熱激和山梨酸鉀處理對獼猴桃果實(shí)灰霉病的抑制效應(yīng)

葛銘佳，張麗媛，艾佳音，吉 茹，劉靜珂，劉夢斐，何 玲

（西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院，楊凌 712100）

0 引 言

獼猴桃含有豐富的維生素、抗氧化活性物質(zhì)以及礦物質(zhì)元素，深受人們喜愛。但獼猴桃大多在降雨集中期采收，果實(shí)表面往往附著了大量的致病微生物，這些微生物極易從傷口處入侵果實(shí)，造成果實(shí)腐爛變質(zhì)。已有研究表明引起獼猴桃貯藏后期霉?fàn)€的主要真菌病原體之一為灰霉菌（Botrytis cinerea）[1]。低溫貯藏是最廣泛的果蔬貯藏保鮮方法，可在一定程度減輕采后病害的發(fā)生，但獼猴桃在冷藏后期仍存在較高的灰霉病發(fā)病率。采后熱激處理已被用于多種園藝產(chǎn)品的采后抑菌保鮮，可通過直接殺死或抑制病原菌生長和繁殖，或誘導(dǎo)寄主細(xì)胞苯丙烷代謝的增強(qiáng)，或誘導(dǎo)抗病相關(guān)物質(zhì)和病程蛋白的合成，從而提高果蔬自身的抗病能力[2]。例如，熱激處理能夠有效控制番茄[3]和蘋果灰霉病[4]、香蕉炭疽病[5]、芒果炭疽病和莖端腐爛病[6]。山梨酸鉀作為一種廣譜的防腐劑，通過改變病原菌的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，使膜運(yùn)輸系統(tǒng)紊亂，達(dá)到殺死病原菌的目的；或者與病原菌酶系統(tǒng)中的巰基結(jié)合，破壞其酶系統(tǒng)，抑制病原菌的活性[7]。山梨酸鉀已應(yīng)用于鮮切梨[8]、甜櫻桃[9]、枸杞[10]、芒果[11]等的抑菌保鮮，但在獼猴桃上的應(yīng)用鮮有報道。經(jīng)過前期預(yù)試驗，熱激與保鮮劑復(fù)合處理或可成為一種頗為有效的防腐方法，一方面可以降低熱水處理的有效溫度，避免處理溫度過高對果實(shí)造成傷害；另一方面，可以降低保鮮劑的使用劑量，增強(qiáng)保鮮劑的作用效力，延長有效作用時間。因此，本試驗旨在確定一種安全有效的保鮮措施，為提高獼猴桃的鮮食營養(yǎng)價值及解決采后極易霉變腐爛的問題提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗材料為“徐香”獼猴桃，于2017 年10 月19 日采自陜西眉縣管理良好的果園，采收獼猴桃果實(shí)可溶性固形物質(zhì)量分?jǐn)?shù)（Soluble Solid Content，SSC）為7%～8%，采收后立即運(yùn)回實(shí)驗室，挑選大小均勻、無機(jī)械損傷、無病蟲害果實(shí)用于后續(xù)試驗?；颐咕鸀榛移咸焰呙?，由西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院提供，4 ℃冰箱保存（定期活化以保證灰霉菌活性）。

山梨酸鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二納、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinyl Pyrrolidone，PVP）、Triton X-100、聚乙二醇6000（Polyethylene Glycol-600，PEG-6000）、乙二胺四乙酸二鈉（ Ethylenediaminetetraacetic acid-2Na，EDTA-2Na）、愈創(chuàng)木酚、無水乙醇、鄰苯二酚、乙二胺四乙酸（Ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）、冰醋酸、無水醋酸鈉、幾丁質(zhì)、丙酮、脫鹽蝸牛酶、 四硼酸鉀、 對二甲基苯甲醛（4-Dimethylaminobenzaldehyde，DMAB）、濃鹽酸、N-乙酰葡萄糖苷、L-抗壞血酸、3,5-二硝基水楊酸（3,5-Dinitrosalicylic Acid，DNS）、葡萄糖、昆布多糖、酒石酸鉀鈉、結(jié)晶酚、β-巰基乙醇、亞硫酸鈉、葡萄糖、十二烷基磺酸鈉（Sodium Dodecyl Sulfate，SDS）等，均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

