全麥粉和小麥粉中烷基間苯二酚同系物組成的對(duì)比分析

鄒燕羽，方勇，李彭，黃沁沁，夏季，劉琴，謝旻皓，胡秋輝

（南京財(cái)經(jīng)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院/江蘇省現(xiàn)代糧食流通與安全協(xié)同創(chuàng)新中心/江蘇省糧油品質(zhì)控制及深加工技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210023）

0 引言

【研究意義】烷基間苯二酚（Alkylresorcinols，ARs），是 1,3-二羥基-5-烷基苯衍生物的總稱，其苯環(huán)第5位上主要由奇數(shù)個(gè)碳烷基側(cè)鏈取代，主要由5-十七烷基間苯二酚（C17:0）、5-十九烷基間苯二酚（C19:0）、5-二十一烷基間苯二酚（C21:0）、5-二十三烷基間苯二酚（C23:0）和5-二十五烷基間苯二酚（C25:0）等多個(gè)同系物組成[1]。ARs是主要存在于小麥、黑麥等谷物麩皮中的一類具有兩親性[2]的特殊酚類類脂，具有多種生理功能，如抗氧化作用[3]、抑菌性[4-5]、對(duì)腫瘤具有抑制作用[6]等，受到研究者的廣泛關(guān)注。近年來，人們對(duì)谷物營養(yǎng)方面的需求，已從追求產(chǎn)品精細(xì)化轉(zhuǎn)變?yōu)閺?qiáng)調(diào)谷物產(chǎn)品應(yīng)在合理加工前提下最大程度的保留其營養(yǎng)成分，全麥粉產(chǎn)品深受消費(fèi)者青睞[7]。1999年，美國谷物化學(xué)協(xié)會(huì)（AACC）將全麥粉定義為：由小麥（硬質(zhì)小麥除外）制備而成的，保留完整麩皮、胚芽和胚乳，各組分含量比例與整粒小麥一致[8]。與小麥粉相比，全麥粉含有更多的維生素、礦物質(zhì)、抗氧化劑和其他營養(yǎng)物質(zhì)。美國食品藥品管理局（FDA）認(rèn)為攝入全麥粉可降低慢性流行病的發(fā)病率，并將全麥粉納入居民膳食指南[9-10]。然而中國對(duì)全麥粉的研究尚處于起步階段，尚未建立全麥粉的制粉工藝和品質(zhì)等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，甚至對(duì)全麥粉的定義都不清楚。目前，國內(nèi)全麥粉產(chǎn)品行業(yè)發(fā)展迅速，市場上出現(xiàn)了形形色色的全麥粉產(chǎn)品，但質(zhì)量參差不齊。不良商家為謀取利益，將普通小麥粉與少量麩皮混合或者直接將小麥粉冒充全麥粉進(jìn)行銷售。這種以次充好欺騙消費(fèi)者的不良行為嚴(yán)重影響到我國全麥粉市場秩序，甚至影響到我國糧食流通與國際貿(mào)易合作。而在前人的研究中發(fā)現(xiàn)ARs是判斷全麥粉食品的生物標(biāo)記，可作為鑒別全麥?zhǔn)称肥欠窀缓湻刍螓熎さ囊环N客觀方法[11-12]。且ARs主要存在于小麥的麩皮中，幾乎不存在于胚乳和胚芽中，因此能夠作為判斷全麥粉產(chǎn)品的有效指標(biāo)[13]。ARs對(duì)全麥粉品質(zhì)特性影響較大，研究麥粉產(chǎn)品中ARs同系物組成有助于全麥粉、小麥粉產(chǎn)品原料的篩選，對(duì)全麥粉產(chǎn)品品質(zhì)的把控具有積極指導(dǎo)作用。通過高效液相建立一種有效、穩(wěn)定的ARs同系物檢測方法，進(jìn)行全麥粉、小麥粉和小麥麩皮中ARs同系物組成的對(duì)比分析研究，在ARs同系物組成檢測分析技術(shù)、全麥粉產(chǎn)品真?zhèn)闻袆e和麥類全谷物產(chǎn)品品質(zhì)控制方面具有重要的意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】在ARs的提取技術(shù)方面，目前的研究大部分存在提取效率低、提取量少的問題。例如，ROSS等[14]選用乙酸乙酯作為提取溶劑，常溫下振蕩24 h后可得ARs粗提物，但提取效率不高。GUNENC等[15]利用近年來發(fā)展起來的超臨界流體萃取分離提取技術(shù)，通過調(diào)整極性助溶劑與非極性流體的比例提高了ARs萃取率。雖然超臨界流體萃取技術(shù)具有諸多優(yōu)點(diǎn)，但是由于設(shè)備操作成本高、分離提取量小，該方法難以應(yīng)用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。彭田園等[16]采用超聲波輔助提取手段，將提取時(shí)間由48 h縮短至2 min，且樣品用量少、重復(fù)性好，適用于全麥粉中ARs的快速提取。同時(shí)，超聲波輔助提取伴隨著機(jī)械效應(yīng)，使溶劑和物料充分接觸，加快有效成分的溶出且對(duì)提取物中熱穩(wěn)定性差的活性組分破壞性較低[17]。但是超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)提取量較少，不適用于ARs的大量提取。在ARs檢測方法的研究方面，目前國內(nèi)關(guān)于麥谷類中ARs的檢測技術(shù)及ARs作為全麥產(chǎn)品標(biāo)記物方面的研究仍鮮有報(bào)道。例如，國家糧食和物資儲(chǔ)備局于2015年提出糧食行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[18]，其中指出在室溫下振蕩48 h進(jìn)行ARs的提取，采用分光光度法測定全麥粉中ARs的含量，但局限于ARs的定量，且提取過程費(fèi)時(shí)。王宇飛等[19]通過建立液相-熒光法對(duì)全麥粉中的 ARs進(jìn)行了準(zhǔn)確測量，操作簡單、靈敏度高。在ARs同系物組成研究方面，C15:0在小麥中含量很少，僅在黑麥中少量存在[12]，因此人們對(duì)ARs同系物的研究主要集中在C17:0—C25:0，關(guān)于C15:0的研究較少。對(duì)小麥中ARs同系物的相對(duì)組成研究表明，小麥中的優(yōu)勢(shì)ARs同系物為C21:0[20-21]。LIU等[22]對(duì)21個(gè)不同小麥品種進(jìn)行ARs同系物組成分析，表明ARs同系物C19:0和C21:0最豐富，其次是C17:0、C23:0和 C25:0。【本研究切入點(diǎn)】目前，ARs的研究僅處于初級(jí)階段，大多數(shù)研究只涉及ARs的提取和含量測定的方法，且耗時(shí)，效率低，缺乏系統(tǒng)性，未深入到其同系物組成研究分析和真?zhèn)稳湻燮焚|(zhì)評(píng)價(jià)方面。【擬解決的關(guān)鍵問題】本研究選用市場流通中可購得的全麥粉、小麥粉和實(shí)驗(yàn)室自制麩皮作為研究對(duì)象，對(duì)全麥粉、小麥粉和小麥麩皮共47份樣品中ARs同系物組成進(jìn)行分析，為全麥粉真?zhèn)闻袆e研究提供理論依據(jù)和技術(shù)支持，同時(shí)為全麥粉真?zhèn)卧u(píng)價(jià)和質(zhì)量控制提供可靠依據(jù)。

