流式細(xì)胞術(shù)檢測急性白血病(AL)患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)及其意義

饒婷 石大鵬

【摘要】目的：采用流式細(xì)胞術(shù)對急性白血病（AL）患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，分析外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)的臨床意義。方法：選取我院接診AL患者72例作為觀察組，其中急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）45例、急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）27例，另選取健康體檢自愿者30例作為對照組，對兩組患者外周靜脈血進(jìn)行采集，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)行T淋巴細(xì)胞亞群檢測，運(yùn)用血凝儀行血漿凝血指標(biāo)檢測，并行相關(guān)性和ROC曲線分析。結(jié)果：亞組ALL組、AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組、B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞表達(dá)明顯下降，明顯升高（P<0.05），同時(shí)凝血指標(biāo)D-D、FIB、PT、APTT、TT均表現(xiàn)為明顯升高，AT III表現(xiàn)為明顯下降（P<0.05）;AML-M3組治療后、B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞、D-D、FIB、PT、APTT、TT均有明顯好轉(zhuǎn)（P<0.05）。相關(guān)性分析，根據(jù)相關(guān)性分析結(jié)果顯示，外周血T淋巴細(xì)胞與凝血指標(biāo)表現(xiàn)出不同的相關(guān)性，但、B淋巴細(xì)胞與各凝血指標(biāo)相關(guān)性均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。ROC曲線分析，外周血T淋巴細(xì)胞在AL診斷中，其AUC計(jì)算結(jié)果為0.821，靈敏度為73.8%，特異度為83.9%。結(jié)論：采用流式細(xì)胞術(shù)對AL患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行測定，其表現(xiàn)與凝血指標(biāo)呈現(xiàn)出較高的一致性，可用于AL臨床診斷、治療的評(píng)估。

【關(guān)鍵詞】急性白血病;流式細(xì)胞術(shù);T淋巴細(xì)胞亞群;凝血指標(biāo)

急性白血?。╝cute leukemia，AL）是一種非常多見的造血干細(xì)胞引起的惡性克隆性疾病，在發(fā)病的過程中骨髓會(huì)表現(xiàn)出異常的幼稚細(xì)胞以及原始細(xì)胞迅速增加，并大量蓄積在骨髓嚴(yán)重影響正常的造血功能變化，可致使脾臟、肝臟、淋巴結(jié)等各種髓外臟器受累?；颊咂毡楸憩F(xiàn)為出血、貧血、浸潤、感染等征象，對其日常生活帶來了極大的影響。有研究者表示，AL的發(fā)生發(fā)展與其免疫紊亂密切相關(guān)，其中T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)揮著非常關(guān)鍵的作用[1]。本研究選取AL患者，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)對其外周血T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)水平進(jìn)行測定，明確其變化規(guī)律，以便為臨床診斷、病情監(jiān)測提供客觀依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

本研究病例均來自我院2019年1月-2020年4月接診的AL患者，所有患者均根據(jù)《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)第四版》（2018年）[2]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確診，且自愿參與本研究，并簽訂知情同意書。選取AL患者72例作為觀察組，其中女性31例，男性41例，年齡為（40.35±10.38）歲，病程為（1.64±0.83）年;根據(jù)免疫表型、細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)以及分子生物學(xué)進(jìn)行分型，其中急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）患者45例，急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）患者27例。AML組又可分為AML-M2組（n=15）、AML-M3組（n=15）、AML-M5組（n=15）。另從同期健康體檢中心抽取健康志愿者30例作為對照組，其中女性13例，男性17例，年齡為（40.18±10.82）歲。各組患者一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1治療方法：根據(jù)《中國成人急性髓系白血?。ǚ羌毙栽缬琢＜?xì)胞白血病）診療指南》（2017年版）中相關(guān)指導(dǎo)要求為患者提供化療治療[3]。

1.2.2檢測方法：所有患者在入院當(dāng)日以及持續(xù)接受2個(gè)周期化療之后，分別取3mL空腹靜脈血，將其置于3.85%乙二胺四乙酸抗凝管內(nèi)，取血清保存。取血樣50ul于試管中，加入CD3-FITC/CD4-PE/CD45-PerCP熒光單克隆抗體試劑10ul（流式細(xì)胞儀法，邁瑞mindray-BricyteE6），輕輕震蕩混勻，室溫避光孵育15min，向管內(nèi)加入1mL溶血素，輕輕震蕩混勻后避光靜置10min，然后以1500r/min離心5min，棄去上清液，加入PBS液1ml，輕輕震蕩混勻，以1500r/min離心5min，再次棄去上清液，加入300ulPBS液，輕輕震蕩混勻后，使用流式細(xì)胞儀檢驗(yàn)。運(yùn)用流式細(xì)胞儀（邁瑞，mindray-BricyteE6），通過直接熒光標(biāo)記法，對不同的熒光標(biāo)記單克隆抗體加入到樣本內(nèi)，并將樣本放入帶有微球的樣品管中上機(jī)實(shí)施檢測。將縱坐標(biāo)設(shè)置為測向角散射光，將橫向坐標(biāo)設(shè)計(jì)為前向角散射光，這就能夠確保淋巴細(xì)胞均能夠列入到測定范圍，同時(shí)在對細(xì)胞進(jìn)行吸獲之后，再配合流式細(xì)胞儀系統(tǒng)軟件對測定結(jié)果實(shí)施分析，最終獲得T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞（CD3-CD19+）、NK淋巴細(xì)胞（CE3-CD16+CD56+）的絕對計(jì)數(shù)，同時(shí)基于該結(jié)果對比值進(jìn)行計(jì)算。另運(yùn)用血凝儀（積水SEKISUI，coapresra2000）及其配套試劑對患者的血漿水平進(jìn)行測定，包括血漿D-二聚體（D-D）、血漿纖維蛋白原（FIB）、凝血酶原時(shí)間（PT）、抗凝血酶（AT III）、活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）、凝血酶時(shí)間（TT）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS22.0行數(shù)據(jù)的分析處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示計(jì)量資料，以t值檢驗(yàn)。以Person相關(guān)性分析判定AL患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群與凝血指標(biāo)之間的關(guān)系。繪制ROC曲線，判定血外周血T淋巴細(xì)胞亞群對AL的診斷價(jià)值。若P<0.05即表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群及凝血指標(biāo)表達(dá)水平比較

