)化并進(jìn)行驗(yàn)證;測(cè)定所得制劑的載藥量的包封率。結(jié)果：香茅醇檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為4～64 μg/mL（R 2= 0.999 9）;精密度、穩(wěn)定性（24 h）、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于3%;加樣回收率為97.64%～101.97%（RSD=2.28%，n=3）、97.71%～99.50%（RSD=1.29%，n=3）、96.87%～101.48%（RSD=2.86%，n=3）。最優(yōu)處方為大豆油+中鏈甘油三酯（1 ∶ 1，g/g）總質(zhì)量3.75 g，1.2%大豆磷脂0.6 g，膽固醇0.06 g，香茅醇1.25 g，0.6%油酸鈉0.3 g，15-羥基硬脂酸聚乙二醇酯0.75 g，泊洛沙姆188 0.75 g，加水至50 mL。最優(yōu)工藝為于4 ℃下以13 000 r/min高速剪切5 min制得初乳后，經(jīng)稀鹽酸調(diào)pH至7，再以600 Bar高壓均質(zhì)5 min。按最優(yōu)處方及工藝制備的3批香茅醇亞微乳的平均粒徑為（91.05±0.26）nm，多分散系數(shù)為（0.20±0.01），Zeta電位為（-30.86±0.39）mV，ke值為9.23，香茅醇的平均含量為（100.21±0.01）%;載藥量為（2.481 7±0.000 7）mg/mL，包封率為（99.27±0.03）%。結(jié)論：優(yōu)化所得處方及工藝穩(wěn)定、可行。

關(guān)鍵詞 香茅醇;亞微乳;高速剪切分散-高壓均質(zhì)法;處方;工藝;優(yōu)化;高效液相色譜法;含量

Study on Optimization of Formulation and Technology of Citronellol Submicroemulsion

YANG Jiajia1，LI Wanrong1，PENG Jianqing1，XIAO Ting1，WU Linjing1，ZHOU Xue1，YANG Zengqiu1，JIANG Feng1，DING Yang2，SHEN Xiangchun1，TAO Ling1（1. School of Pharmacy， Guizhou Medical University/Engineering Center for the Highly Efficient Utilization of Natural Medicine Resources in Guizhou Province/Key Lab for Pharmacology and Pharmacogenesis Evaluation of Natural Medicine in Guizhou Universities/Guizhou Medical University-Guiyang Joint Key Laboratory/Key Laboratory for Optimal Utilization of Natural Medicine Resources， Guiyang 550025， China; 2. Pharmaceutics Teaching and Research Section， China Pharmaceutical University/State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines， Nanjing 210009， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To optimize the preparation technology of citronellol submicroemulsion. METHODS： The content of citronellol in Citronellol submicroemulsion was determined by HPLC. Citronellol submicroemulsion by high-speed shearing dispersion-high pressure homogenization method， with centrifugation stability constant （ke） and particle size were used as evaluation indexes. Its formulation and preparation technology were optimized and validated. Drug-loading amount and encapsulation rate of the preparation were detected. RESULTS： The linear range of citronellol were 4-64 μg/mL （R 2=0.999 9）. RSDs of precision， stability （24 h） and reproducibility tests were all lower than 3%. The recoveries were 97.64%-101.97%（RSD=2.28%，n=3）， 97.71%-99.50%（RSD=1.29%，n=3）， 96.87%-101.48%（RSD=2.86%，n=3）. The optimal formulation included that total weight of soybean oil and medium chain triglycerides （1 ∶ 1，g/g） was 3.75 g， 1.2% soybean phospholipid was 0.6 g， cholesterol was 0.06 g， citronellol was 1.25 g， 0.6 % sodium oleate was 0.3 g， 15-hydroxystearic acid polyethylene glycol ester was 0.75 g， poloxamer 188 was 0.75 g， water added to 50 mL. After prepared by optimal technology at 4 ℃ which contained shearing speed of 13 000 r/min， lasting for 5 min， primary emulsion was adjusted to pH 7 with dilute hydro- chloric acid， and homogenized with 600 Bar high pressure for 5 min. The parameters of Citronellol submicroemulsion accor- ding to optimal formulation and technology contained mean particle size of （91.05±0.26） nm， PDI of （0.20±0.01）， Zeta-potential of （-30.86±0.39） mV， average content of citronellol （100.21±0.01） %， the drug-loading amount was （2.481 7±0.000 7） mg/mL， the encapsulation rate was （99.27±0.03）%. CONCLUSIONS： The optimal formulation and technology is stable and feasible.