ES-315 立式全自動高壓滅菌鍋（TOMY，日本）、BCD-236DT 型冰箱（海爾，中國）、SW-CJ-2FD 型紫外無菌操作臺（Airtech，蘇州安泰）、3K15 型臺式高速冷凍離心機(jī)（Sigma，德國）、I3X 多標(biāo)記微孔板檢測系統(tǒng)（Molecular Devices，美國）、A11 basic 研磨粉碎機(jī)（IKA，德國）、PAL-BX/ACID8 奇異果糖酸一體機(jī)（ATAGO/愛拓，日本）等。

1.3 方法

1.3.1 灰葡萄孢霉孢子懸浮液制備

將灰霉菌培養(yǎng)在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（Potato Dextrose Agar，PDA）上，于24 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7 d 待菌絲長出。用無菌接種針挑取培養(yǎng)皿邊緣菌絲體，置于含有0.05%（體積分?jǐn)?shù)）吐溫80 的無菌蒸餾水中，攪拌洗下孢子。采用紅血球計數(shù)板計數(shù)，用無菌水將孢子濃度調(diào)節(jié)至1×106個/mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3.2 樣品處理

1）離體試驗

前期用不同濃度山梨酸鉀和不同溫度熱水浸泡接種過灰葡萄孢霉的獼猴桃，綜合正交試驗結(jié)果，得出山梨酸鉀最適處理質(zhì)量濃度5 g/L，熱處理最佳溫度為48 ℃，浸泡時間為8 min。

配置不添加山梨酸鉀的培養(yǎng)基（記為PDA 1）和含有5 g/L 山梨酸鉀的PDA 培養(yǎng)基（記為PDA 2），分別倒入培養(yǎng)皿備用。將配置好的孢子懸液分成A、B 兩組，A 組不做處理，B 組孢子懸液經(jīng)48 ℃水浴加熱8 min。兩組孢子懸液分別滴加至PDA 培養(yǎng)基中心，即試驗設(shè)置4 組處理分別為：對照（CK）：PDA 1+10 μL 孢子懸液A；熱激處理（HT）：PDA 1+10 μL 孢子懸液B；山梨酸鉀處理（PS）：PDA 2+10 μL 孢子懸液A；熱激和山梨酸鉀復(fù)合處理（PS+HT）：PDA 2+10 μL 孢子懸液B。然后將所有平板放置（24±0.5）℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天用十字交叉法[12]統(tǒng)計菌落直徑，每個處理設(shè)3 個平板，試驗重復(fù)3 次。

2）果實(shí)接種試驗

用1%的NaClO 浸泡2 min 進(jìn)行果面消毒后，立即用清水沖洗3 遍。晾干后用無菌接種針（直徑約3 mm）在果實(shí)赤道部位形成傷口（深約3 mm），傷口晾干后，在傷口處滴入10 μL 配好的灰葡萄孢霉孢子懸浮液，自然晾干2 h。進(jìn)行分組處理：以室溫下18 ℃清水浸泡作為對照（記為CK），其余各組為48 ℃熱水處理（記為HT），5 g/L 山梨酸鉀處理（記為PS），48 ℃熱水+5 g/L 的山梨酸鉀溶液處理（記為PS+HT），均浸泡8 min。處理后將果實(shí)置于保鮮盒中，分別于24 ℃生化培養(yǎng)箱和0 ℃冰箱中保存。24 ℃條件下，在接種后0、1、2、3、4、5、6、7 d 用十字交叉法測定病斑直徑并取病斑周圍1.5 cm范圍內(nèi)果肉組織，液氮研磨后放-80 ℃冰箱保存。0 ℃條件下，在接種后0、7、14、21、25、30 d 測定病斑直徑并取病斑周圍1.5 cm 范圍內(nèi)果肉組織，液氮研磨后放-80 ℃冰箱保存。接種試驗中每組處理用果40 個，每次取樣6 個果實(shí)，重復(fù)3 次。