1 材料與方法

試驗(yàn)于2018年12月至2019年6月在南京財(cái)經(jīng)大學(xué)的江蘇高校糧油質(zhì)量安全控制及深加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)樣品共47份，即市售的26種國內(nèi)外不同品牌的全麥粉，16種國內(nèi)不同品牌的小麥粉和5種小麥麩皮。其中全麥粉通過超市、網(wǎng)店購得共13個(gè)不同企業(yè)的國內(nèi)全麥粉；通過采樣美國、加拿大超市購得共7種企業(yè)品牌的美國全麥粉及 6種不同品牌的加拿大全麥粉。另外，5種麩皮樣品于2018年秋季采買自江蘇南京市、泰州市、淮安市、宿遷市和揚(yáng)州市糧食儲(chǔ)備庫。每個(gè)樣品各取200 g，采用自封袋封裝，于-20℃冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 儀器與試劑

Agilent 1200高效液相色譜儀，美國Agilent公司；ZORBAX SB-C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），美國Agilent公司；分析天平，蘇州賽恩斯儀器有限公司；SB25-12DTDN超聲波清洗器，寧波新芝生物科技股份有限公司；Hei-VAP Precision旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，德國Heidolph公司；SC-3616低速離心機(jī)，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；8位干式氮吹儀，博納艾杰爾科技公司；I-mark酶標(biāo)儀，美國 Bio-rad公司；FW100型高速萬能粉碎機(jī)，天津泰斯特儀器有限公司。

