宮頸癌患者組織β-catenin、Wnt1表達及與新輔助化療療效的關(guān)系

譚建媛 陽莉 羅安莉

宮頸癌是全球第二大女性惡性腫瘤，數(shù)據(jù)顯示，我國新發(fā)病例占發(fā)展中國家25%，且趨于年輕化，如何有效防治其發(fā)生發(fā)展是腫瘤科醫(yī)生及醫(yī)學(xué)界亟待解決問題之一［1-2］?；熓钱?dāng)前治療宮頸癌有效手段，特別是新輔助化療，能顯著降低腫瘤分期，延長生存期限，提高生活質(zhì)量，但相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，30%以上Ⅲ～Ⅳ期患者對新輔助化療不敏感［3-4］，因此及時、準(zhǔn)確評估新輔助化療療效對臨床調(diào)整化療方案具有積極臨床意義。新近研究發(fā)現(xiàn)，Wnt/βcatenin 信號通路參與宮頸癌發(fā)生發(fā)展，其中以Wnt1、β-連環(huán)蛋白（β-catenin）最受關(guān)注［5-6］，但關(guān)于其與宮頸癌新輔助化療療效關(guān)系仍缺乏循證支持，故本研究檢測宮頸癌及良性子宮肌瘤患者組織β-catenin、Wnt1 表達，分析其與新輔助化療療效關(guān)系，以期為臨床確定合理化療方案提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2015年10月至2019年10月本院116 例宮頸癌患者作為研究組，年齡26～75 歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）19～24 kg/m2；選取95 例良性子宮肌瘤患者作為對照組，年齡24～76 歲；BMI18～25 kg/m2。本研究征得本院倫理委員會審核通過，患者及家屬知曉并簽署同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

研究組納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合宮頸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］，結(jié)合病理學(xué)檢查確診宮頸癌；年齡＞18 歲；②屬國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）Ⅰa～Ⅱb 期；③入院前1 個月無其他抗腫瘤治療；④具備明確化療指征。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合良性子宮肌瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］，表現(xiàn)為白帶增多、經(jīng)期延長、下腹墜脹、陰道流血、腰痛等癥狀；②術(shù)后病理結(jié)果證實良性子宮肌瘤。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝、心、腎等臟器器質(zhì)性病變；②妊娠期及哺乳期女性；③合并其他惡性腫瘤；④近期接受放化療及手術(shù)者；臨床資料不完整者。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法

①標(biāo)本采集。采集宮頸癌及良性子宮肌瘤患者手術(shù)期間切除組織，約100 mg，生理鹽水清洗血跡，保存于液氮中備用。②主要設(shè)備與儀器。Wnt1 及β-catenin 一抗購自湖南遠泰生物科技有限公司，Elecsys2010 電化學(xué)發(fā)光儀（瑞士Roche 公司），組織總蛋白提取試劑盒（上海邦奕生物科技有限公司）。③實時定量PCR（RT-PCR）。取手術(shù)切除組織進行石蠟包埋，提取組織總RNA，DNA 酶Ⅰ處理并純化，3 μg RNA 及Superscript進行逆轉(zhuǎn)錄，生成cDNA，通過SYBP green 染料法進行定量檢測，設(shè)計Wnt1、β-catenin 擴增引物序列，見表1，RT-PCR 擴增條件：94℃，5 min，10個PCR 循環(huán)［94℃，20 s，60℃，20 s，72℃，20 s，82℃，5 s］。各樣品目基因及管家基因分別進行PCR 反應(yīng)，根據(jù)繪制梯度稀釋DNA 標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接生成各樣品目基因及管家基因濃度結(jié)果，Wnt1 mRNA 模板拷貝數(shù)以β-catenin 為內(nèi)參得出校正后mRNA 相對值。

1.3.2 治療方法

宮頸癌患者均采取新輔助化療，靜脈滴注135 mg/m2紫杉醇（四川協(xié)力制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20073913），3 h 后，靜脈滴注80 mg/m2順鉑（江蘇豪森藥業(yè)集團有限公司，國藥準(zhǔn)字H20010743），1 d，前后兩天水化，3 天一療程，每個療程間隔21 d，連續(xù)化療3 個療程。

1.3.3 療效評價

化療3 個療程后進行療效評價。按照世界衛(wèi)生組織（World health organization，WHO）實體瘤評價標(biāo)準(zhǔn)評價［9］，包含完全緩解（Complete response，CR）、部分緩解（Partial response，PR）、疾病穩(wěn)定（Stable disease，SD）、疾病進展（Progressivedisease，PD）等4 個等級，據(jù)此發(fā)現(xiàn)10 例CR、56 例PR，30例SD，20 例PD。

