• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    陰地蕨全轉(zhuǎn)錄組分析及植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因篩選

    2020-05-26 19:48:07張林甦韓忠耀王傳明鄧先擴(kuò)
    廣西植物 2020年4期
    關(guān)鍵詞:植物激素轉(zhuǎn)錄組信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

    張林甦 韓忠耀 王傳明 鄧先擴(kuò)

    摘 要: 該研究以新鮮陰地蕨全株為材料,用Illumina HiSeq 2500平臺(tái)進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,干凈序列經(jīng)組裝后得單一基因(Unigene),將Unigene在非冗余蛋白/核酸數(shù)據(jù)庫(nonredundant protein database, NR)、核酸序列數(shù)據(jù)庫(nucleotide sequence database,NT)、基因本體論數(shù)據(jù)庫(gene ontology,GO)、蛋白質(zhì)真核同源數(shù)據(jù)庫(clusters of eukaryotic orthologous groups,COG)、京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)、蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫SwissProt和Interpro進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明:共獲得干凈序列 6.67 Gb ,組裝后得到 58 646 個(gè)Unigene,平均長(zhǎng)度為1 023 bp,Unigene在上述數(shù)據(jù)庫的總體注釋率為69.25%。其中,在GO數(shù)據(jù)庫中,20 762個(gè)基因被注釋到生物功能、細(xì)胞組分和分子功能3個(gè)本體的52個(gè)功能組,COG注釋了20 633個(gè)基因并將其劃分為25個(gè)功能簇;在KEGG數(shù)據(jù)庫中,比對(duì)注釋了29 377個(gè)基因,可劃分為5個(gè)大類、19個(gè)亞類代謝途徑,據(jù)此篩選出八類植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的41個(gè)基因家族。通過比對(duì)共得到43 102個(gè)編碼序列(coding sequence,CDS),平均長(zhǎng)度為749 bp, N50為1 137;篩選到60個(gè)轉(zhuǎn)錄因子(transcript factor,TF)家族共1 502個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因;共發(fā)現(xiàn)17 195 個(gè)單核苷酸多態(tài)性(single-nucleotide polymorphism,SNP)位點(diǎn),其中堿基轉(zhuǎn)換11 122個(gè),顛換6 073個(gè);發(fā)現(xiàn)了8 245個(gè)簡(jiǎn)單序列重復(fù)(simple sequence repeat,SSR),數(shù)量最多的為二核苷酸重復(fù)和三核苷酸重復(fù)。這些結(jié)果從功能和結(jié)構(gòu)方面提供了陰地蕨全轉(zhuǎn)錄組信息和涉及植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的潛在基因,為進(jìn)一步深入研究陰地蕨的生長(zhǎng)發(fā)育、遺傳、品種鑒別等提供了分子生物學(xué)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    關(guān)鍵詞: 陰地蕨, 轉(zhuǎn)錄組, 植物激素, 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo), 基因篩選

    中圖分類號(hào): Q943 ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A

    文章編號(hào): 1000-3142(2020)04-0536-10

    Abstract: Botrychium ternatum is a commonly used folk medicinal plant, its growth and development have some typical representative characteristics of some fern plants. But researches on it mainly focus on chemical constituents, clinical and pharmacological effects, classification and distribution investigation, few about its molecular biology.Plant hormone is a sort of small signal molecular and has very important function to plant growth and development, and plant hormone signal transduction plays a key role in hormonal equilibrium. To obtain related information, Illumina HiSeq 2500 platform was used to perform transcriptome sequencing and bioinformatics analysis were carried out afterwards. Results showed 6.67 Gb clean reads was obtained and 58 646 Unigenes were assembled with an average length of 1 023 bp. Unigenes were annotated in nonredundant protein database (NR), nucleotide sequence database (NT), gene ontology (GO), clusters of eukaryotic orthologous groups (COG), Kyoto encyclopedia of genes and genomes (KEGG),Swissprot and Interpro databases with an overall annotation rate of 69.25%.Through GO annotation, 20 762 genes were annotated to three terms and 52 functional groups. A total of 20 633 genes were divided into 25 functional cluster by COG annotation. Through KEGG analysis, 29 377 genes were mapped to five groups and nineteen sub-groups pathways. In addition, 41 gene families related to eight plant hormone signal transduction pathways were screened. Through BLAST and ESTScan, 43 102 coding sequences (CDS) were found, with average length 749 bp, N50 1 137. 60 transcript factor gene families with total 1 520 genes were screened out, including C3H, MYB,MYB-related, bHLH,AP2-EREBP,WRKY and GRAS. 17 195 single-nucleotide polymorphisms (SNP) were found, including 11 122 transitions and 6 073 transversion. And 8 245 simple sequence repeats were found, among them di-nucleotide repeats and tri-nucleotide repeats rank the top two abundance. These data sets provide functional and structural information of global transcriptome and putative genes involving plant hormone signal transduction, and basic data for further research on the growth, development and variety identification of B. ternatum.