KEYWORDS? ?Citronellol; Submicroemulsion; High-speed shearing dispersion-high pressure homogenization method; Formula- tion;Technology; Optimization; HPLC; Content

香茅醇是一種于香茅屬植物香茅[Cymbopogon citratus （dC.） Stapf]精油中發(fā)現(xiàn)的單萜烯類化合物[1]。目前，香茅醇已被作為添加劑廣泛應(yīng)用于煙草、日化及食品領(lǐng)域[2-3]。有研究發(fā)現(xiàn)，該化合物具有抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化和抗腫瘤等藥理作用[4-5]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，香茅醇對(duì)人喉癌上皮細(xì)胞Hep-2具有顯著的增殖抑制作用。但因香茅醇揮發(fā)性較強(qiáng)，對(duì)光線、氧氣、溫度等條件較敏感，且難溶于水，故其臨床應(yīng)用受到限制[6]。

亞微米乳劑（以下簡(jiǎn)稱“亞微乳”）作為一種新型的藥物遞送系統(tǒng)，其乳滴粒徑介于乳劑和微乳之間[7-8]，藥物可與油相混溶或停留在油相界面層內(nèi)，除可減少藥物不良反應(yīng)、提高生物膜透過(guò)率和生物利用度、增強(qiáng)藥物靶向性外，還具有增加難溶性藥物溶解度和穩(wěn)定性、促進(jìn)藥物持續(xù)釋放等優(yōu)點(diǎn)[9-11]，是目前藥劑學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一[12]。高速剪切分散-高壓均質(zhì)法是指借助介質(zhì)研磨或高壓均質(zhì)等機(jī)械力來(lái)減小藥物分子粒徑的方法，與傳統(tǒng)方法（如膠體磨乳化法、超聲波乳化法、剪切攪拌乳化法等）相比，該方法可大幅減少乳化劑用量、降低藥物毒副作用，所得微粒的粒度分布范圍更窄、靶向分布更具特異性，且易于工業(yè)化生產(chǎn)，是微（納）米級(jí)混懸液最受歡迎的制備方法[13-14]。為此，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定制劑中香茅醇的含量，采用高速剪切分散-高壓均質(zhì)法制備香茅醇亞微乳，并對(duì)其處方及工藝進(jìn)行優(yōu)化，旨在為該化合物新劑型的開發(fā)和合理應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

U3000 型HPLC儀，配備四元泵、紫外檢測(cè)器、進(jìn)樣器、柱溫箱（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）;85-2B型恒溫加熱磁力攪拌器（金壇市科析儀器有限公司）;NANOJ H10型高速剪切乳化機(jī)、4802型高壓均質(zhì)機(jī)均由ATS工業(yè)系統(tǒng)有限公司提供;UV 2700型紫外-可見分光光度計(jì)（日本Shimadzu公司）;KQ3200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;NANO-ZA型Zeta電位及粒徑測(cè)定儀（英國(guó)Malvern公司）;ME104/02型千分之一電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司];BS-223S型百分之一分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.2 藥品與試劑

