HPLC法同時(shí)測(cè)定燈盞細(xì)辛注射液中多種成分

楊秀峰 于百青

摘要：目的：研究HPLC法制定下的燈盞細(xì)辛注射液的中多種成分的研究方法。其中包含綠原酸、咖啡酸、燈盞花乙素、咖啡?？鼘幩岬?。方法：采用階梯色譜柱的方式，按照流動(dòng)相位，使用-0.1%甲酸水溶液，柱溫度控制在30T，調(diào)整監(jiān)測(cè)的波長(zhǎng)為300nm。通過(guò)調(diào)整流速1.0控制進(jìn)樣量。結(jié)果：在咖啡酸、燈盞花乙素、綠原酸的線性范圍分別為，0. 072 ～ 5. 031 （r = 0. 999 9）， 0. 081 ～5. 090（r = 0. 999 9） ，0. 071 ～4. 692（r = 0. 999 9），加樣回收率分為別98. 62% （ RSD 1.87% ），95. 58% （ RSD 1. 68% ） ， 100. 98% （ RSD 1. 83% ）。結(jié)論：HPLC法通過(guò)有效的檢測(cè)方式，可以準(zhǔn)確快捷的作為燈盞細(xì)辛注射液的實(shí)際質(zhì)量控制操作依據(jù)，其中，燈盞細(xì)辛注射液中包含綠原酸、咖啡酸、燈盞花乙素的成分。

關(guān)鍵詞：HPLC法;燈盞細(xì)辛注射液;成分

引言

燈盞細(xì)辛注射液是以菊科類植物的干燥全草提取物為主，具有良好的活血化瘀、通絡(luò)止痛的作用。在臨床上廣泛應(yīng)用于心腦血管的治療。腦出血、冠心病、肺心病等治療效果良好。其中的黃酮、酚酸是兩大物質(zhì)成分。黃酮中以燈盞花乙素為主，是公認(rèn)的燈盞細(xì)辛注射液的主要成分。酚酸中包含咖啡酸、綠原酸，均屬于分異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)?？梢杂行У目寡妆８?，具有抗氧化、抗凝血的作用。通過(guò)燈盞細(xì)辛注射液的操作，可以實(shí)現(xiàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的明確化，保證其成分、含量的合理性。依據(jù)HPLC含量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測(cè)定法，恩熙確定綠原酸、咖啡酸、燈盞花乙素的實(shí)際標(biāo)準(zhǔn)含量要點(diǎn)。

1 ?實(shí)驗(yàn)操作研究要求

采用脫氣機(jī)、四元泵、恒溫箱、紫外線檢測(cè)器等進(jìn)行分析，分析燈盞細(xì)辛注射液的實(shí)際批號(hào)、標(biāo)準(zhǔn)，分析其含量?？Х人岬暮恳话憧梢赃_(dá)到98%以上。依據(jù)實(shí)驗(yàn)用水的標(biāo)準(zhǔn)，調(diào)整確定超純水、甲酸、甲醇等作為色譜劑使用。

2 方法操作及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 色譜操作試驗(yàn)的系統(tǒng)適用條件

按照色譜條件要求，通過(guò)色譜柱、柱溫等調(diào)整監(jiān)測(cè)點(diǎn)的波長(zhǎng)。通過(guò)流速、進(jìn)樣量等確定流動(dòng)效果，調(diào)整階梯洗脫的比例量，一般以4min為間隔，調(diào)整比例范圍和標(biāo)準(zhǔn)。

按照系統(tǒng)所適應(yīng)的試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)范圍，調(diào)整色譜的條件。通過(guò)綠原酸、咖啡酸、燈盞花乙素等，確定其實(shí)際的搭接標(biāo)準(zhǔn)。調(diào)整對(duì)照品以確定供應(yīng)試驗(yàn)品的色譜范圍。

2.2 溶液的操作制備

按照對(duì)照品的溶液操作范圍，調(diào)整精密度，以獲取綠原酸、咖啡酸、燈盞花乙素，分別溶于10ml的量瓶中。加入甲醇稀釋至標(biāo)注刻度，搖勻，調(diào)整期各項(xiàng)照品標(biāo)準(zhǔn)的儲(chǔ)備液，做好備用工作。精密度操作中，需要明確精密移動(dòng)儲(chǔ)備下的適用量。通過(guò)5ml的兩瓶，適用50%的甲醇溶液，至標(biāo)準(zhǔn)刻度，搖勻，獲取復(fù)合標(biāo)準(zhǔn)溶度的溶液，按照溶液配比進(jìn)行對(duì)照分析。

精密移動(dòng)獲取1ml的燈盞細(xì)辛注射液，溶液至于50ml的量瓶中，適用50%的甲醇定容至標(biāo)準(zhǔn)刻度，搖勻，適用12000r/min離心10min后，調(diào)整測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液量。

2.3 線性關(guān)系考察分析

按照精密吸取的相關(guān)混合液，通過(guò)對(duì)照品溶液的適量度操作，調(diào)整稀釋達(dá)到不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合液。依據(jù)對(duì)照品的溶液范圍，調(diào)整獲取20L標(biāo)準(zhǔn)的HPLC層。依據(jù)各峰值面積記錄，確定縱坐標(biāo)。濃度為橫坐標(biāo)，獲取曲線標(biāo)準(zhǔn)方程公式。綠原酸=52.6C-0.43 （「=0.999 9），燈養(yǎng)花乙素= 59C - 1. 86 （ r = 0. 999 9）