    Key words: Botrychium ternatum, transcriptome, plant hormone, signal transduction, gene screening

    植物激素是一類信號(hào)小分子,對(duì)于植物的生長(zhǎng)發(fā)育起著重要作用,其通過植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)發(fā)揮作用,即內(nèi)因或外因可促使一系列植物激素基因誘導(dǎo)和表達(dá),作用于相應(yīng)的激素受體或組件,最終顯現(xiàn)出不同的性狀(蘇謙等,2008)。常見的植物激素有生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、赤霉素、脫落酸、乙烯、油菜內(nèi)酯素、茉莉酸和水楊酸等,在這些激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中有的受體或關(guān)鍵組分因互作(interact)或串話(crosstalk)會(huì)產(chǎn)生協(xié)同或拮抗的作用而使信號(hào)途徑網(wǎng)絡(luò)化(Ohri et al., 2015)。比如光信號(hào)可以通過與生長(zhǎng)素信號(hào)途徑發(fā)生串話從而調(diào)控根的發(fā)育(Kumari & Panigrahi, 2019),光敏色素作用因子(PIFs)可以響應(yīng)赤霉素、油菜內(nèi)酯素、茉莉酸、生長(zhǎng)素吲哚乙酸(IAA)、脫落酸、乙烯等信號(hào)途徑,通過這個(gè)“樞紐”分子將激素信號(hào)途徑聯(lián)成了復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)(任小蕓等,2016)。植物激素還可通過表觀遺傳調(diào)控促進(jìn)開花,如赤霉素、茉莉酸、脫落酸和生長(zhǎng)素對(duì)DNA甲基化、組蛋白翻譯后修飾介導(dǎo)的染色質(zhì)壓縮起重要作用從而影響開花(Campos-Rivero et al., 2017)。另外,在植物應(yīng)對(duì)土壤病原菌侵害時(shí)也進(jìn)化出復(fù)雜的激素信號(hào)網(wǎng)絡(luò)來保護(hù)自身(Berens et al., 2017)??梢娭参锏募に匦盘?hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育、防御、環(huán)境適應(yīng)等具有重要意義。

    陰地蕨(Botrychium ternatum),又名一朵云、小春花、蛇不見、郎萁細(xì)辛、獨(dú)腳蒿、冬草等,屬于陰地蕨科陰地蕨屬,一年生草本藥用植物,多以孢子進(jìn)行繁殖,其生長(zhǎng)發(fā)育具有一定的代表性。在我國(guó)民間,尤其是貴州、福建等地常用的一種中草藥,因其具有清熱解毒、止咳、止血等功效,主要用于小兒高熱驚搐、肺熱咳嗽、咳血、百日咳、毒蛇咬傷、目赤火眼、目生翳障等(齊建紅,2012;趙俊華等,2008;阮君山,2002)。目前,對(duì)陰地蕨的研究較少,主要集中在化學(xué)成分、臨床及藥理作用、分類及分布調(diào)查等方面,分子生物學(xué)相關(guān)的信息較少,限制了更深入的研究。轉(zhuǎn)錄組(transcriptome)是指某一生理?xiàng)l件下,細(xì)胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的集合,包括信使RNA(mRNA)、核糖體RNA(rRNA)、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(tRNA)及非編碼RNA(none coding RNA)。隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展和普及,轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq)已經(jīng)成為從分子水平研究生物基因及其調(diào)控的重要方法。本研究通過高通量測(cè)序獲得陰地蕨全轉(zhuǎn)錄組,通過生物信息學(xué)方法對(duì)其進(jìn)行分析,得到陰地蕨轉(zhuǎn)錄組的整體注釋信息、篩選出植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的潛在基因及其單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNP)和短序列重復(fù)多態(tài)性(short sequence repeat polymorphism, SSR)等信息,為進(jìn)一步從分子水平開展陰地蕨生長(zhǎng)發(fā)育、品種鑒定等研究提供了有用的資源。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    新鮮、成熟陰地蕨植物全株3株(包含根、莖、葉及孢子,于2016年7月采于貴州省黔南州都勻市郊斗篷山地區(qū)(107°20′—107°27′ E、26°12′—26°16′ N,海拔約1 500 m),經(jīng)黔南醫(yī)學(xué)高等??茖W(xué)校王傳明副教授鑒定為陰地蕨(Botrychium ternatum)。樣品采集后,立即用清水沖洗干凈,吸水紙吸干后放入干冰盒中帶回,以備提取RNA。