香茅醇對(duì)照品[阿拉丁試劑（上海）有限公司，批號(hào)：J1713062，純度：≥95%];大豆磷脂（PC，上海太偉藥業(yè)有限公司，批號(hào)：201806032）;15-羥基硬脂酸聚乙二醇酯（15-HS，批號(hào)：0339458800）、泊洛沙姆188（F-68，批號(hào)：WPAK539B）均購(gòu)自德國(guó)BASF公司;膽固醇（CH，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：69008214）;中鏈甘油三酯（MCT，批號(hào)：20190802）、甘油（批號(hào)：20180116）均購(gòu)自浙江遂昌惠康藥業(yè)有限公司;大豆油（LCT，浙江田雨山藥用油有限公司，批號(hào)：20190802）;油酸（西隴科學(xué)股份有限公司，批號(hào)：170329）;油酸鈉（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)：20191022）;乙腈、甲醇均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 香茅醇亞微乳的制備

根據(jù)本課題組前期預(yù)試驗(yàn)初步確定香茅醇亞微乳處方。取LCT、PC和油酸各適量，置于燒杯中，于55 ℃水浴中超聲（功率：240 W，頻率：40 kHz）使溶解，冷卻至25 ℃左右，加入香茅醇對(duì)照品，混勻，即得油相。另取15-HS、F-68各0.75 g，置于燒杯中，加水至50 mL，于55 ℃加熱溶解，以1 000 r/min攪拌5 min，得水相，冷卻至25 ℃左右。于4 ℃水溶條件下將油相緩慢注入至水相中，采用高速剪切乳化機(jī)以10 000 r/min高速剪切5 min，得香茅醇亞微乳初乳。經(jīng)稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至7，采用高壓均質(zhì)機(jī)以300 Bar高壓均質(zhì)5 min，得香茅醇亞微乳。另同法制備不含香茅醇對(duì)照品的空白亞微乳。

2.2 香茅醇的含量測(cè)定

采用HPLC法測(cè)定香茅醇亞微乳中香茅醇的含量。

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Ultimate? LP-C18（150 mm×4.6 mm，5 ?m）;流動(dòng)相：乙腈-水（70 ∶ 30，V/V）;檢測(cè)波長(zhǎng)：205 nm;流速：1.0 mL/min;柱溫：30 ℃;進(jìn)樣量：20 μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取香茅醇對(duì)照品5.0 mg，置于25 mL量瓶中，加乙腈溶解并定容，得質(zhì)量濃度為200 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密吸取“2.1”項(xiàng)下香茅醇亞微乳0.2 mL，置于10 mL量瓶中，加乙腈破乳并定容至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液1.0 mL，置于10 mL量瓶中，加乙腈定容，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.4 空白亞微乳對(duì)照溶液 精密吸取“2.1”項(xiàng)下空白亞微乳0.2 mL，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備空白亞微乳對(duì)照溶液。

2.2.5 專屬性考察 分別吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白亞微乳對(duì)照溶液及空白對(duì)照溶液（乙腈）各20 μL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，供試品溶液與對(duì)照品溶液在相同保留時(shí)間處有同一色譜峰;空白亞微乳對(duì)照溶液、空白對(duì)照溶液均不干擾測(cè)定;理論板數(shù)以香茅醇計(jì)均不低于 6 000，分離度均大于3，詳見圖1。

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.2、0.6、1.0、1.6、3.2 mL，分別置于10 mL量瓶中，加乙腈定容至刻度，制成質(zhì)量濃度分別為4、12、20、32、64 μg/mL的線性溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以香茅醇的質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=0.576 2X+0.128 5（R 2=0.999 9），表明香茅醇檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為4～64 μg/mL。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.6”項(xiàng)下20 μg/mL的線性溶液適量，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，香茅醇峰面積的RSD為2.23%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取“2.1”項(xiàng)下香茅醇亞微乳適量，共6份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算樣品中香茅醇的含量。結(jié)果，香茅醇含量的RSD為2.19%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液適量，分別于室溫放置0、2、4、6、8、10、12、24 h時(shí)，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，香茅醇峰面積的RSD為1.08%（n=8），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取“2.1”項(xiàng)下空白亞微乳適量，置于10 mL量瓶中，加入一定量的對(duì)照品溶液（取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，加乙腈稀釋至質(zhì)量濃度分別為12、20、32 μg/mL），按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，上述3種質(zhì)量濃度樣品的加樣回收率分別為97.64%～101.97%（RSD=2.28%，n=3）、97.71%～99.50%（RSD=1.29%，n=3）、96.87%～101.48%（RSD=2.86%，n=3）。