1.4 觀察指標(biāo)

①兩組組織β-catenin、Wnt1 表達。②研究組不同臨床病理特征組織β-catenin、Wnt1 表達。③β-catenin、Wnt1 表達與臨床病理特征相關(guān)性。④研究組不同化療療效組織β-catenin、Wnt1 表達。⑤β-catenin、Wnt1 表達與化療療效關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 22.0 軟件進行處理數(shù)據(jù)，計量資料以（）表示，行t檢驗，多組間比較用單因素方差分析，計數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗，Spearman分析β-catenin、Wnt1 表達與臨床病理特征相關(guān)性，Logstic 分析β-catenin、Wnt1 與新輔助化療療效關(guān)系，P＜0.05 表明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床資料

兩組年齡、BMI、生育史、吸煙史、腫瘤直徑等資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組臨床資料［n（%），（±s）］Table 1 clinical data of 2 groups［n（%），（±s）］

表1 兩組臨床資料［n（%），（±s）］Table 1 clinical data of 2 groups［n（%），（±s）］

臨床資料年齡（歲）BMI（kg/m2）生育史吸煙史腫瘤直徑（cm）≥4＜4淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無組織分化低分化中、高分化FIGO 分期ⅠaⅡaⅡb病理類型鱗癌腺癌腺鱗癌研究組（n=116）50.48±10.33 21.51±1.12 104（89.66）13（11.21）60（51.72）56（48.28）32（27.59）84（72.41）42（36.21）74（63.79）18（15.52）58（50.00）40（34.48）63（54.31）32（27.59）21（18.10）對照組（n=95）51.27±9.59 21.38±1.33 86（91.49）10（10.53）45（47.37）50（52.63）----------t/χ2值0.571 0.771 0.044 0.025 0.396 P 值0.569 0.442 0.833 0.875 0.529

2.2 兩組組織β-catenin、Wnt1 表達水平

研究組組織β-catenin、Wnt1 表達水平高于對照組（P＜0.05）。見表2。

2.3 研究組不同臨床病理特征β-catenin、Wnt1 表達水平的比較

研究組不同腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化、FIGO 分期患者β-catenin、Wnt1 表達比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表2 兩組組織β-catenin、Wnt1 表達水平比較（±s）Table 2 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in 2 groups（±s）

表2 兩組組織β-catenin、Wnt1 表達水平比較（±s）Table 2 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in 2 groups（±s）

組別研究組對照組t 值P 值n 116 95 Wnt1（2-△△c）16.47±4.94 11.50±3.44 8.295＜0.001 β-catenin（2-△△c）34.24±10.27 23.95±7.21 8.242＜0.001

2.4 β-catenin、Wnt1 表達水平與臨床病理特征相關(guān)性

研究組組織β-catenin、Wnt1 表達與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO 分期呈正相關(guān)，與組織分化呈負相關(guān)（P＜0.05）。見表5。

2.5 研究組不同化療療效組織β-catenin、Wnt1 表達水平

化療前研究組不同療效患者β-catenin、Wnt1表達比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），化療后研究組CR 患者β-catenin、Wnt1 表達低于PR、SD、PD 患者（P＜0.05）。見表6。

2.6 β-catenin、Wnt1 與新輔助化療療效關(guān)系

Logistic 分析顯示，β-catenin、Wnt1 與新輔助化療療效有關(guān)（P＜0.05）。見表7。

3 討論

目前，宮頸癌的鑒別診斷及療效評估多依賴于影像學(xué)、實驗室檢查，雖具有一定適用價值，但也存在不足之處，如影像學(xué)檢查易受醫(yī)師個人經(jīng)驗、費用等因素影響，實驗室檢查則存在取材質(zhì)量不一、時間長等問題［10］。因此，探索一種高效、準(zhǔn)確鑒別手段對宮頸癌早期診斷及防治具有重要意義。