    1.2 cDNA文庫制備及測(cè)序

    將植物全株用液氮研磨成粉末,用RNA提取試劑盒(艾德萊公司,北京)提取總RNA并將DNA消化,用帶有寡聚脫氧胸腺嘧啶(Oligo dT)的磁珠富集 mRNA,經(jīng)瓊脂糖電泳及微量核酸檢測(cè)儀NanoDrop檢測(cè)合格后用試劑盒依次合成cDNA、純化、修復(fù)粘性末端、在3′末端加上堿基“A”并連接接頭,然后進(jìn)行片段大小選擇,最后進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增構(gòu)建cDNA文庫;構(gòu)建好的文庫經(jīng)檢驗(yàn)合格后上Illumina HiSeq 2500平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序。

    1.3 De novo(從頭) 組裝

    將測(cè)序得到的原始序列(raw reads)去除低質(zhì)量、接頭污染以及未知堿基N含量過高的序列得到干凈序列(clean reads),使用Trinity軟件(v2.0.6)(Grabherr et al.,2011 )對(duì)clean reads進(jìn)行De novo組裝, 使用Tgicl軟件(v2.0.6)(Pertea et al., 2003)將組裝的轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行聚類去冗余,得到單一基因(Unigene)用于后續(xù)分析。

    1.4 Unigene功能注釋及分析

    為了解Unigene的功能,用生信分析軟件將Unigene在七大功能數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行注釋:用 Blast(v2.2.23) 進(jìn)行 NT、NR、COG、KEGG注釋;用SwissProt注釋;用 Blast2GO (v2.5.0)(Conesa et al., 2005) 以及NR注釋結(jié)果進(jìn)行GO注釋;用 InterProScan5 (v5.11-51.0)(Quevillon et al., 2005)進(jìn)行InterPro注釋。根據(jù)KEGG 信號(hào)途徑 map04075,將經(jīng)注釋的相關(guān)基因進(jìn)行歸類,即得植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因。

    1.5 轉(zhuǎn)錄組結(jié)構(gòu)分析

    1.5.1 編碼序列(coding sequences,CDS)預(yù)測(cè) 根據(jù)功能注釋結(jié)果,按照NR、SwissProt、KEGG、COG的數(shù)據(jù)庫優(yōu)先順序,挑選Unigene的最佳比對(duì)片段作為該Unigene的 CDS 。未能注釋上的Unigene使用預(yù)測(cè)得到的 CDS 作為模型進(jìn)行建模,然后使用ESTScan (v3.0.2) (Iseli et al., 1999)進(jìn)行CDS預(yù)測(cè)。

    1.5.2 轉(zhuǎn)錄因子(transcript factor,TF)編碼能力預(yù)測(cè) 首先,用getorf(EMBOSS:6.5.7.0) (Rice et al., 2000) 檢測(cè)Unigene的開放閱讀框(open reading frame,ORF);然后,使用hmmsearch(v3.0) (Mistry et al., 2013) 將ORF比對(duì)到轉(zhuǎn)錄因子蛋白結(jié)構(gòu)域(數(shù)據(jù)來源于PlantTFDB);最后,根據(jù)PlantTFDB描述的轉(zhuǎn)錄因子家族特征對(duì)Unigene進(jìn)行TF編碼能力鑒定(Jin et al., 2017)。

    1.5.3 SSR和SNP檢測(cè) 首先,用MISA (v1.0)(Thiel et al., 2003) 對(duì)Unigene進(jìn)行SSR檢測(cè);然后,用HISAT( v0.1.6-beta)(Kim et al., 2015) 把clean reads比對(duì)到Unigene;最后,使用GATK (v3.4-0)(McKenna et al., 2010) 檢測(cè) SNP。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 測(cè)序及組裝結(jié)果

    使用Illumina Hiseq平臺(tái)一共測(cè)得總原始序列(raw reads)數(shù)據(jù)量為55.52 Mb,過濾后得到干凈序列(clean reads)44.45 Mb, clean reads比率達(dá)到80.6%,測(cè)序深度屬“深度”(high deep,>15 Mb)測(cè)序。得到干凈總堿基數(shù) 6.67 Gb ,組裝后得到 58 646 個(gè)Unigene,平均長(zhǎng)度1 023 bp,N50、N70均大于1 000 bp (表1) 。所有Unigene的長(zhǎng)度均大于300 bp, 分布在300~400 bp的最多, 占25.5%,大于1 000 bp 的累計(jì)占39%(圖1),說明測(cè)序連續(xù)性和組裝效果較好。

    2.2 Unigene功能注釋

    將Unigene進(jìn)行七大功能數(shù)據(jù)庫注釋(NR、NT、GO、COG、KEGG、Swissprot 和 Interpro),注釋結(jié)果見表2。在NR(NCBI蛋白數(shù)據(jù)庫,NCBI protein database)中得到最多注釋(65.4%),總體注釋率為69.25%。根據(jù)NR注釋結(jié)果統(tǒng)計(jì)了注釋物種分布(圖2),在蕨類植物小立碗蘚(Physcomitrella patens)和江南卷柏(Selaginella moellendorffii)中共注釋了24%,跟陰地蕨蕨類植物屬性相符,另外在常用的參比物種北美云杉(Picea sitchensis)中注釋也較高(14.21%),可能跟北美云杉本身的注釋較好有關(guān)(Ralph et al., 2008)。NR、COG、KEGG、Swissprot以及Interpro的注釋結(jié)果展示在圖3,在五個(gè)數(shù)據(jù)庫中都注釋上的有12 522個(gè),占全部Unigene 的21.4%。

