酶聯(lián)免疫熒光試紙法在前列腺癌篩查中的應(yīng)用價值*

馬化鑫， 張進(jìn)祥， 周游， 袁紅, 謝慈妹， 熊全， 陳林強(qiáng)， 徐邦牢， 陳業(yè)輝

廣州市第一人民醫(yī)院、華南理工大學(xué)附屬第二醫(yī)院 1麻醉科， 2泌尿外科, 3檢驗(yàn)科(廣東廣州 510180)

前列腺癌在歐美國家的發(fā)病率及病死率分別居首位及次位，前列腺癌的復(fù)發(fā)率亦較高，10年內(nèi)復(fù)發(fā)率高達(dá)50%以上[1-2]。近年來，我國前列腺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢，前列腺癌發(fā)病率在中國男性惡性腫瘤中排名第7位,病死率排名第10位[3]。前列腺癌患者早期癥狀不典型，容易發(fā)生骨轉(zhuǎn)移[4-5]。我國初診前列腺癌患者的臨床分期與西方發(fā)達(dá)國家相比有很大差異，初診的前列腺癌患者臨床分期較晚，總體預(yù)后遠(yuǎn)差于西方發(fā)達(dá)國家[6]。故中國前列腺癌篩查專家共識明確指出通過檢測TPSA進(jìn)行前列腺癌篩查可以增加前列腺癌的檢出率，發(fā)現(xiàn)早期前列腺癌，早診斷早治療可以提高我國前列腺癌患者總體生存率[7]。目前，利用酶聯(lián)免疫熒光試紙法進(jìn)行前列腺癌篩查的國內(nèi)外文獻(xiàn)尚未見報告，我們做了這方面的研究工作，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在充分知情告知的前提下，收集參與我院前列腺癌篩查的成年男性105例受試者的年齡、血液樣本、前列腺體積等資料，105例受試者年齡(60.74±8.77)歲，前列腺體積(39.43±24.28)mL。

1.2 方法

1.2.1 TPSA檢測 所有受試者在同一時間同一肘靜脈部位用EDTA抗凝管抽取2 mL靜脈血和用干燥管抽取3 mL靜脈。其中EDTA抗凝管2 mL用酶聯(lián)免疫熒光試紙法檢測，試管轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心5 min后，將35 μL血清樣本加到試紙卡后放置1 min，使血清滲入試紙，然后將試紙卡插入酶聯(lián)免疫熒光免疫分析儀(FRENDM System，由日本NanoEnTek, Inc.納諾恩泰株式會社生產(chǎn))，檢測完畢后，試紙卡自動退出，分析儀將顯示檢測結(jié)果并自動打印結(jié)果，檢測時間約2 min。另外干燥管3 mL經(jīng)3 500 r/min 離心 5 min，分離血清于4℃保存，采用常規(guī)羅氏Roche Cobas e601 電化學(xué)發(fā)光試劑法檢測。

1.2.2 前列腺體積測定 泌尿系統(tǒng) B 型超聲檢查，檢測有無前列腺結(jié)節(jié)及前列腺癌病變，并測定前列腺體積。超聲檢測診斷儀器型號為 HITACHI Avius，HIVISION,探頭頻率 5.0 MHz，通過彩超顯像以及多普勒血流成像技術(shù)觀察前列腺的大小，形態(tài)及其內(nèi)的回聲血流情況，測量前列腺前后、左右、上下徑，計(jì)算前列腺體積，計(jì)算公式為：(前后徑×上下徑×左右徑)π/6。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間比較采用配對樣本t檢驗(yàn)，并做線性相關(guān)分析。以P<0.05 為差異和相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 篩查結(jié)果 105例前列腺癌篩查受試者中，TPSA異常者在后續(xù)磁共振及前列腺穿刺活檢病例證實(shí)前列腺癌共2例。

2.2 酶聯(lián)免疫熒光試紙法與常規(guī)電化學(xué)發(fā)光試劑法兩種方法檢測獲得TPSA數(shù)值的配對比較結(jié)果 105例受試者中，兩種檢測方法測得的TPSA數(shù)值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。以常規(guī)電化學(xué)發(fā)光試劑法測得的TPSA數(shù)值為參照標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)TPSA>4.00 μL/L和當(dāng)TPSA<4.00 μL/L時，這兩種檢測方法測得的TPSA數(shù)值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表1。

表1 兩種檢測方法TPSA數(shù)值配對比較結(jié)果

2.3 酶聯(lián)免疫熒光試紙法與常規(guī)電化學(xué)發(fā)光試劑法兩種方法檢測獲得TPSA數(shù)值相互之間的相關(guān)性分析 在總體受試者、TPSA>4.00 μg/L組、TPSA<4.00 μg/L組3組病例中，這兩種檢測方法所獲得的TPSA數(shù)值之間均具有較高的相關(guān)性(P<0.01)，見表2?？傮w受試者、TPSA>4.00 μg/L組、TPSA<4.00 μg/L組3組這兩種方法的相關(guān)性散點(diǎn)圖見圖1～3。

圖1 總體受試者的相關(guān)性散點(diǎn)圖

圖2 TPSA>4.00 μg/L組的相關(guān)性散點(diǎn)圖

圖3 TPSA<4.00 μg/L組的相關(guān)性散點(diǎn)圖

表2 兩種檢測方法TPSA數(shù)值相互之間的相關(guān)性分析

2.4 酶聯(lián)免疫熒光試紙法與常規(guī)電化學(xué)發(fā)光試劑法兩種方法檢測獲得TPSA數(shù)值與前列腺體積之間的相關(guān)性分析 這兩種方法測得的TPSA數(shù)值均與前列腺體積具有較高的相關(guān)性(P<0.01)，見表3。這兩種檢測方法TPSA數(shù)值與前列腺體積之間的相關(guān)性散點(diǎn)圖見圖4～5。