2.3 離心穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定

乳劑在一定轉(zhuǎn)速下離心后產(chǎn)生的影響相當(dāng)于自然靜置較長(zhǎng)時(shí)間后產(chǎn)生的影響[12]。當(dāng)乳劑中乳滴的表面張力過(guò)大而不穩(wěn)定時(shí)，離心易導(dǎo)致乳劑分層，其吸光度值可能發(fā)生變化，因此本研究采用離心-分光光度法測(cè)定乳劑離心前后吸光度值變化百分率即離心穩(wěn)定常數(shù)（ke），ke值越小表示乳劑體系越穩(wěn)定[15]。取“2.1”項(xiàng)下香茅醇亞微乳（或初乳）3 mL，以3 500 r/min離心15 min，取下層液50 μL，加水稀釋至10 mL，以水為空白，采用紫外-可見分光光度計(jì)于500 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值（A）[15];另取“2.1”項(xiàng)下香茅醇亞微乳（或初乳）50 μL，同法稀釋后測(cè)定吸光度值（A0）;并計(jì)算ke：ke=（A0-A）/A0×100%[12]。

2.4 處方的優(yōu)化

采用單因素試驗(yàn)，以初乳粒徑（經(jīng)Zeta電位及粒徑測(cè)定儀檢測(cè)）和ke值（按“2.3”項(xiàng)下方法檢測(cè)）為指標(biāo)。

2.4.1 油相 參考相關(guān)文獻(xiàn)，固定油相總量為10%[16]，加香茅醇2.5 g、PC 0.6 g、油酸0.2 g、15-HS 0.75 g、FS-68 0.75 g，再加水至50 mL，考察不同油相對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，LCT、MCT與香茅醇均有較好的相容性，且粒徑及ke值較適中，詳見表1。但有研究認(rèn)為，單獨(dú)使用LCT或MCT的毒性較大[17-18]，因此本研究以LCT+MCT作為混合油相進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.4.2 LCT與MCT比例 參考相關(guān)文獻(xiàn)，固定油相總量為10%[16]，LCT+MCT總質(zhì)量為2.5 g，加香茅醇2.5 g、PC 0.6 g、油酸0.2 g、15-HS 0.75 g、FS-68 0.75 g，再加水至50 mL，考察不同質(zhì)量比LCT與MCT對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，當(dāng)LCT ∶ MCT為1 ∶ 1（g/g）時(shí)，初乳的粒徑和ke值均較小，故選擇LCT ∶ MCT為1 ∶ 1（g/g），詳見表2。

2.4.3 LCT+MCT與香茅醇比例 參考相關(guān)文獻(xiàn)，固定油相總用量為10%[16]，LCT和MCT（1 ∶ 1，g/g）總質(zhì)量為3.75 g，加PC 0.6 g、油酸0.2 g、15-HS 0.75 g、FS-68 0.75 g，再加水至50 mL，考察不同質(zhì)量比LCT+MCT與香茅醇對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，雖然當(dāng)LCT+MCT ∶ 香茅醇為1 ∶ 3（g/g）時(shí)，初乳的ke值最小，但因其對(duì)應(yīng)的粒徑范圍較大且有乳滴掛壁、表面浮油現(xiàn)象，故最終選擇了LCT+MCT ∶ 香茅醇為3 ∶ 1（g/g），詳見表3。