5-十五烷基間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)品（C15:0，純度≥95%）、5-十七烷基間苯二酚（C17:0，純度≥95%）、5-十九烷基間苯二酚（C19:0，純度≥95%）、5-二十一烷基間苯二酚（C21:0，純度≥95%）、5-二十三烷基間苯二酚（C23:0，純度≥95%）和5-二十五烷基間苯二酚（C25:0，純度≥95%）標(biāo)準(zhǔn)品均購于美國Sigma公司；重氮鹽Fast blue B Zn（純度≥95%）購于阿拉丁試劑有限公司；乙酸乙酯（分析純），購于上海山浦化工有限公司；甲醇（色譜純）購于美國Tedia公司；甲酸（色譜純），購于美國ACS公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理 準(zhǔn)確稱取1 g小麥麩皮樣品置于50 mL離心管中，選取乙酸乙酯作為提取溶劑。以烷基間苯二酚提取率為基準(zhǔn)，確定烷基間苯二酚前處理方法。即按照料液比（g·mL-1）1∶40，超聲時(shí)間 30 min，超聲功率300 W的試驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行超聲提取。待超聲提取完成后，離心（3 500 r/min，5 min）。取離心上清液于45℃進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，加入5 mL乙酸乙酯導(dǎo)出殘留物取出氮吹。使用1 mL的色譜級(jí)甲醇對(duì)其進(jìn)行復(fù)溶，過0.45 μm有機(jī)濾膜后進(jìn)行高效液相色譜檢測。

1.3.2 烷基間苯二酚同系物的分析方法

1.3.2.1 液相參數(shù)設(shè)置 對(duì)流動(dòng)相組成、流速、柱溫、檢測波長、進(jìn)樣體積等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，選取適用于麥粉中烷基間苯二酚液相色譜檢測的最佳條件。最終，選用ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm，Agilent）色譜柱，相關(guān)液相色譜參數(shù)設(shè)置為：柱溫35℃；A相流動(dòng)相為0.1%甲酸水溶液，B相為0.1%甲酸甲醇溶液；紫外檢測波長為280 nm；流速為0.5 mL·min-1；進(jìn)樣量為 20 μL。

1.3.2.2 洗脫梯度 流動(dòng)相洗脫條件為：0—5 min，A相15%—10%，B相85—90%；5—10 min，A相10%—5%，B相90%—95%；10—15 min，A相5%—0%，B相95%—100%；15—35 min，A相0%，B相100%。

1.3.2.3 標(biāo)準(zhǔn)樣品液相混標(biāo)色譜圖 選用甲醇（色譜純）為溶劑配制濃度為5 μg·mL-1的烷基間苯二酚混標(biāo)溶液，采用本研究建立的液相方法得到烷基間苯二酚混標(biāo)液相色譜圖，及5種烷基間苯二酚同系物的保留時(shí)間。

1.3.3 方法學(xué)評(píng)價(jià)

1.3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、定量限及檢出限 根據(jù)5種烷基間苯二酚同系物在樣品中的含量范圍，設(shè)置不同烷基間苯二酚同系物質(zhì)量濃度范圍以繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定線性范圍。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立線性回歸方程（y=ax+b）得到相關(guān)系數(shù)（R2）。以相同的檢測方法對(duì)加標(biāo)樣品進(jìn)行檢測，以3倍色譜峰信噪比作為檢出限，以10倍色譜峰信噪比作為定量限[23]。

1.3.3.2 精密度、回收率 選取小麥粉樣品進(jìn)行 6次平行測定，以確定本方法的可靠性。獲得5種烷基間苯二酚同系物各自的含量，將烷基間苯二酚總含量表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±SD），并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）；另外，通過向樣品中添加5種烷基間苯二酚同系物標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用外標(biāo)法定量，驗(yàn)證建立方法的回收率。根據(jù)5種烷基間苯二酚同系物在樣品中的含量水平，分別按高、中、低水平進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，計(jì)算回收率。按如下公式計(jì)算：

