不同產(chǎn)地多花黃精化學(xué)成分含量比較分析

涂明鋒 葉文峰 彭靖

摘要 對8個產(chǎn)地收集的多花黃精中多糖、黃酮、多酚、浸出物、Cu、Se、Pb、Cd的含量進(jìn)行比較分析，結(jié)果顯示，江西宜春的多花黃精多糖含量最高，為14.77%;湖南張家界的多花黃精黃酮及浸出物含量最高，分別為（1.09±0.04）mg/g、74.51%;四川廣安的多花黃精多酚含量最高，為（1.45±0.02）mg/g;Cu、Se含量最高的分別為廣東清遠(yuǎn)的多花黃精（1.785 9 μg/g）、江西宜春的多花黃精（77.99 ng/g）;Pb、Cd含量最高的分別為廣東清遠(yuǎn)的多花黃精（2.469 4 μg/g）、廣西桂林的多花黃精（0.263 7 μg/g），但均低于國家的限量標(biāo)準(zhǔn)，不存在重金屬超標(biāo)問題。表明不同產(chǎn)地的多花黃精化學(xué)成分含量存在一定的差異。

關(guān)鍵詞 多花黃精;多糖;黃酮;多酚;浸出物;微量元素

Abstract The contents of polysaccharides， flavonoids， polyphenols， extractums， Cu， Se， Pb and Cd in Polygonatum cyrtonema Hua collected from 8 producing areas were compared and analyzed. The results showed that the content of polysaccharide from Polygonatum cyrtonema Hua in Yichun，Jiangxi Province was the highest， being 14.77%. The content of flavonoids and extractums from Zhangjiajie in Hunan Province was the highest， 1.09 ± 0.04 mg/g and 74.51% respectively.The polyphenol content of Polygonatum cyrtonema Hua in Guangan， Sichuan Province was the highest， which was 1.45 ± 0.02 mg/g;The highest contents of Cu and Se were Polygonatum cyrtonema Hua from Qingyuan， Guangdong （1.785 9 μg/g） and Yichun， Jiangxi （77.99 ng/g）.The highest contents of Pb and Cd were Polygonatum cyrtonema Hua in Qingyuan， Guangdong （2.469 4 μg/g） and Guilin， Guangxi （0.263 7 μg/g）， respectively， but they were lower than the national limit standards， and there was no problem of excessive heavy metals.The results showed that there were some differences in chemical constituents of Polygonatum cyrtonema Hua from different producing areas.

Key words Polygonatum cyrtonema Hua;Polysaccharide;Flavonoids;Polyphenols;Extracts;Trace elements

黃精為百合科植物的干燥根莖，是我國傳統(tǒng)中藥，且為藥食兼用，2015版《中國藥典》將其分為滇黃精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl）、黃精（Polygonatum sibiricum Red）和多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua）3種[1-2]。我國黃精資源豐富，主要分布在東北部地區(qū)、安徽、浙江以及甘肅等地;滇黃精主要分布在貴州、云南以及廣西等地;多花黃精主要分布在湖南、湖北、江西以及陜西等地[3]。

黃精主要含有多糖、黃酮類、甾體皂苷類、蒽醌類以及生物堿等化合物，同時還含有揮發(fā)油、生物堿、微量元素等成分[4]，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、降血糖等藥理活性[5-7]。研究表明，微量元素在中藥藥效成分中具有舉足輕重的作用，可作為評價中藥藥效的重要依據(jù)之一，重金屬元素超標(biāo)對人體危害極大[8]。該研究通過比較8個產(chǎn)地的多花黃精中黃精多糖、黃酮、多酚、浸出物、Cu、Se、Pb及Cd的含量，篩選出品質(zhì)優(yōu)良的多花黃精資源，為進(jìn)一步挖掘多花黃精的藥用價值及資源的合理開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試材。

從廣西、四川、江西、安徽、湖南等省市的8個產(chǎn)地收集多花黃精的新鮮根莖。所收集的樣品經(jīng)宜春學(xué)院藥學(xué)教研室老師鑒定均為多花黃精。洗凈、切片，60 ℃烘干，粉碎，過60目篩備用。