表3 兩種檢測方法TPSA數(shù)值與前列腺體積之間的相關(guān)性分析

圖4 試紙法與前列腺體積的相關(guān)性散點(diǎn)圖

圖5 試劑法與前列腺體積的相關(guān)性散點(diǎn)圖

3 討論

中國前列腺癌的發(fā)病率正在逐年上升，初次確診前列腺癌患者的臨床分期比較晚，總體預(yù)后比較差。所以，對高危前列腺癌人群進(jìn)行篩查，以達(dá)到早期診斷和早期治療，是提高中國前列腺癌患者總體生存率的有效手段。

到目前為止，對于前列腺癌的檢測、分期、治療后的監(jiān)測等方面，沒有一種生物標(biāo)志物比TPSA更具有臨床價值。在前列腺癌的篩查方面，國內(nèi)外推薦進(jìn)行血清TPSA檢測，不推薦將MRI檢查、PCA3檢測、4K score檢測、P2PSA檢測、前列腺健康指數(shù)等作為前列腺癌篩查的常規(guī)手段[7]。

中國抗癌協(xié)會泌尿男生殖系統(tǒng)腫瘤專業(yè)委員會的前列腺癌學(xué)組形成的相關(guān)專家共識表明：通過前列腺癌篩查可以有效增加前列腺癌的檢出率，可以發(fā)現(xiàn)早期前列腺癌。特別是對于預(yù)期壽命10年以上的男性和前列腺癌高危人群，定期進(jìn)行TPSA檢測是必要的[4-5,7]。

TPSA的檢測方法包括酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫分析法、膠乳增強(qiáng)免疫比濁法、時間分辨熒光免疫分析法、膠體金法、微磁粒分離酶聯(lián)免疫法、流式熒光免疫法等，但都存在如熒光背景突光、放射性廢物、熒光淬滅、測定范圍有限、靈敏度不佳、標(biāo)記物穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)。不同TPSA檢測系統(tǒng)在檢測結(jié)果上存在一定差異，給臨床前列腺癌的診斷帶來了困惑。電化學(xué)發(fā)光免疫試劑法是目前最先進(jìn)的標(biāo)記免疫測定技術(shù)，具有靈敏度高、特異度強(qiáng)、檢測范圍寬等優(yōu)點(diǎn)[8-10]，我們醫(yī)院TPSA檢測也是采用電化學(xué)發(fā)光免疫試劑法。

但電化學(xué)發(fā)光法試劑法檢測所需的儀器設(shè)備及試劑價格昂貴，操作程序復(fù)雜，檢測時間較長，通常是第2天才有結(jié)果，不便于進(jìn)行前列腺癌篩查使用。為促進(jìn)前列腺癌篩查的順利開展，有日本公司生產(chǎn)出酶聯(lián)免疫熒光試紙法分析儀，使用起來方便快捷。應(yīng)用該檢測方法只需將抽血后的試管離心5 min，血清滲入試紙1 min，將試紙插入分析儀檢測2 min出結(jié)果，所以從抽血到出TPSA的檢測結(jié)果只需要8 min，很大程度上節(jié)省篩查的時間、人力等成本。

我們的研究發(fā)現(xiàn)酶聯(lián)免疫發(fā)光試紙法測得的TPSA數(shù)值略低于電化學(xué)發(fā)光試劑法測得的TPSA數(shù)值，差值均值為0.41 μg/L。但這兩種檢測方法所獲得的TPSA數(shù)值之間具有較高的相關(guān)性，而且這兩種檢測方法所獲得的TPSA數(shù)值與前列腺體積也均具有較高的相關(guān)性。這些研究結(jié)果表明：在前列腺癌篩查中，酶聯(lián)免疫發(fā)光試紙法測得的TPSA數(shù)值與電化學(xué)發(fā)光試劑法測得的TPSA數(shù)值的差異是可以接受的，篩查過程中酶聯(lián)免疫試紙法檢測所得TPSA也可以通過本研究中不同TPSA區(qū)間的線性回歸方程來校正。另外，酶聯(lián)免疫試紙法檢測TPSA方法便捷，對設(shè)備要求不高，檢測過程具有經(jīng)濟(jì)、快速的特點(diǎn)，所以酶聯(lián)免疫試紙法可以作為前列腺癌篩查工作中TPSA的檢測方法。

需注意的是此款酶聯(lián)免疫試紙法TPSA檢測范圍為0.10～25.00 μg/L，檢測范圍比較窄，靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度有待進(jìn)一步提升，不能單獨(dú)作為確診或排除前列腺癌的依據(jù)。對于該方法檢測結(jié)果異常者，前列腺癌篩查團(tuán)隊(duì)的成員應(yīng)及時與篩查對象溝通，必要時安排磁共振、前列腺穿刺活檢等檢查進(jìn)一步明確前列腺癌的可能性。

綜上所述，利用酶聯(lián)免疫試紙法檢測TPSA可用于臨床前列腺癌的篩查，是一種有效、便捷、經(jīng)濟(jì)的早期篩查診斷方法，可在前列腺癌篩查工作中推廣應(yīng)用。