    2.3 GO注釋結(jié)果

    通過GO注釋將20 762個(gè)陰地蕨基因或基因產(chǎn)物賦予三大類術(shù)語(term): 分子功能、細(xì)胞組分和生物學(xué)過程,GO功能分布如圖3。在生物學(xué)過程中涉及基因數(shù)量處于前三位的分別是代謝過程(metabolic process)、細(xì)胞過程(cellular process)和單組織過程(single-organism process)。細(xì)胞組分中最多的是細(xì)胞(cell),最少的是核苷(nucleotide)。分子功能中數(shù)量最多的是催化活性(catalytic activity)和結(jié)合(binding),其次是轉(zhuǎn)運(yùn)活性(transport activity)。

    2.4 COG功能注釋

    通過與COG數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì),將20 633個(gè)陰地蕨Unigene進(jìn)行COG注釋,結(jié)果如圖5。聚在一般功能(general function prediction only)的最多(4 559個(gè)),包含1 000~2 000個(gè)基因的簇有8個(gè),包括翻譯、核糖體結(jié)構(gòu)及生物發(fā)生及轉(zhuǎn)錄等重要的生命活動(dòng),值得注意的是鑒定了995個(gè)未知功能(function unknown)基因。

    2.5 KEGG通路分析及植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因篩選

    共有29 377條基因比對(duì)到六大類、21亞類代謝通路上(圖6),其中數(shù)量最多的是新陳代謝(metabolism)通路,有17 698個(gè)基因,占60%;最少的是與人類疾病相關(guān)的基因,共141個(gè)(陰地蕨屬植物);與有機(jī)系統(tǒng)(organismal system)環(huán)境適應(yīng)(environmental adaption)有關(guān)的基因有1 266個(gè)。根據(jù)KEGG 信號(hào)途徑 map04075,將經(jīng)注釋的相關(guān)基因進(jìn)行歸類,得植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的候選基因(表3)。

    2.6 轉(zhuǎn)錄組結(jié)構(gòu)

    CDS:通過BLAST得到38 212個(gè)CDS,用ESTScan方法得到4 890個(gè)CDS, 共得到43 102個(gè)CDS,平均長(zhǎng)度749 bp, N50為1 137。

    TF:共篩選到60個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因家族共1 502個(gè)TF基因,數(shù)量超過100的有C3H MYB 和MYB-related以及bHLH轉(zhuǎn)錄因子家族,其他較多的還有AP2-EREBP、WRKY、GRAS等轉(zhuǎn)錄因子。

    SNP:共發(fā)現(xiàn)17 195 個(gè)SNP位點(diǎn),其中堿基轉(zhuǎn)換11 122個(gè),包括A-G 5 452個(gè)、C-T 5 670個(gè);顛換6 073個(gè),包括A-C 1 444個(gè)、A-T 1 729個(gè)、C-G 1 418個(gè)、G-T 1 482個(gè)。

    SSR:最多的是二核苷酸重復(fù),有3 666個(gè);其次是三核苷酸重復(fù),3 439個(gè);接下來依次是單核苷酸重復(fù)(563個(gè))、六核苷酸重復(fù)(260個(gè))、四核苷酸重復(fù)(169個(gè))和五核苷酸重復(fù)(148個(gè))。

    3 討論

    GRABHERR MG, HAAS BJ, YASSOUR M, et al., 2011. Trinity: Reconstructing a full-length transcriptome without a genome from RNA-Seq Data [J]. Nat Biotechnol, 29(7): 644-652.

    ISELI C, JONGENEEL CV, BUCHER P, 1999. ESTScan: A program for detecting, evaluating, and reconstructing potential coding regions in EST sequences [J]. Proc Int Conf Intell Syst Mol Biol, 99: 138-148.

    JIN JP, TIAN F, YANG DC, et al., 2017. PlantTFDB 4.0: Toward a central hub for transcription factors and regulatory interactions in plants [J]. Nucl Acids Res, 45(D1): D1040-D1045.

    KIM D, LANGMEAD B, SALZBERG SL, 2015. HISAT: A fast spliced aligner with low memory requirements [J]. Nat Methods,12(4): 357-360.

    KUMARI S, PANIGRAHI KCS, 2019. Light and auxin signaling cross-talk programme root development in plants [J]. J Biosci, 44(1): 26.

    MCKENNA A, HANNA M, BANKS E, et al., 2010. The genome analysis toolkit: A map reduce framework for analyzing next generation DNA sequencing data [J]. Genome Res, 20(9): 1297-1303.