3）品質(zhì)分析

將采摘獼猴桃果實(shí)經(jīng)預(yù)冷后，分成4 組進(jìn)行浸泡處理，處理方法同上。待果面晾干后裝入PE 袋（0.04 mm），放入塑料框中，運(yùn)回冷庫，在溫度（0±0.5）℃、相對濕度85%±5%條件下進(jìn)行貯藏，每10 d 取10 個果測定相關(guān)指標(biāo)，并且另取10 個整果果肉部分液氮冷凍后置于-80 ℃冷藏待測。每個處理用果30 kg，重復(fù)3 次；每個重復(fù)隨機(jī)抽取100 個果實(shí)另存，待出庫時測定失重率及腐爛率。

1.3.3 指標(biāo)測定

1）接種試驗指標(biāo)測測定

菌落直徑和病斑直徑采用十字交叉法測定[12]。

發(fā)病指數(shù)：根據(jù)霉腐面積占果實(shí)總表面積的比例劃分等級：未發(fā)病為0 級，＞0%～20%為1 級，＞20%～40%為2 級，＞40%～60%為3 級，＞60%～100%為4 級。病情指數(shù)計算公式為

多酚氧化酶（Polyphenol Oxidase，PPO）和過氧化物酶（Peroxidase，POD）活性測定參考Zhou 等[13]的方法，略加修改；幾丁質(zhì)酶（Chitinase，CHI）和β-1,3-葡聚糖酶（β-1,3-Glucanase，GLU）活性測定參考Jiang 等[14]的方法。

2）品質(zhì)指標(biāo)測定

可溶性固形物（SSC）、可滴定酸（Titratable Acid，TA）使用PAL-BX/ACID8 奇異果糖酸一體機(jī)測定，每組處理3 個重復(fù)、每個重復(fù)用果4 個。

維生素C（Vitamin C，Vc）含量測定使用固藍(lán)鹽B比色法[15]，以100 g 果肉中含有的維生素C 質(zhì)量表示，即mg/100g。

貯藏至第90 天時統(tǒng)計果實(shí)的腐爛率和失重率

1.3.4 數(shù)據(jù)處理及分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS 17.0 進(jìn)行單因素方差分析，差異顯著性測定采用鄧肯氏多重比較法，P＜0.05 表示差異顯著，作圖采用Origin 16.0 軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理對離體灰霉菌菌絲生長的抑制

在24 ℃培養(yǎng)24 h 后，處理平板均未有明顯菌落生長。由圖1 可知，培養(yǎng)期間，PS 及PS+HT 處理的菌落直徑均顯著小于CK（P＜0.05）；而HT 處理的菌落直徑與CK 之間差異不顯著（P＞0.05），僅在第4 天小于CK（P＜0.05）。在整個培養(yǎng)期間，各處理組間菌落直徑差異顯著（P＞0.05），PS+HT 復(fù)合處理的菌落直徑顯著低于其他組（P＜0.05），其次為PS 處理。