P（%）=[（m2-m1）/m3]×100

式中，P為烷基間苯二酚回收率（%）；m1為原樣品中烷基間苯二酚的含量；m2為加標(biāo)后總的烷基間苯二酚含量；m3為烷基間苯二酚加標(biāo)的含量。

1.3.4 樣品檢測 對(duì)26份全麥粉、16份小麥粉及5份小麥麩皮共47份樣品，采用本研究建立的烷基間苯二酚的液相檢測方法對(duì)樣品中的烷基間苯二酚同系物組成及總量進(jìn)行測定分析，每個(gè)樣品重復(fù)3次，數(shù)據(jù)表示為x±SD，并計(jì)算相對(duì)RSD。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Origin 2018統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、分析與作圖，采用JMP13分析軟件進(jìn)行差異顯著性分析，采用 Heml分析軟件進(jìn)行豐度熱圖的繪制。差異顯著性采用student t檢驗(yàn)法，顯著差異選用P＜0.05，每組試驗(yàn)重復(fù)3次，所得結(jié)果以x±SD的形式表示。

2 結(jié)果

2.1 烷基間苯二酚同系物液相檢測方法的建立

通過了解5種ARs同系物的化學(xué)結(jié)構(gòu)性質(zhì)可知，側(cè)鏈烷基碳鏈越長，ARs極性越小[24]。且由于不同同系物之間極性接近，需在一定程度上加大有機(jī)相比例，調(diào)整流動(dòng)相極性才能使5種ARs的高效液相檢測信號(hào)峰分開。如圖1所示，5種ARs同系物混標(biāo)溶液中的各個(gè)色譜峰峰形對(duì)稱，分離度好，無拖尾現(xiàn)象。C17:0保留時(shí)間為18.04 min，C19:0保留時(shí)間為20.30 min，C21:0保留時(shí)間為22.81 min，C23:0保留時(shí)間為26.14 min，C25:0保留時(shí)間為30.79 min。在前人的研究中可以發(fā)現(xiàn)，ARs隨著側(cè)鏈上的碳鏈越長，溶解性越差，極性越弱，出峰時(shí)間越遲。圖 1的各同系物出峰順序與KNODLER等[25]研究結(jié)果一致，表明本研究建立的液相檢測方法可檢測分析ARs同系物組成。

圖1 5種烷基間苯二酚同系物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（5 μg·mL-1）的高效液相色譜圖Fig. 1 High performance liquid chromatography of 5 kinds alkylresorcinol homologues mixed standard solutions(5 μg·mL-1)

2.2 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、定量限、檢出限及精密度 根據(jù)5種ARs同系物在樣品中的含量占比不同，設(shè)置不同濃度梯度的ARs同系物進(jìn)行測定，每個(gè)濃度水平重復(fù)3次。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制ARs同系物的標(biāo)準(zhǔn)曲線。如表1所示，本研究建立的方法測定5種ARs同系物，在一定范圍內(nèi)，其線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999，檢出限及定量限均在μg·mL-1。使用建立的液相色譜檢測方法，選取待檢測試樣中的1份美國全麥粉中的5種ARs同系物進(jìn)行檢測，設(shè)置6個(gè)平行進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)，其 RSD均在5%以內(nèi)，表明儀器精密度良好。

表1 5種烷基間苯二酚同系物線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限及精密度Table 1 Linear regression equation, determination coefficient, LOD, LOQ and precision of five kinds ARs homologues

2.2.2 回收率 前期研究中，筆者發(fā)現(xiàn)全麥粉和精制小麥粉的回收結(jié)果沒有顯著差異，考慮到全麥面粉的基質(zhì)更為復(fù)雜，最終在回收研究中使用了全麥粉[26]。因此，選取 1種中國市售全麥粉作為加標(biāo)基質(zhì)，對(duì)5種ARs同系物進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)。設(shè)計(jì)低、中、高3個(gè)水平，分別設(shè)置3個(gè)平行組。經(jīng)檢測，如表2所示，3個(gè)水平加標(biāo)回收率為81.16%—112.92%，RSD在0.02%—4.02%，表明該檢測方法準(zhǔn)確可靠，可用于小麥及其制品中ARs的定性、定量檢測。

2.3 熱圖分析

ARs的含量可作為麥粉品質(zhì)評(píng)價(jià)的指標(biāo)，利用高效液相對(duì)國內(nèi)外全麥粉、小麥粉及小麥麩皮等共 47份樣品的ARs同系物組成進(jìn)行含量測定，再采用Heml軟件繪制豐度熱圖。通過圖2可以直觀反映不同麥粉樣品中ARs同系物組成及含量之間的差異，圖中每份麥粉樣品中每個(gè)ARs同系物的含量用不同深淺顏色表示，紅色越深代表某種ARs同系物含量越多，藍(lán)色越深表示某種ARs同系物含量越少。