    MEENA KK, SORTY AM, BITLA UM, et al., 2017. Abiotic stress responses and microbe-mediated mitigation in plants: The omics strategies [J]. Front Plant Sci, 8: 172.

    MISTRY J,F(xiàn)INN RD, EDDY SR, et al., 2013. Challenges in homology search: HMMER3 and convergent evolution of coiled-coil regions [J]. Nucl Acid Res, 41(12): e121.

    MYBURG AA,HUSSEY SG,WANG JP, 2019. Systems and synthetic biology of forest trees: A bioengineering paradigm for woody biomass feedstocks [J]. Front Plant Sci, 10: 775.

    OHRI P, BHARDWAJ R, BALI S, et al., 2015. The common molecular players in plant hormone crosstalk and signaling [J]. Curr Protein Pept Sci, 16(5): 369-388.

    PERTEA G, HUANG X, LIANG F, et al., 2003. TIGR gene indices clustering tools (TGICL): A soft ware system for fast clustering of large EST datasets [J]. Bioinformatics, 19(5): 651-652.

    QI JH, 2012. A summary of recent studies on Botrychium Sw [J]. J Xian Univ Arts Sci (Nat Sci Ed), 15(2):48-50. [齊建紅, 2012. 陰地蕨屬植物研究進(jìn)展 [J]. 西安文理學(xué)院學(xué)報(bào)自然科學(xué)版, 15(2):48-50.]

    QUEVILLON E, SILVENTOINEN V, PILLAI S, et al., 2005. InterProScan: Protein domains identifier [J]. Nucl Acids Res, 33: 116-120.

    RALPH SG, CHUN HJ, KOLOSOVA N, et al., 2008. A conifer genomics resource of 200 000 spruce (Picea spp.) ESTs and 6 464 high-quality, sequence-finished full-length cDNAs for Sitka spruce (Picea sitchensis) [J]. BMC Genomics,9:484.

    REN XY,WU MQ,CHEN JM, et al., 2016. The molecular mechanisms of phytochrome interacting factors (PIFs) in phytohormone signaling transduction [J]. J Plant Physiol, 52 (10): 1466-1473. [任小蕓, 吳美琴, 陳建民, 等, 2016. 光敏色素作用因子PIFs參與植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子機(jī)制 [J]. 植物生理學(xué)報(bào), 52 (10): 1466-1473.]

    RICE P, LONGDEN I, BLEASBY A, 2000. EMBOSS: The European molecular biology open software suite [J]. Trends Genet,16(6): 276-277.

    RUAN JS, 2002. Research progress of Sceptridium ternatum and its effective ingredients [J]. J Chin Pharm Univ, 33: 328-329. [阮君山, 2002.小春花及其有效成分研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 33: 328-329.]

    SU Q, AN D, WANG K, 2008. Phytohormone receptors and induced genes in plants [J]. Plant Physiol Mol Biol, 44(6): 1202-1208. [蘇謙, 安冬, 王庫, 2008. 植物激素的受體和誘導(dǎo)基因 [J]. 物生理學(xué)通訊, 44(6): 1202-1208.]

    THIEL T, MICHALEK W, VARSHNEY RK, et al., 2003. Exploiting EST databases for the development and characterization of gene-derived SSR-markers in barley (Hordeum vulgare L.) [J]. Theor Appl Genet, 106(3): 411-422.

    YANG M, YOU W, WU S, et al., 2017. Global transcriptome analysis of Huperzia serrata and identification of critical genes involved in the biosynthesis of huperzine A [J]. BMC Genomics, 18: 245.

    ZHANG KM, SHEN Y, LIU Y, et al., 2016. Research progress on development and physio-ecology of fern gametophytes [J]. Guihaia, 36(4): 419-424. [張開梅, 沈羽, 劉穎, 等, 2016. 蕨類植物配子體發(fā)育與生理生態(tài)研究進(jìn)展 [J]. 廣西植物, 36(4): 419-424.]

    ZHAO JH, ZHAO NW,WANG PS, et al., 2008. Study on the species and distribution of Adiantum and Botrychiam medicinal plants from Tujia medicine of Guizhou Province origin [J]. J Med Pharm Chin Minor, 5: 44-46. [趙俊華, 趙能武, 王培善, 等, 2008. 土家藥黔產(chǎn)鐵線蕨、陰地蕨科藥用植物的種類和分布研究 [J]. 中國(guó)民族醫(yī)藥雜志, 5:44-46.]