2.4.4 助乳化劑 參考相關(guān)文獻(xiàn)，固定油相總量為10%[16]，LCT+MCT和香茅醇（3 ∶ 1，g/g）總質(zhì)量為3.75 g，加PC 0.6 g、油酸0.2 g、15-HS 0.75 g、F-68 0.75 g，再加水至50 mL，考察不同助乳化劑[F-68、15-HS、兩者組合（1 ∶ 1，g/g）]對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，以F-68為助乳化劑時(shí)，初乳的濾過(guò)速度極慢，且在燒杯內(nèi)壁存有大量油滴;以15-HS為助乳化劑，初乳的ke值雖然最小，但粒徑差異較大，故選擇F-68+15-HS作為助乳化劑，詳見表4。

2.4.5 15-HS與F-68比例 參考相關(guān)文獻(xiàn)，固定油相總量為10%[16]，LCT+MCT和香茅醇（3 ∶ 1，g/g）總質(zhì)量為3.75 g，加PC 0.6 g、油酸0.2 g，再加水至50 mL，考察不同質(zhì)量比15-HS與F-68對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，15-HS ∶ F-68為1 ∶ 1（g/g）時(shí)，初乳的ke值最小，且粒徑適中，故選擇15-HS ∶ F-68為1 ∶ 1（g/g），詳見表5。

2.4.6 PC質(zhì)量分?jǐn)?shù) 參考相關(guān)文獻(xiàn)，固定油相總量為10%[16]，LCT+MCT和香茅醇（3 ∶ 1，g/g）總質(zhì)量為3.75 g，加PC 0.6 g、油酸0.2 g、15-HS 0.75 g、F-68 0.75 g，再加水至50 mL，考察不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)PC對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，當(dāng)PC質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.2%時(shí)，初乳的ke值最小，且粒徑適中，故選擇PC質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.2%，詳見表6。

2.4.7 穩(wěn)定劑種類 參考相關(guān)文獻(xiàn)，固定油相總量為10%，穩(wěn)定劑用量為0.4%[16]，LCT+MCT和香茅醇（3 ∶ 1，g/g）總質(zhì)量為3.75 g，加1.2%PC 0.6 g、15-HS 0.75 g、F-68 0.75 g，再加水至50 mL，考察不同穩(wěn)定劑對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，以油酸鈉為穩(wěn)定劑時(shí)，初乳的ke值最小，且粒徑適中故選擇油酸鈉為穩(wěn)定劑，詳見表7。

2.4.8 油酸鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù) 參考相關(guān)文獻(xiàn)，固定油相總量為10%，穩(wěn)定劑用量為0.4%[16]，LCT+MCT ∶和香茅醇（3 ∶ 1，? g/g）總質(zhì)量為3.75 g，加1.2%PC 0.6 g、15-HS 0.75 g、F-68 0.75 g、油酸鈉 0.3 g，加水至50 mL，考察不同油酸鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，當(dāng)油酸鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.6%時(shí)，初乳的ke值最小，且粒徑適中，故選擇油酸鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.6%，詳見表8。

2.4.9 PC與CH比例 有研究認(rèn)為，適量的膽固醇對(duì)生物膜穩(wěn)定性具有雙相調(diào)節(jié)作用[19]。參考相關(guān)文獻(xiàn)，固定油相總量為10%，穩(wěn)定劑用量為0.4%[16]，LCT+MCT和香茅醇（3 ∶ 1，g/g），總質(zhì)量為3.75 g，加1.2%PC 0.6 g、15-HS 0.75 g、F-68 0.75 g、0.6%油酸鈉 0.3 g，再加水至50 mL，考察不同質(zhì)量比PC與CH對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，當(dāng)PC與CH為10 ∶ 1（g/g）時(shí)，初乳的ke值最小，且粒徑適中，故選擇PC ∶ CH為10 ∶ 1（g/g），詳見表9。