ARs主要存在于小麥麩皮中，其總含量和同系物組成豐富度較高，可作為對(duì)照反映全麥粉和小麥粉中ARs同系物組成情況。如圖2所示，美國、加拿大、中國全麥粉中ARs總含量均值分別為291.39、272.96和105.51 μg·g-1，中國小麥粉和小麥麩皮中ARs總含量均值分別為138.01和1 540.60 μg·g-1。結(jié)果表明，國外全麥粉中ARs總含量明顯高于國內(nèi)全麥粉。在所有麥粉樣品的ARs同系物中，C19:0和C21:0含量占比大，分別為12%—44%、33%—61%，而C17:0、C23:0和C25:0含量占比小。如圖所示，在部分小麥粉樣品中，ARs總含量低，C17:0、C23:0和C25:0這3種同系物的含量為0，但C19:0和C21:0仍存在。圖2聚類分析將C21:0和總含量聚為一類，表明C21:0是麥粉樣品中最主要的ARs同系物。隨著歐氏距離的增大，C19:0也隨之被并到這一類中，說明 C19:0和 C21:0是占主導(dǎo)地位的兩種同系物，這與前人研究一致[27]。另一方面，圖2全麥粉中的ARs同系物組成豐富度優(yōu)于小麥粉，表明不同樣品中ARs同系物組成含量及總量差異顯著，國外全麥粉的ARs總量顯著高于國內(nèi)全麥粉，全麥粉 ARs同系物組成豐富度高于小麥粉。C19:0和C21:0同系物是全麥粉、小麥粉ARs同系物組成中的特征組分，ARs同系物組成豐富度可作為區(qū)分全麥粉和小麥粉的有效指標(biāo)。

表2 5種烷基間苯二酚同系物加標(biāo)回收率測定(n=3)Table 2 Recovery of the five kinds ARs homologues determination by parallel tests (n=3)

圖2 47份麥粉樣品中烷基間苯二酚同系物組成在含量水平上的豐度熱圖Fig. 2 The abundance heat map of the composition of five kinds ARs homologues in wheat flour at the level of content

2.4 主成分分析

圖3 47份麥粉樣品中烷基間苯二酚同系物組成的主成分分析圖Fig. 3 The principal component analysis of ARs homologues composition in 47 kinds wheat flour samples

對(duì)47份麥粉樣品中ARs同系物組成進(jìn)行主成分分析，對(duì)比麥粉樣品中ARs同系物組成之間的差異。通過降維處理后，ARs同系物組成之間的差異在主向量空間中的點(diǎn)位置直接反應(yīng)出來。如圖3所示，ARs同系物含量組成提取的第1、2主成分累積貢獻(xiàn)率分別為98.40%、0.73%，第1主成分是樣品間差異的主要來源，幾乎提取了原始數(shù)據(jù)的全部信息，極具代表性。小麥麩皮與其他麥粉樣品的相對(duì)分散最遠(yuǎn)，表明其 ARs同系物組成差異相對(duì)最大，分析原因可能是小麥麩皮中ARs主要分布在小麥麩皮中，其ARs組成豐富度最高。美國全麥粉和加拿大全麥粉幾乎重疊，說明其 ARs同系物組成具有較好的相似性。中國全麥粉和部分小麥粉與美國、加拿大全麥粉部分交叉，說明其在 ARs同系物組成上具有部分相似性，但國外全麥粉品質(zhì)優(yōu)于國內(nèi)全麥粉。另一方面，中國小麥粉ARs同系物組成的分散度較大。通過主成分分析，由第1主成分ARs同系物組成差異可有效區(qū)分全麥粉和小麥粉。