    (責(zé)任編輯 何永艷)

    猜你喜歡
    植物激素轉(zhuǎn)錄組信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
    Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在瘢痕疙瘩形成中的作用機(jī)制研究
    基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的山茱萸次生代謝生物合成相關(guān)基因的挖掘
    金釵石斛轉(zhuǎn)錄組SSR位點(diǎn)信息分析
    人參屬藥用植物轉(zhuǎn)錄組研究進(jìn)展
    新型亞麻纖維植物生長(zhǎng)劑
    八角蓮不定芽的快速培育
    綠色科技(2015年6期)2015-08-05 18:08:49
    不同植物激素對(duì)防止拱棚甜瓜化瓜的影響
    大豆轉(zhuǎn)錄組測(cè)序研究進(jìn)展綜述
    HGF/c—Met信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移中的作用
    水稻花時(shí)調(diào)控研究進(jìn)展
    美女国产高潮福利片在线看| 国产毛片在线视频| 男女下面插进去视频免费观看| 丁香六月天网| 亚洲,一卡二卡三卡| 一区二区av电影网| 国产免费现黄频在线看| 久久久久网色| 久久久久久久久免费视频了| av福利片在线| av.在线天堂| 午夜激情久久久久久久| 午夜福利一区二区在线看| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲成国产人片在线观看| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲在久久综合| 亚洲成人免费av在线播放| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲色图综合在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 婷婷色综合大香蕉| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 热99久久久久精品小说推荐| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲精品第二区| 中国国产av一级| 成人国产av品久久久| 国产日韩欧美亚洲二区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 观看美女的网站| 香蕉国产在线看| 99国产综合亚洲精品| 男女床上黄色一级片免费看| 黄色 视频免费看| 在线 av 中文字幕| 亚洲 欧美一区二区三区| 91国产中文字幕| 大陆偷拍与自拍| 成年人免费黄色播放视频| 在线观看一区二区三区激情| 国产一级毛片在线| www日本在线高清视频| 91老司机精品| xxx大片免费视频| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产成人精品在线电影| 国产又色又爽无遮挡免| 韩国精品一区二区三区| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 美女主播在线视频| 满18在线观看网站| 国产黄频视频在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| av.在线天堂| 黑丝袜美女国产一区| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 欧美精品亚洲一区二区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 一区二区三区四区激情视频| 搡老乐熟女国产| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲成国产人片在线观看| 国产一区二区在线观看av| e午夜精品久久久久久久| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 精品国产乱码久久久久久小说| 成人免费观看视频高清| 人妻 亚洲 视频| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 超碰97精品在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看 | 精品亚洲成国产av| 老熟女久久久| 免费看av在线观看网站| 久热爱精品视频在线9| av女优亚洲男人天堂| 美女福利国产在线| 亚洲欧美精品自产自拍| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 一级a爱视频在线免费观看| 久久精品国产综合久久久| 在线观看国产h片| 国产男女内射视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产精品熟女久久久久浪| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 免费观看人在逋| 岛国毛片在线播放| 一个人免费看片子| 韩国高清视频一区二区三区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 欧美在线一区亚洲| av有码第一页| 老汉色av国产亚洲站长工具| 另类亚洲欧美激情| 久久狼人影院| 日日啪夜夜爽| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 欧美 日韩 精品 国产| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲一区中文字幕在线| 高清欧美精品videossex| 午夜日韩欧美国产| 亚洲国产欧美网| 国产精品 欧美亚洲| 在线观看三级黄色| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美日韩一级在线毛片| 成人手机av| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 波野结衣二区三区在线| 看免费成人av毛片| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 宅男免费午夜| 国产不卡av网站在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 在线观看一区二区三区激情| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久久久久久人妻| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲精品国产区一区二| 丝袜在线中文字幕| 免费看av在线观看网站| 三上悠亚av全集在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲综合精品二区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 啦啦啦在线免费观看视频4| 欧美精品av麻豆av| 国产精品一区二区在线不卡| av一本久久久久| 制服人妻中文乱码| 亚洲综合色网址| 一区在线观看完整版| 日本av免费视频播放| 青草久久国产| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产精品无大码| av免费观看日本| 男人操女人黄网站| 国产一区二区三区av在线| 国产 一区精品| 欧美日韩一级在线毛片| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲伊人久久精品综合| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 免费在线观看黄色视频的| bbb黄色大片| 色婷婷av一区二区三区视频| 桃花免费在线播放| 日本wwww免费看| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美精品av麻豆av| 看免费av毛片| 中文字幕高清在线视频| 亚洲欧美清纯卡通| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲五月色婷婷综合| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 欧美日韩亚洲高清精品| 免费黄频网站在线观看国产| 波多野结衣av一区二区av| 美女中出高潮动态图| 久久毛片免费看一区二区三区| 免费看不卡的av| 91精品三级在线观看| 亚洲中文av在线| 久久国产精品大桥未久av| 精品福利永久在线观看| 精品一区二区免费观看| 