2.2 不同處理對接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)病斑直徑的影響

由圖2 可看出，無論是在24 ℃還是0 ℃下，PS+HT復(fù)合處理均能延遲果實(shí)灰霉病發(fā)病時間，且復(fù)合處理的果實(shí)病斑直徑均顯著低于同時期其他組（P＜0.05）。在24 ℃下（圖2a），相較于PS 處理果實(shí)的病斑直徑僅在貯藏前期第2，3 和5 天表現(xiàn)低于CK（P＜0.05），HT 處理僅在第6 天與CK 差異不顯著（P＞0.05）。低溫推遲了獼猴桃灰霉病的發(fā)病時間，且減輕發(fā)病程度（圖2b）。與24 ℃下結(jié)果略有差異，0 ℃下（圖2b），HT 和PS 單一處理組在后期第25 和30 天與CK 無明顯差異（P＞0.05）；而HT 處理相較于PS 處理和CK 雖延遲了果實(shí)的發(fā)病時間，但在發(fā)病后的第14 和21 天PS 果實(shí)病斑直徑低于HT（P＜0.05）。

圖1 不同處理對灰霉菌菌絲生長的影響 Fig.1 Effects of different treatments on B. cinerea mycelial growth

2.3 不同處理對接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)發(fā)病指數(shù)的影響

不同溫度貯藏結(jié)束時，CK 果實(shí)幾乎全果腐爛（表 1）。與CK 相比，PS、HT 和PS+HT 處理均顯著降低了獼猴桃感染灰霉菌后的發(fā)病指數(shù)（P＜0.05）。其中，PS+HT處理抑菌效果最佳，24 ℃和0 ℃貯藏下獼猴桃果實(shí)發(fā)病指數(shù)顯著低于CK、PS 和HT 處理（P＜0.05）。PS 和HT處理之間差異不顯著（P＞0.05）。

圖2 24 ℃和0 ℃貯藏下不同處理對損傷接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)病斑直徑的影響 Fig.2 Effects of different treatments on lesion diameter of kiwifruit inoculated with B. cinerea storage at 24 ℃ and 0 ℃

表1 不同處理對損傷接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)發(fā)病指數(shù)的影響 Table 1 Effects of different treatments on incidence index of kiwifruit inoculated with B. cinerea

2.4 不同處理對接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)PPO 活性的影響

接種灰霉菌后獼猴桃果實(shí)PPO 活性總體上呈現(xiàn)上升的趨勢。24 ℃下，在接種后0～5 d，CK 果實(shí)PPO 活性一直處于相對較低的水平，從第5 天開始，PPO 活性迅速升高。與CK 相比，在貯藏前5 d 內(nèi)，HT 和PS 單一處理均誘導(dǎo)了果實(shí)內(nèi)PPO 活性顯著升高（P＜0.05）；在整個貯藏過程中，PS+HT 復(fù)合處理的果實(shí)PPO 活性始終維持較高的水平，除在第5 天與PS 差異不顯著外（P＞0.05），整個時期均高于同時期CK、PS 和HT 處理（P＜0.05）（圖3a）。由圖3b 可知，0 ℃貯藏時HT 和PS 處理可以誘導(dǎo)獼猴桃果實(shí)內(nèi)PPO 活性的迅速升高，到第21 天，PPO 活性趨于穩(wěn)定；CK 果實(shí)內(nèi)PPO 活性在整個貯藏過程中處于較低的水平，且變化趨勢不明顯。在接種14 d 之后，PS、HT 及其復(fù)合處理的PPO 活性均顯著（P＜0.05）高于CK，兩組單一處理之間差異不顯著（P＞0.05），而PS+HT 復(fù)合處理果實(shí)的PPO 活性顯著高于兩組單一處理（P＜0.05）。

圖3 24 ℃和0 ℃貯藏下不同處理對損傷接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)PPO 活性的影響 Fig.3 Effects of different treatments on PPO activity of kiwifruit inoculated with B. cinerea storage at 24 ℃ and 0 ℃