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)分析

按照精密度移動(dòng)曲線方式，通過(guò)1ML的燈盞細(xì)辛注射液，通過(guò)多次方式的制備操作，重復(fù)6次，獲取峰值面積。綠原酸、咖啡酸、燈盞花乙素三種的峰值RSD分別為0.97% ， 1.25% ，1.37% 。

2.5 多次反復(fù)試驗(yàn)操作

通過(guò)精密度儀器獲取1ML標(biāo)準(zhǔn)的燈盞細(xì)辛注射液，調(diào)整制備的供液標(biāo)準(zhǔn)方法，測(cè)定綠原酸、咖啡酸、燈盞花乙素三種的平均質(zhì)量濃度，分析保留時(shí)間內(nèi)的RSD比例變化范圍。

2.6 穩(wěn)定性水平試驗(yàn)分析

選取燈盞細(xì)辛注射液，依次按照制備的試驗(yàn)品溶液量，室溫標(biāo)準(zhǔn)放置，確定其實(shí)際測(cè)定的范圍。根據(jù)RSD系統(tǒng)確定分別為1.27%，0.88%，1.65%。

2.7 回收率試驗(yàn)分析

按照燈盞細(xì)辛注射液的0.5ml溶液量，加入綠原酸、咖啡酸、燈盞花乙素進(jìn)行調(diào)配，確定制備液的比例量。結(jié)合實(shí)際制備供應(yīng)溶液的標(biāo)準(zhǔn)，確定平行下的測(cè)試范圍和含量，做好數(shù)據(jù)的回收率分析。

2.8 含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)分析

選取合理的植被試驗(yàn)操作，結(jié)合燈盞細(xì)辛溶液量，分析綠原酸、咖啡酸、燈盞花乙素的含量，分別占總量的1.53%，1.28%，1.68%。

3 談?wù)摲治?/p>

燈盞細(xì)辛是從民間有效獲取發(fā)掘出來(lái)的，對(duì)于心腦血管疾病具有良好的治療效果。按照燈盞細(xì)辛注射液的治療操作需求，分析咖啡酰、吉奎寧酸紙類化學(xué)的主要成分和性能，依據(jù)燈盞細(xì)辛注射液中的燈盞花乙素、確定總芬酸類的標(biāo)準(zhǔn)。調(diào)整其中的綠原酸、咖啡酸，使用HPLC測(cè)定燈盞細(xì)辛注射液中的綠原酸、咖啡酸、燈盞花乙素含量，建立完善的穩(wěn)定分析標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)施全面的、細(xì)致的檢查分析，制定合理的分離標(biāo)準(zhǔn)。在有限的條件下，調(diào)整確定藥業(yè)色譜的范圍，確定混合物的含量和操作標(biāo)準(zhǔn)要求，完善燈盞細(xì)辛的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，做好參考思路分析。

經(jīng)過(guò)DAD數(shù)據(jù)全波長(zhǎng)掃描分析，在300nm狀態(tài)下確定最佳的測(cè)定波長(zhǎng)。通過(guò)色譜峰值的變化觀測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)在324nm的時(shí)候，為最佳的檢測(cè)波長(zhǎng)，其色譜峰符合測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)性能要求。綠原酸前后的溶劑、實(shí)驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)符合實(shí)際要求，經(jīng)過(guò)50%比例量的甲醇確定最佳的稀釋溶劑量。按照實(shí)際含量的測(cè)定結(jié)果顯示，燈盞細(xì)辛注射液中的燈盞花乙素、咖啡酸、綠原酸含量穩(wěn)定，符合實(shí)驗(yàn)稀釋溶液中的參考標(biāo)準(zhǔn)范圍。通過(guò)反復(fù)的試驗(yàn)測(cè)定分析，確定其藥材的來(lái)源和標(biāo)準(zhǔn)要求，具有進(jìn)一步測(cè)定的效果。

結(jié)語(yǔ)

綜上所述，含量測(cè)定數(shù)據(jù)分析中，通過(guò)燈盞細(xì)辛注射操作，調(diào)整不同批次下的藥業(yè)比例量值，經(jīng)過(guò)反復(fù)的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，受藥材的來(lái)源影響，其實(shí)際的操作需要符合操作標(biāo)準(zhǔn)要求，滿足心腦血管疾病治療的標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)HPLC測(cè)定方法，準(zhǔn)確的判斷燈盞細(xì)辛注射液中含有多種成分，其成分符合臨床醫(yī)學(xué)中對(duì)于不同臨床表現(xiàn)的治療需求，提高整體治療操作的合理性。通過(guò)多批次的溶液量含量分析，確定其實(shí)際的峰值標(biāo)準(zhǔn)。按照具體的操作來(lái)源量，調(diào)整不同批次下的不同藥品含量，通過(guò)調(diào)整高低標(biāo)準(zhǔn)比例，保證實(shí)際符合臨床治療的標(biāo)準(zhǔn)需求。

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