女人精品久久久久毛片| av又黄又爽大尺度在线免费看| 男女国产视频网站| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲美女搞黄在线观看| 美女午夜性视频免费| 国产探花极品一区二区| 午夜福利免费观看在线| 制服丝袜香蕉在线| 极品人妻少妇av视频| 多毛熟女@视频| 国产精品久久久久成人av| 韩国精品一区二区三区| 国产精品久久久人人做人人爽| 免费看不卡的av| 亚洲国产日韩一区二区| 人体艺术视频欧美日本| 视频在线观看一区二区三区| 国产国语露脸激情在线看| 日韩av免费高清视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美乱码精品一区二区三区| 韩国高清视频一区二区三区| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲久久久国产精品| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产黄频视频在线观看| 成人国产麻豆网| 激情五月婷婷亚洲| 久久99热这里只频精品6学生| 一本久久精品| 欧美成人精品欧美一级黄| 日韩精品免费视频一区二区三区| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 母亲3免费完整高清在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 一级毛片 在线播放| 女人精品久久久久毛片| 精品第一国产精品| 超碰成人久久| 亚洲专区中文字幕在线 | 欧美精品一区二区免费开放| av免费观看日本| 十分钟在线观看高清视频www| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲成人手机| 久久人人爽人人片av| 欧美成人精品欧美一级黄| 男女无遮挡免费网站观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 日韩一本色道免费dvd| 成人国产av品久久久| 日韩伦理黄色片| 亚洲国产中文字幕在线视频| 一区二区三区四区激情视频| a 毛片基地| www.自偷自拍.com| 99re6热这里在线精品视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 伊人久久国产一区二区| 亚洲,欧美精品.| 亚洲av日韩在线播放| 日韩人妻精品一区2区三区| 午夜老司机福利片| 激情五月婷婷亚洲| 午夜福利影视在线免费观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 91成人精品电影| 日本黄色日本黄色录像| 男的添女的下面高潮视频| 国产一区二区三区av在线| 国产男女内射视频| 男男h啪啪无遮挡| 国产乱来视频区| 免费黄频网站在线观看国产| 成年人免费黄色播放视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久99精品国语久久久| 十分钟在线观看高清视频www| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲美女黄色视频免费看| 国产男女内射视频| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲精品中文字幕在线视频| 99国产精品免费福利视频| 亚洲人成77777在线视频| 成人手机av| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 99久久99久久久精品蜜桃| www.自偷自拍.com| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产精品偷伦视频观看了| 午夜日韩欧美国产| 美女中出高潮动态图| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 久久久精品94久久精品| 激情五月婷婷亚洲| 五月天丁香电影| 精品人妻一区二区三区麻豆| 99re6热这里在线精品视频| 美女大奶头黄色视频| 欧美日韩视频精品一区| 午夜久久久在线观看| 国产1区2区3区精品| 97精品久久久久久久久久精品| 欧美av亚洲av综合av国产av | 久久这里只有精品19| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品久久久久成人av| 2018国产大陆天天弄谢| 在线观看免费高清a一片| 一区二区三区激情视频| 精品一区二区三卡| 久久国产精品大桥未久av| 中文欧美无线码| 男女国产视频网站| 五月天丁香电影| 男女午夜视频在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 在线天堂最新版资源| 成人国产麻豆网| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产 精品1| 狂野欧美激情性bbbbbb| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 熟女av电影| 久久久久久久久久久久大奶| 日韩大片免费观看网站| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品久久久久久久久免| 久久亚洲国产成人精品v| 高清黄色对白视频在线免费看| 日韩中文字幕视频在线看片| av国产久精品久网站免费入址| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产成人午夜福利电影在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 国产成人免费观看mmmm| 日日爽夜夜爽网站| 国产日韩欧美视频二区| 欧美在线黄色| 叶爱在线成人免费视频播放| 69精品国产乱码久久久| 久久ye,这里只有精品| 国产精品久久久久久精品电影小说| 波多野结衣av一区二区av| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产成人av激情在线播放| 97精品久久久久久久久久精品| 久久婷婷青草| 国产福利在线免费观看视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲精品国产av成人精品| 十八禁高潮呻吟视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 少妇被粗大猛烈的视频| 午夜福利视频精品| 成年av动漫网址| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久久久人妻精品一区果冻| 9热在线视频观看99| 国产一区有黄有色的免费视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产一区二区在线观看av| 毛片一级片免费看久久久久| 久久久久久久国产电影| 在线天堂中文资源库| 69精品国产乱码久久久| 黄色怎么调成土黄色| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲视频免费观看视频| 一级片免费观看大全| 国产男人的电影天堂91| av女优亚洲男人天堂| 久久久精品免费免费高清| 日韩人妻精品一区2区三区| 久久影院123| 久久久精品区二区三区| 高清视频免费观看一区二区| 国产黄频视频在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 一级黄片播放器| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久性视频一级片| 青青草视频在线视频观看| 麻豆乱淫一区二区| a级片在线免费高清观看视频| 18在线观看网站| 免费av中文字幕在线| 美女国产高潮福利片在线看| videos熟女内射| 夫妻性生交免费视频一级片| 99香蕉大伊视频| 99九九在线精品视频| 精品一区二区三卡| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产精品女同一区二区软件| 18禁动态无遮挡网站| 看十八女毛片水多多多| 十分钟在线观看高清视频www| 在现免费观看毛片| av视频免费观看在线观看| 伊人亚洲综合成人网| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久久久久人人人人人| 午夜福利在线免费观看网站| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产精品熟女久久久久浪| 另类亚洲欧美激情| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲精品自拍成人| 色视频在线一区二区三区| 亚洲精品一区蜜桃| 美女大奶头黄色视频| 国产成人av激情在线播放| 亚洲伊人色综图| 