宮頸癌是多基因、多因素、多階段參與的生物學(xué)過程，當(dāng)前證據(jù)證明，宮頸癌形成與Wnt/βcatenin 信號通路密切相關(guān)［11］。Wnt1 是Wnt 通路始動蛋白，其可刺激Wnt/β-catenin 信號通路，致使下游靶基因過度表達，最終導(dǎo)致腫瘤細胞過度增長。而β-catenin 是Wnt 信號向細胞核傳遞過程中的信號分子，疾病狀態(tài)下，游離β-catenin 進入細胞核，調(diào)控靶基因表達，參與腫瘤細胞生長、侵襲［12］。靳妍霞等［13］發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者癌組織Wnt1、β-catenin 呈高表達，與本研究結(jié)論相符，提示W(wǎng)nt1、β-catenin 異常發(fā)表可能與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。鄭小妹等［14］學(xué)者報道，隨病理分級、腫瘤直徑增加及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，β-catenin 表達逐漸升高，提示β-catenin 在宮頸癌發(fā)生發(fā)展起著關(guān)鍵作用。β-catenin 高表達可降低細胞上皮組織間黏附能力，增加細胞侵襲能力，加快癌細胞轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致宮頸癌病情進一步惡化［15］。進一步研究發(fā)現(xiàn)β-catenin、Wnt1 異常高表達可作為評估宮頸癌患者病情程度的指標(biāo)之一。

表3 研究組不同臨床病理特征β-catenin、Wnt1 表達水平比較（±s）Table 3 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in different clinicopathological features of the study groups（±s）

表3 研究組不同臨床病理特征β-catenin、Wnt1 表達水平比較（±s）Table 3 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in different clinicopathological features of the study groups（±s）

臨床病理特征年齡（歲）≥46＜46腫瘤直徑（cm）≥4＜4淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無組織分化低分化中、高分化FIGO 分期ⅠaⅡaⅡb病理類型鱗癌腺癌腺鱗癌n 62 54 60 56 32 84 42 74 18 58 40 63 32 21 Wnt1（2-△△c）16.41±4.33 16.53±4.24 18.84±5.65 14.10±4.89 19.12±4.38 13.82±5.02 19.67±5.91 13.27±3.98 12.12±3.64 15.59±4.65 21.70±6.51 16.37±4.91 17.11±5.13 15.93±4.80 F/t 值0.150 4.816 5.256 6.953 400.815 0.404 P 值0.881＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001 0.669 β-catenin（2-△△c）34.30±9.99 34.18±10.11 38.11±11.73 30.37±10.95 39.56±11.85 28.92±8.68 38.89±10.45 29.59±11.03 25.87±7.76 35.74±10.72 41.11±12.33 34.21±10.26 33.99±10.20 34.52±10.36 F/t 值0.064 3.667 5.310 4.447 12.114 0.165 P 值0.949＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001 0.848

表4 β-catenin、Wnt1 表達水平與臨床病理特征相關(guān)性Table 4 Correlation between expression level of β-catenin and wnt1 and clinicopathological characteristics

近年來隨臨床對Wnt/β-catenin 信號通路研究不斷深入，部分學(xué)者發(fā)現(xiàn)，其水平升高是影響惡性腫瘤化療療效危險因素，并指出阻斷其表達可抑制Wnt 信號所致Wnt/β-catenin 信號通路激活，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，促進疾病良好轉(zhuǎn)歸［16］。胡文勇等［17］認為，抑制Wnt/β-catenin 信號通路有助于增強骨肉瘤細胞化療敏感性，改善患者生存期，為臨床調(diào)整化療方案提供理論參考。由此可見，Wnt/β-catenin 信號通路可為腫瘤分子靶向治療提供新手段，但關(guān)于其在宮頸癌新輔助化療中作用尚無相關(guān)研究，故本研究對此進行探討結(jié)果發(fā)現(xiàn)β-catenin、Wnt1 可作為評估宮頸癌新輔助化療的指標(biāo)之一。

表5 研究組不同化療療效組織β-catenin、Wnt1 表達水平比較Table 5 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in different chemotherapy effect tissues of study group（±s）

表5 研究組不同化療療效組織β-catenin、Wnt1 表達水平比較Table 5 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in different chemotherapy effect tissues of study group（±s）

療效分級CR PR SD PD F 值P 值n 10 56 30 20 Wnt1（2-△△c）化療前15.53±4.60 16.35±4.05 16.89±3.97 17.11±3.56 0.467 0.706化療后12.44±3.73 14.89±4.46 18.56±5.57 21.67±4.26 14.572＜0.001 β-catenin（2-△△c）化療前33.39±11.85 33.95±11.38 34.89±10.29 34.73±10.42 0.081 0.970化療后22.78±6.84 26.61±7.99 35.57±10.67 40.33±12.10 15.366＜0.001

綜上所述，宮頸癌患者組織β-catenin、Wnt1 呈高表達，其表達情況與臨床病理特征、新輔助化療療效密切相關(guān)，有利于宮頸癌早期鑒別診斷及指導(dǎo)臨床治療。

表6 β-catenin、Wnt1 與新輔助化療療效關(guān)系Table 6 Relationship between β-catenin，wnt1 and neoadjuvant chemotherapy