2.5 不同處理對接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)POD 活性的影響

獼猴桃果實(shí)接種灰霉菌后POD 活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，24 ℃下，果實(shí)POD 活性的最大值出現(xiàn)在接種后第5 天，HT，PS 和PS+HT 處理的果實(shí)POD 活性分別是CK 果實(shí)的1.22、1.28 和1.45 倍，PS+HT 處理果實(shí)的POD 活性顯著高于其他3 組（P＜0.05）。在接種后5～7 d，PS、HT 以及PS+HT 處理果實(shí)的POD 活性顯著高于CK（P＜0.05），但三者之間差異不顯著（P＞0.05）（圖 4a）。0 ℃下，果實(shí)的POD 活性在第25 天達(dá)到最大值，此時PS、HT 以及兩者復(fù)合處理果實(shí)的POD 活性分別是CK 果實(shí)的1.19、1.50、1.75 倍。除第7 天、第30 天之外，PS+HT 處理果實(shí)的POD 活性均顯著高于CK、PS和HT 處理（P＜0.05）（圖4b）。

2.6 不同處理對接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)CHI 活性的影響

接種灰霉菌后獼猴桃果實(shí)CHI 活性變化趨勢表現(xiàn)為前期迅速升高，后緩慢下降。24 ℃下，CHI 活性除PS 處理果實(shí)在第3 天出現(xiàn)峰值外，其余組果實(shí)均在第2 天出現(xiàn)峰值，HT，PS 和PS+HT 處理的果實(shí)CHI 峰值分別是CK 峰值的1.22 倍、1.27 倍、1.53 倍（圖5a）。在整個0 ℃貯藏期內(nèi)PS、HT、PS+HT 處理果實(shí)CHI 酶活性均表現(xiàn)高于CK 果實(shí)（P＜0.05）（圖5b）。在2 種溫度貯藏條件下，PS+HT 復(fù)合處理的CHI 峰值均顯著高于CK、PS和HT 處理（P＜0.05）。

圖4 24 ℃和0 ℃貯藏下不同處理對獼猴桃接種灰霉菌后POD活性的影響 Fig.4 Effects of different treatments on POD activity of kiwifruit inoculated with B. cinerea storage at 24 ℃ and 0 ℃

圖5 24 ℃和0 ℃貯藏下不同處理對損傷接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)CHI 活性的影響 Fig.5 Effects of different treatments on CHI activity of kiwifruit inoculated with B. cinerea storage at 24°C and 0°C

2.7 不同處理對接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)GLU 活性的影響

接種灰霉菌后獼猴桃果實(shí)GLU 活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。24 ℃下，果實(shí)GLU 活性的峰值出現(xiàn)在第2 天，HT，PS 及PS+HT 處理果實(shí)的GLU 峰值均顯著高于CK（P＜0.05），HT 和PS 單一處理之間差異不顯著（P＞0.05），PS+HT處理復(fù)合處理果實(shí)GLU活性顯著高于同時期單一處理組（P＜0.05）（圖6a）。0 ℃下，GLU 活性上升至第14 d 后逐漸下降，CK 果實(shí)較其他處理組果實(shí)變化緩慢（圖6b）。在2 種溫度貯藏期內(nèi)，PS+HT 處理的果實(shí)GLU活性均表現(xiàn)高于CK 果實(shí)（P＜0.05），僅在0 ℃貯藏末期即第30 d 時與CK 差異不顯著（P＞0.05）。

2.8 不同處理對獼猴桃果實(shí)貯藏期間營養(yǎng)品質(zhì)的影響

在0 ℃貯藏過程中獼猴桃果實(shí)SSC 含量變化如圖7a所示。4 組處理SSC 含量均呈現(xiàn)先升高后逐漸趨于平穩(wěn)的變化趨勢。在整個貯藏過程中PS、HT 和PS+HT 處理組與CK 之間無顯著差異（P＞0.05）。由圖7b 可知，TA含量隨著貯藏時間的延長而下降。PS 和HT 處理可以在一定程度上延緩TA 的下降，但延緩幅度不明顯。在整個貯藏過程中PS+HT 處理果實(shí)TA 含量下降幅度最小，與CK 差異顯著（P＜0.05）。由圖7c 可知，在整個貯藏過程中果實(shí)Vc 含量不斷下降。PS、HT、PS+HT 處理果實(shí)Vc 含量均高于CK，PS 處理與CK 之間差異性不顯著（P＞0.05），HT 和PS+HT 處理在貯藏50 d 后與CK 差異顯著（P＜0.05）。貯藏結(jié)束時，HT 和PS+HT 處理的Vc質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為87.84 mg/100g 和91.54 mg/100g，約為CK 的1.13 倍和1.18 倍。