2.5 高速剪切機(jī)的工藝優(yōu)化

2.5.1 乳化溫度 按“2.4”項(xiàng)下處方，固定剪切轉(zhuǎn)速為10 000 r/min、剪切時(shí)間為5 min。將油相加熱溶解后，冷卻至25 ℃左右，加入香茅醇;于水相中加入上述溶液，分別于4、25 ℃條件下進(jìn)行高速剪切，考察乳化溫度對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，當(dāng)乳化溫度為4 ℃時(shí)，亞微乳的ke值最小，且粒徑適中，故選擇乳化溫度為4 ℃，詳見表10。

2.5.2 剪切轉(zhuǎn)速 按“2.4”項(xiàng)下處方，固定剪切時(shí)間為5 min、乳化溫度為4 ℃，按“2.5.1”項(xiàng)下方法考察不同剪切轉(zhuǎn)速對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke的影響。結(jié)果，剪切轉(zhuǎn)速10 000、13 000 r/min時(shí)的ke值相差不大，但13 000 r/min時(shí)的粒徑范圍更小，故選擇剪切轉(zhuǎn)速為13 000 r/min，詳見表11。

2.5.3 剪切時(shí)間 固定乳化溫度為4 ℃、剪切轉(zhuǎn)速為13 000 r/min，按“2.5.1”項(xiàng)下方法考察不同剪切時(shí)間對(duì)香茅醇亞微乳初乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，隨著剪切時(shí)間的延長(zhǎng)，粒徑呈減小的趨勢(shì)，粒徑范圍變化顯著，但隨著時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)，粒徑范圍的變化趨勢(shì)減小;當(dāng)剪切時(shí)間為7 min時(shí)，ke值增加明顯，這可能會(huì)導(dǎo)致亞微乳體系不穩(wěn)定，故綜合考慮，最終選擇剪切時(shí)間為5 min，詳見表12。

2.6 高壓均質(zhì)機(jī)的工藝優(yōu)化

2.6.1 均質(zhì)壓力 按“2.4”項(xiàng)下處方以及“2.5”項(xiàng)下高速剪切機(jī)工藝，固定均質(zhì)時(shí)間為7 min，考察不同均質(zhì)壓力對(duì)香茅醇亞微乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，當(dāng)均質(zhì)壓力為600 Bar時(shí)，亞微乳的粒徑和ke值均最小，故選擇均質(zhì)壓力為600 Bar，詳見表13。

2.6.2 均質(zhì)時(shí)間 按“2.4”項(xiàng)下處方以及“2.5”項(xiàng)下高速 剪切機(jī)工藝，固定均質(zhì)壓力為600 Bar，考察不同均質(zhì)時(shí)間對(duì)香茅醇亞微乳粒徑及ke值的影響。結(jié)果，均質(zhì)時(shí)間為5 min時(shí)，ke值最小，且粒徑適中，故選均質(zhì)時(shí)間為5 min，詳見表14。

2.7 最優(yōu)處方工藝的確定及驗(yàn)證試驗(yàn)

最優(yōu)處方如下：LCT+MCT（1 ∶ 1，g/g）總質(zhì)量為3.75 g，1.2%PC為0.6 g，CH為0.06 g，香茅醇為1.25 g，0.6%油酸鈉為0.3 g，15-HS為0.75 g，F(xiàn)-68為0.75 g，加水至50 mL。最優(yōu)工藝如下：于4 ℃下以13 000 r/min高速剪切5 min制得初乳后，經(jīng)稀鹽酸調(diào)pH至7，再以600 Bar高壓均質(zhì)5 min。按上述最優(yōu)處方及工藝制備3批香茅醇亞微乳，觀察外觀后，采用Zeta電位及粒度儀測(cè)定其粒徑、多分散系數(shù)、Zeta電位，并按“2.3”項(xiàng)下方法檢測(cè)ke值;分別按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算樣品中香茅醇的含量。所得香茅醇亞微乳外觀見圖2，粒徑分布及Zeta電位圖見圖3，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果見表15。