3 討論

目前，國外ARs最常用的檢測分析技術(shù)是氣相色譜法（GC）和氣相質(zhì)譜法（GC-MS）。ROSS等[27]通過GC-MS測定了小麥、黑麥、大麥等8種常用谷物中ARs的含量，研究發(fā)現(xiàn)大米、燕麥、玉米、高粱或小米中不存在 ARs。WIERZBICKA 等[28]建立了一種高通量氣相色譜-質(zhì)譜法對(duì)血漿、脂肪組織及尿液代謝物中ARs的含量進(jìn)行定量測定，研究表明該方法對(duì)不同基質(zhì)中化合物的分析，具有良好的選擇性、靈敏度高、線性關(guān)系好。該方法可適用于大規(guī)模樣本的分析，如流行病學(xué)研究。但是，GC-MS對(duì)樣品前處理要求較高，樣品處理時(shí)需要使用衍生劑對(duì)ARs進(jìn)行衍生，容易引入雜質(zhì)和干擾物，導(dǎo)致試驗(yàn)重現(xiàn)性差，不利于樣品中ARs的檢測分析[19]。選擇一種快速、準(zhǔn)確的液相方法對(duì)樣品中待測物的檢測分析極為重要，將直接影響后續(xù)試驗(yàn)的開展和進(jìn)度。

本研究建立的ARs的液相檢測方法是基于前期大量閱讀國內(nèi)外ARs的分析檢測技術(shù)研究現(xiàn)狀提出的，研究重點(diǎn)是全麥粉和小麥粉中烷基間苯二酚的同系物組成情況。由于全谷物涵蓋甚廣，因此，未對(duì)燕麥、黑麥、大麥等全谷物產(chǎn)品中的烷基間苯二酚予以研究。由ARs同系物結(jié)構(gòu)式可知其第5位R基上含有較長的烷基鏈，可推斷ARs同系物極性較弱，且根據(jù)“相似相溶”原理，隨著烷基鏈的增長其極性減弱，水溶性越差。而在早期已有的ARs液相方法中，常采用甲醇-水體系對(duì)麥類樣品中的 ARs進(jìn)行梯度洗脫而實(shí)現(xiàn)檢測分析[29-31]。本研究對(duì)樣品前處理方法、流動(dòng)相組成、流速、柱溫、檢測波長、進(jìn)樣體積等參數(shù)，及流動(dòng)相洗脫梯度進(jìn)行優(yōu)化，最終確定了高效液相檢測ARs的色譜方法。

ANDERSSON等[32]對(duì)131個(gè)冬小麥中的ARs進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn) ARs含量范圍為220—652 μg·g-1。本研究結(jié)果表明美國、加拿大全麥粉優(yōu)于中國全麥粉，中國市場上的麥粉類產(chǎn)品質(zhì)量差異較大。同時(shí)，全麥粉糧食行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) LS/T3244—2015中規(guī)定了全麥粉中ARs的含量應(yīng)不得低于200 μg·g-1[18]，本研究檢測的國內(nèi)全麥粉中ARs含量均值為105.51 μg·g-1，未達(dá)到糧食行業(yè)關(guān)于全麥粉中ARs含量的規(guī)定。BORDIGA等[20]對(duì)小麥中ARs同系物組成進(jìn)行研究，結(jié)果表明小麥中的 ARs主要同系物種類為 C21:0，其次是C19:0（31%）和C23:0（11%），C17:0和C25:0分別僅占總含量的4%和5%。CHEN等[21]研究32個(gè)瑞典春、冬小麥樣品，研究表明瑞典小麥樣品中 ARs含量范圍為 227—639 μg·g-1，其 ARs同系物含量：C21:0＞C19:0＞C23:0＞C25:0＞C17:0，本研究結(jié)果與其一致。另外，經(jīng)主成分分析，中國全麥粉樣品與美國、加拿大全麥粉樣品在ARs同系物組成豐富度上具有相似性，而中國小麥粉在ARs同系物組成上的分散度較大，說明小麥粉品質(zhì)差異較大，這可能是由加工工藝的差異引起。

目前，世界各國對(duì)全麥粉還沒有統(tǒng)一的定義，對(duì)全麥粉的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定也不盡相同。西方國家對(duì)全谷物的認(rèn)識(shí)始于20世紀(jì)80年代，丹麥在2008年提出的全谷物概念與美國AACC基本一致。歐盟健康谷物協(xié)會(huì)在2010年也提出了類似的全麥粉定義[33]。而我國全麥粉的研究還處于起步階段，對(duì)全谷物尚不重視，只在2015年我國糧食行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)LS/T 3244—2015對(duì)全麥粉作了如下定義：整粒小麥經(jīng)過制粉工藝而制成的，而且小麥麩皮、胚芽和胚乳，與天然完整的穎果的相對(duì)比例基本一致的小麥全粉[34]。