亚洲一码二码三码区别大吗| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产乱人偷精品视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 欧美另类一区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产精品久久久人人做人人爽| 成人黄色视频免费在线看| 久久精品国产综合久久久| 日韩电影二区| 成人黄色视频免费在线看| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 人妻 亚洲 视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 午夜福利影视在线免费观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 成人黄色视频免费在线看| av卡一久久| 成年动漫av网址| 日本av免费视频播放| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 日韩av不卡免费在线播放| 久久韩国三级中文字幕| 成人午夜精彩视频在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 9热在线视频观看99| 捣出白浆h1v1| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 久久久精品区二区三区| 99精国产麻豆久久婷婷| 男女国产视频网站| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲一码二码三码区别大吗| 天美传媒精品一区二区| 国产成人欧美| 在线看a的网站| 国产男女内射视频| 美女视频免费永久观看网站| 天堂中文最新版在线下载| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| av线在线观看网站| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美在线黄色| 哪个播放器可以免费观看大片| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产成人午夜福利电影在线观看| 极品人妻少妇av视频| 一级a爱视频在线免费观看| 成人免费观看视频高清| 丰满乱子伦码专区| 亚洲精品一区蜜桃| 国产黄频视频在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 在线精品无人区一区二区三| 在线观看三级黄色| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 一级,二级,三级黄色视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 久久av网站| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲精品在线美女| 亚洲欧美精品自产自拍| av卡一久久| 亚洲国产精品999| 国产男人的电影天堂91| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久久久久久久久久久大奶| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 母亲3免费完整高清在线观看| 9191精品国产免费久久| 男女床上黄色一级片免费看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲精品,欧美精品| 男人爽女人下面视频在线观看| 岛国毛片在线播放| 国产精品一区二区在线不卡| 97在线人人人人妻| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 曰老女人黄片| 色网站视频免费| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲视频免费观看视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久久久久人人人人人| 日韩大码丰满熟妇| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产av精品麻豆| 国产一区二区 视频在线| 秋霞伦理黄片| 各种免费的搞黄视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 在线观看免费日韩欧美大片| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| e午夜精品久久久久久久| 欧美日韩亚洲高清精品| 中文欧美无线码| 国产日韩欧美视频二区| 电影成人av| a级毛片黄视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产1区2区3区精品| 久久av网站| 精品一区在线观看国产| 日韩视频在线欧美| 亚洲免费av在线视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产精品无大码| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 99久国产av精品国产电影| 午夜福利在线免费观看网站| 久久久久久久久免费视频了| 成人午夜精彩视频在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| videos熟女内射| 国产麻豆69| 成年av动漫网址| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 欧美变态另类bdsm刘玥| 啦啦啦在线观看免费高清www| av在线app专区| 国产国语露脸激情在线看| 老司机靠b影院| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲综合精品二区| 色网站视频免费| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 国产成人免费无遮挡视频| 国产成人精品福利久久| 最近中文字幕高清免费大全6| 久久精品国产亚洲av涩爱| 久久热在线av| 亚洲第一青青草原| 中国国产av一级| 少妇精品久久久久久久| e午夜精品久久久久久久| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 观看av在线不卡| 婷婷成人精品国产| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 9191精品国产免费久久| av有码第一页| 91精品国产国语对白视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久影院123| 熟女av电影| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日日撸夜夜添| 91成人精品电影| 十分钟在线观看高清视频www| 丝瓜视频免费看黄片| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 成年av动漫网址| 精品国产一区二区久久| 嫩草影视91久久| 国产一区二区在线观看av| 国产精品一二三区在线看| 青草久久国产| 老司机靠b影院| 99热国产这里只有精品6| 三上悠亚av全集在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 一级a爱视频在线免费观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 2021少妇久久久久久久久久久| 精品酒店卫生间| 国产精品一区二区在线不卡| 免费在线观看完整版高清| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 在线精品无人区一区二区三| 黄片播放在线免费| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 丁香六月欧美| 国产成人精品在线电影| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲国产精品成人久久小说| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文字幕亚洲精品专区| 在线观看免费午夜福利视频| 超碰97精品在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 午夜老司机福利片| 国产亚洲精品第一综合不卡| av网站在线播放免费| 蜜桃在线观看..| 人人澡人人妻人| 国产一区二区激情短视频 | 国产成人精品在线电影| 老司机深夜福利视频在线观看 |