2.8 載藥量及包封率的測(cè)定

2.8.1 載藥量 取按“2.7”項(xiàng)下最優(yōu)處方及工藝制備的香茅醇亞微乳適量，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算亞微乳中香茅醇的含量，換算為總質(zhì)量（W總）后，計(jì)算載藥量：載藥量（%）=（W總/香茅醇亞微乳的質(zhì)量）×100%[20]。每樣品重復(fù)測(cè)定3次。結(jié)果，香茅醇亞微乳的載藥量為（2.481 7±0.000 7）mg/mL。

2.8.2 包封率 取按“2.7”項(xiàng)下最優(yōu)處方及工藝制備的香茅醇亞微乳3 mL，置于50 kDa超濾管中，以3 500 r/min離心30 min，取續(xù)濾液0.2 mL，置于1.0 mL量瓶中，加乙腈定容至刻度，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算游離香茅醇的含量，并換算為未包封入亞微乳、游離在水相中的香茅醇質(zhì)量（W游），計(jì)算包封率：包封率（%）=（W總-W游）/W總×100%[20]。結(jié)果，香茅醇亞微乳的包封率為（99.27±0.03）%。

3 討論

LCT具有升高肺動(dòng)脈壓、抑制胃腸功能等毒副作用，其作為油相在亞微乳中的應(yīng)用由此受到限制[16-17]。有研究認(rèn)為，MCT因相對(duì)分子量較小，有較好的水溶性及較低的酸度系數(shù)，故其勿需依賴肉毒堿即可進(jìn)入線粒體而被快速氧化，且在血液循環(huán)中清除速度較快，不易在肝臟中蓄積，這對(duì)肉毒堿缺乏的危重患者和新生兒無(wú)疑是有利的[16]。但也有研究認(rèn)為，單用MCT可引起代謝性酸中毒和神經(jīng)系統(tǒng)副作用[17]，因此不宜單獨(dú)作為油相。文獻(xiàn)報(bào)道，以LCT與MCT混合作為油相可減少毒性并降低游離藥物的濃度，且對(duì)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)無(wú)影響，因此臨床推薦LCT與MCT作為混合乳劑使有，以降低單用LCT或MCT引起的相應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)[18]。

有研究認(rèn)為，油相黏度、油水界面張力均與溫度有關(guān)[17]。由于香茅醇易揮發(fā)，因此高壓均質(zhì)過(guò)程中的溫度控制對(duì)其亞微乳的穩(wěn)定性具有十分重要的意義。當(dāng)溫度過(guò)低時(shí)，油相黏度較大，形成的乳滴粒度大且粒徑分布廣;升高溫度雖然可降低油相黏度，有利于亞微乳的形成，但溫度過(guò)高可造成乳滴動(dòng)能增加，從而加速乳滴間的相互碰撞，發(fā)生聚集而產(chǎn)生大油滴，導(dǎo)致油水分層、乳劑破裂，最終影響亞微乳的穩(wěn)定性[19，21]。

在處方及工藝優(yōu)化過(guò)程中，隨著均質(zhì)壓力的增加和均質(zhì)時(shí)間的延長(zhǎng)，所得亞微乳粒徑和ke值逐漸降低，但當(dāng)均質(zhì)壓力和均質(zhì)時(shí)間達(dá)到一定值時(shí)，粒徑減小不明顯，但ke值變化較大，其原因可能為壓力增大時(shí)會(huì)產(chǎn)生較多的熱量，導(dǎo)致乳滴聚集，從而影響穩(wěn)定性[22-23]。

綜上所述，優(yōu)化所得處方及工藝穩(wěn)定、可行。

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（收稿日期：2020-02-06 修回日期：2020-06-14）

（編輯：陳 宏）