1.1.2 試劑。

無水葡萄糖、95%乙醇、蒽酮、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、硫酸，以上試劑均為分析純;銅、鎘、鉛、硒離子標(biāo)準(zhǔn)品（國家有色金屬及電子材料分析測試中心）;蘆?。ㄖ袊称匪幤窓z定研究院）;硝酸（優(yōu)級純）。

1.1.3 儀器。

752N -紫外可見分光光度計（上海佑科儀器儀表有限公司）;HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州金壇良友儀器有限公司）;DHG-9140電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海鴻都電子科技有限公司）;CS-1000粉碎機(jī)（30～300目、武義海納電器有限公司）;AL-104型電子天平（上海梅特勒-托利多儀器公司）;WXJ-Ⅲ型實驗室微波消解儀（青島凱躍環(huán)保設(shè)備有限公司）;240AA原子吸收分光光度計（安捷倫科技（中國）有限公司）;AFS-230E原子熒光光度計（成都海光儀器有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 多糖含量測定。

采用蒽酮-硫酸法，以無水葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品，參照2015版《中國藥典》中黃精多糖含量測定的方法進(jìn)行測定[1]。測得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為A=0.042 6 C+0.0149，R2=0.999 2（n=6），標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度在3.36～20.16 μg/mL 具有線性關(guān)系。

1.2.2 黃酮含量測定。

1.2.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

采用NaNO2-Al（NO3）3比色法測定黃酮含量，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，參照文獻(xiàn)[9-10]，并稍作修改，在510 nm處測得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為A=5.133 5C-0.000 9（R2=0.999 5），標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度在5.48～27.40 μg/mL具有線性關(guān)系。

1.2.2.2 黃酮提取及測定。

參照文獻(xiàn)[11]最優(yōu)方案，并稍作修改。稱取一定量的黃精粉末，加入20倍體積的80%乙醇溶液，于70 ℃下反應(yīng)2 h，提取2次。按照“1.2.2.1”中的測定方法進(jìn)行黃酮含量的測定并計算含量。

1.2.3 多酚含量測定。

1.2.3.1 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

采用福林-酚法測定，參照文獻(xiàn)[12-13]，并稍作修改。配制0.5 mg/mL的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別移取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于1～6號25 mL棕色容量瓶中，分別加入2 mL福林-酚試劑，搖勻，再加入5 mL 7%的碳酸鈉溶液并定容，于暗處放置90 min。在765 nm處測定吸光度。測得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為A=0105 5C+0.009 3（R2=0.999 9），標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度在0.516～1.548 μg/mL 具有線性關(guān)系。

1.2.3.2 多酚提取及測定。

參照文獻(xiàn)[14]，并稍作修改，稱取一定量的黃精粉末，加入25倍體積的62%乙醇溶液，于超聲功率為240 W情況下超聲51 min。按照“1.2.3.1”中測定方法進(jìn)行多酚含量的測定并計算含量。

1.2.4 浸出物含量測定。

根據(jù)2015版《中國藥典》通則2201醇溶性浸出物測定法中的熱浸法測定，用低溶度乙醇作溶劑。

1.2.5 金屬元素的測定。

1.2.5.1 儀器工作條件。

利用原子吸收分光光度計測定Cu、Pb、Cd元素含量，儀器參數(shù)見表1。原子熒光光度計測定Se元素的含量，儀器參數(shù)分別為總電流80 mA、屏蔽氣流量800 mL/min、載氣流量300 mL/min、原子化器高度8 mm、讀數(shù)時間10 s-1。

1.2.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。

參照文獻(xiàn)[15]，按梯度配制各元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再按“1.2.3.1”中的條件進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，并得到相應(yīng)的回歸方程，各線性回歸方程見表2。

1.2.5.3 樣品處理及測定。

參照文獻(xiàn)[16]，稱取一定量各樣品粉末于消解罐中，加入6 mL硝酸，混勻后置于120 ℃電熱板上預(yù)消解30 min，然后置于微波消解儀中進(jìn)行程序消解，消解完成后再用配套的趕酸裝置進(jìn)行趕酸，用超純水溶解并定容至25 mL，再按“1.2.3.1”中的條件進(jìn)行測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 多糖含量