ALL組、AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞表達(dá)水平、凝血指標(biāo)D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達(dá)水平與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;ALL組、AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平、凝血指標(biāo)D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達(dá)水平與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;ALL組、AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平、凝血指標(biāo)D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 AL患者治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化

ALL組患者治療后，外周血T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞表達(dá)水平、凝血指標(biāo)D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達(dá)水平與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;AML-M2組、AML-M2組、AML-M5組治療后，外周血T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞表達(dá)水平、凝血指標(biāo)D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達(dá)水平與治療前比較，出現(xiàn)不同程度的改變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1

2.3外周血T淋巴細(xì)胞與凝血指標(biāo)的相關(guān)性分析

根據(jù)相關(guān)性分析結(jié)果顯示，外周血T淋巴細(xì)胞與凝血指標(biāo)表現(xiàn)出不同的相關(guān)性，其中/、B淋巴細(xì)胞與各凝血指標(biāo)相關(guān)性均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.4外周血T淋巴細(xì)胞亞群對AL的診斷價(jià)值分析

繪制ROC曲線，根據(jù)分析結(jié)果來看，外周血T淋巴細(xì)胞在AL診斷中，其AUC計(jì)算結(jié)果為0.821，靈敏度為73.8%，特異度為83.9%。

3討論

本研究以健康志愿者作為對照組，對比AL患者的T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞表達(dá)水平、凝血指標(biāo)D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達(dá)水平，可以發(fā)現(xiàn)，ALL組、AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組AT III、B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞表達(dá)明顯下降，、D-D、FIB、PT、APTT、TT明顯升高（P<0.05）。

本研究通過對患者治療前后T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞表達(dá)水平、凝血指標(biāo)D-D、FIB、PT、APTT、TT、AT III表達(dá)水平比較情況進(jìn)行對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組治療后，外周血T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞表達(dá)水平、凝血指標(biāo)D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達(dá)水平與治療前比較，出現(xiàn)不同程度的改變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其中AML-M3組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞表達(dá)水平、凝血指標(biāo)D-D、FIB、PT、APTT、TT、AT III表達(dá)水平異常改變更為顯著有關(guān)。本研究ALL組、AML組檢測結(jié)果顯示，ALL組的表達(dá)水平明顯更低，明顯更高，且與AML比較有顯著差異（P<0.05），證實(shí)了病情嚴(yán)重程度與T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)之間的相關(guān)性。

本研究首次探討了AL患者外周血T淋巴細(xì)胞與凝血指標(biāo)之間的相關(guān)性，結(jié)合結(jié)果來看，AL患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群與凝血指標(biāo)D-D、FIB、PT、APTT、TT表現(xiàn)為正相關(guān)性，與AT III表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)性，但其中/、B淋巴細(xì)胞與各凝血指標(biāo)相關(guān)性均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。但該結(jié)果可證實(shí)外周血T淋巴細(xì)胞與凝血指標(biāo)之間有著非常緊密的聯(lián)系。筆者推測可能是由于在炎性介質(zhì)的刺激下，機(jī)體凝血功能受到影響發(fā)生相應(yīng)改變所致。為了進(jìn)一步了解外周血T淋巴細(xì)胞對AL的診斷價(jià)值，本研究進(jìn)行了ROC曲線繪制，根據(jù)結(jié)果來看，外周血T淋巴細(xì)胞亞群在AL診斷中具有較高的靈敏度和特異度，這就表明在AL發(fā)生發(fā)展中，外周血T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)揮了非常重要的意義，可用于疾病診斷和預(yù)后判斷。

綜上所述，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測AL患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群，可發(fā)現(xiàn)其表現(xiàn)為異常下降，表現(xiàn)為異常升高，而在對其實(shí)施治療后，患者的T淋巴細(xì)胞亞群均會(huì)發(fā)生的改變，故在AL患者診斷、治療中，外周血T淋巴細(xì)胞亞群能夠?yàn)槠涮峁┲苯涌陀^的判斷依據(jù)，具有非常積極的臨床意義。

參考文獻(xiàn)

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