在全麥粉品質(zhì)鑒別方面，國內(nèi)外有關(guān)全麥粉的鑒別檢測方法較少，對(duì)于某一種產(chǎn)品是否是真正的全麥粉，各國有自己的規(guī)定，還沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法。我國尚未出臺(tái)全麥粉國家標(biāo)準(zhǔn)和全麥粉鑒別檢測方法。僅在 2015年的糧食行業(yè)全麥粉標(biāo)準(zhǔn)LS/T 3244—2015中規(guī)定了全麥粉中烷基間苯二酚的含量應(yīng)不能低于 200 μg·g-1，總膳食纖維不低于9%，灰分不高于2.2%。各個(gè)面粉生產(chǎn)企業(yè)根據(jù)自己的理解制定了有關(guān)全麥粉的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，但是質(zhì)量檢測部門抽檢時(shí)，還是依據(jù)小麥粉的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，顯然這是不合理的。近年來，糧油企業(yè)生產(chǎn)的加快，人們對(duì)健康的追求和全谷物的關(guān)注度也越來越高，全谷物及全谷物食品發(fā)展迅速，尤其是全麥粉做成的全麥面包等全麥?zhǔn)称废M(fèi)量顯著提高[35]。2007年全世界市場上出現(xiàn)的全谷物新產(chǎn)品比 2000年增加了15倍，增長率為1344%[36]。而隨著人們的生活水平質(zhì)量不斷提高，推動(dòng)著居民膳食結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)型升級(jí)，消費(fèi)者變得更加注重農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)和口感，越來越關(guān)注營養(yǎng)健康膳食，發(fā)展農(nóng)產(chǎn)品營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)體系已是勢(shì)在必行[37-38]。但是，國內(nèi)對(duì)全麥粉的研究和開發(fā)尚處于初級(jí)階段，尚未確立全麥粉制粉工藝、分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。目前，盡管國內(nèi)市場上的全麥粉產(chǎn)品數(shù)量不斷增多，但產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，市場還處于無序發(fā)展的狀態(tài)[39-40]。ARs作為小麥全籽粒在麥谷類食品中存在的生物標(biāo)志物，主要存在于小麥麩皮中，幾乎不存在于胚乳和胚芽中，因而在傳統(tǒng)麥谷類產(chǎn)品和精制麥谷面粉中極度缺乏 ARs。小麥麩皮口感粗糙，極大影響了全麥粉產(chǎn)品的適口性，進(jìn)而出現(xiàn)了生產(chǎn)企業(yè)向小麥粉中添加少量麩皮冒充全麥粉來滿足消費(fèi)者對(duì)于營養(yǎng)和口感需求的現(xiàn)象。目前，麩皮回添法是國內(nèi)最主要的全麥粉生產(chǎn)加工方法。一般來說，小麥麩皮粗細(xì)度達(dá)到 116目以上，所得全麥粉的適口性就能達(dá)到滿足[41]。小麥細(xì)麩皮粉經(jīng)膨化超微粉碎處理后，口感得到很大程度的改善，貨架期明顯延長[42]。因此，選擇富含 ARs的小麥麩皮為原料，嚴(yán)格控制每道加工工藝，回添滿足全麥粉產(chǎn)品要求比例的小麥細(xì)麩粉，能夠有效地提高全麥粉適口性和營養(yǎng)品質(zhì)。而通過檢測全麥粉、小麥粉等麥谷類產(chǎn)品中ARs含量及其同系物組成，可對(duì)全麥粉和小麥粉產(chǎn)品進(jìn)行有效區(qū)分，進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)全麥粉的真?zhèn)闻袆e和品質(zhì)控制。

4 結(jié)論

本研究建立的麥粉產(chǎn)品中ARs的高效液相檢測方法靈敏性高、穩(wěn)定性好，適用于ARs同系物組成的檢測。比較47份麥粉樣品ARs同系物組成，結(jié)果表明中國全麥粉中ARs總含量與美國、加拿大全麥粉差異較大，國內(nèi)全麥粉ARs含量未達(dá)到國家糧食行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，國內(nèi)全麥粉質(zhì)量還有待提高。全麥粉產(chǎn)品的ARs同系物組成豐富度優(yōu)于小麥粉，ARs組成可作為全麥粉判別評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)來有效區(qū)分全麥粉和小麥粉產(chǎn)品。因此，本研究可為全麥粉分析檢測、真?zhèn)闻袆e和品質(zhì)控制提供方法支持。