由表3所示，不同產(chǎn)地的多花黃精多糖含量存在一定差異。江西宜春的多花黃精多糖含量最高，為14.77%，湖南湘西的多花黃精多糖含量最低，為2.66%。方法學(xué)考察結(jié)果表明，穩(wěn)定性試驗、重復(fù)性試驗和精密度試驗的RSD分別為0.44%、1.15%、1.98%;加標(biāo)回收率為98.9%，RSD為1.25%。2015版《中國藥典》將黃精多糖作為黃精含量測定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以無水葡萄糖計，不得低于7%[17]。表3中湖南湘西的多花黃精及湖北恩施的多花黃精多糖含量均低于7%，其原因與樣品采摘的季節(jié)及生長年限有關(guān)，不同季節(jié)采摘，多糖含量存在一定的差異，生長年限越長黃精多糖含量越高[18-19]。

2.2 黃酮含量

由表3所示，不同產(chǎn)地多花黃精黃酮含量存在一定差異。湖南張家界的多花黃精黃酮含量最高，為（1.09±0.04）mg/g，廣西桂林的多花黃精黃酮含量最低，為（0.35±0.02）mg/g。方法學(xué)考察結(jié)果表明，穩(wěn)定性試驗、重復(fù)性試驗和精密度試驗的RSD分別為0.76%、1.54%、1.36%;加標(biāo)回收率為95.7%，RSD為1.46%。

2.3 多酚含量

由表3所示，不同產(chǎn)地多花黃精多酚含量存在一定差異。四川廣安的多花黃精多酚含量最高，為（1.45±0.02）mg/g，江西宜春的多花黃精多酚含量最低，為（0.47±0.01）mg/g。方法學(xué)考察結(jié)果表明，穩(wěn)定性試驗、重復(fù)性試驗和精密度試驗的RSD分別為1.02%、1.76%、1.59%;加標(biāo)回收率為97.4%，RSD為1.03%。

2.4 浸出物含量

由表3所示，不同產(chǎn)地多花黃精浸出物含量存在一定差異。湖南張家界的多花黃精浸出物含量最高，為74.51%，四川廣安的多花黃精浸出物含量最低，為57.03%。

2.5 金屬元素含量

由表3所示，不同產(chǎn)地多花黃精中的同種元素含量具有一定的差異。Cu、Se含量最高的分別為廣東清遠(yuǎn)的多花黃精（1.785 9 μg/g）、江西宜春的多花黃精（77.99 ng/g）;Pb、Cd含量最高的分別為廣東清遠(yuǎn)的多花黃精（2.469 4 μg/g）、廣西桂林的多花黃精（0.263 7 μg/g），但均低于國家的限量標(biāo)準(zhǔn)，不存在重金屬超標(biāo)問題。微量元素含量存在差異與當(dāng)?shù)赝寥拉h(huán)境有關(guān)，江西宜春、湖北恩施均是以富硒享譽(yù)全國，所以江西宜春的多花黃精及湖北恩施的多花黃精中Se含量高于其他產(chǎn)地的多花黃精。

利用加標(biāo)回收試驗來評價試驗結(jié)果的準(zhǔn)確度，結(jié)果見表4。由表4可知，試驗加標(biāo)回收率為95.8%～102.6%，RSD為1.7%～2.3%，表明試驗方法準(zhǔn)確性高。

3 結(jié)論

不同產(chǎn)地的多花黃精中多糖、黃酮、多酚、浸出物以及金屬元素含量存在差異，與所處的地理環(huán)境、采收季節(jié)、生長年限等因素存在一定的關(guān)系。以多糖、Se含量為評價指標(biāo)，則江西宜春的多花黃精為最優(yōu);以黃酮、浸出物為評價指標(biāo)，則湖南張家界的多花黃精為最優(yōu);以多酚含量為評價指標(biāo)，則四川廣安的多花黃精為最優(yōu)。由此可知，評價中藥材質(zhì)量不能從單一的化學(xué)成分，需要綜合多種化學(xué)成分來考慮。

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