2.9 不同處理對貯藏期結(jié)束時獼猴桃果實(shí)失重率和腐爛率的影響

如表2 所示，在0 ℃下90 d 的貯藏期結(jié)束后，PS、HT 和PS+HT 處理組的失重率和腐爛率均顯著低于CK(P＜0.05)。CK 的失重率是4.61%，分別是PS、HT 和PS+HT 處理的1.20、1.14 和2.18 倍。貯藏90 d后，與CK 相比，PS 處理顯著抑制獼猴桃果實(shí)采后腐爛的發(fā)生（P＜0.05），而HT 和PS+HT 處理則均未發(fā)現(xiàn)腐爛。

圖6 24 ℃和0 ℃貯藏下不同處理對損傷接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)GLU 活性的影響 Fig.6 Effects of different treatments on GLU activity of kiwifruit inoculated with B. cinerea storage at 24 ℃ and 0 ℃

圖7 不同處理對‘徐香’果實(shí)可溶性固形物、可滴定酸和維生素C 含量的影響 Fig.7 Effects of different treatments on SSC, TA and vitamin C content of kiwifruit

表2 不同處理對獼猴桃果實(shí)貯藏90 d 后失重率和腐爛率的影響 Table 2 Effects of different treatments on the rates of weight loss and decay of kiwifruit after storage 90 d

3 討 論

熱激處理可以減輕果蔬采后腐爛損失，主要是通過誘導(dǎo)合成植保素，直接抑制病原體生長，或誘導(dǎo)宿主啟動防御反應(yīng)[16]。本研究選用48 ℃熱水處理獼猴桃，并在0 ℃貯藏90 d 后，HT 處理的果實(shí)的失重率和腐爛率低于對照，并且貯藏過程中其SSC 與對照沒有明顯差異，甚至一定程度延緩了果實(shí)貯藏期間TA 和Vc 含量的下降；表明熱水處理對獼猴桃營養(yǎng)品質(zhì)沒有產(chǎn)生負(fù)面影響，且降低了獼猴桃果實(shí)采后腐爛率，與熱處理蘋果、桃子、瓜果等的結(jié)果相似[17-19]，為熱水處理獼猴桃果實(shí)采后病害的控制提供依據(jù)。山梨酸鉀的抗真菌特性已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種園藝作物的灰霉病[20]和青霉病[21-22]等真菌性病害控制，但對獼猴桃采后病害防治還鮮有報道。在本研究中，5 g/L 山梨酸鉀處理顯著抑制了灰霉菌菌絲生長，這一結(jié)果與課題組前期的研究結(jié)果一致[9]，與48 ℃熱水處理結(jié)合提高了山梨酸鉀的抑菌效果。損傷接種試驗結(jié)果顯示，PS 和HT 單一處理在一定程度抑制了果實(shí)灰霉病的擴(kuò)散，但兩組處理間差異不明顯，24 ℃貯藏前期HT處理對病斑擴(kuò)散的抑制效果未優(yōu)于PS，但在0 ℃接種試驗中較PS 延遲了發(fā)病時間，在接種后第14 和21 天其果實(shí)病斑直徑略高于PS，這種結(jié)果也呼應(yīng)了PS 處理果實(shí)CHI 活性在0 ℃貯藏的第14 天迅速上升至峰值。正如Fadda 等[23]的研究，在53 ℃下1%的山梨酸鉀處理對蘋果青霉病的抑制效果優(yōu)于20 ℃下同濃度的山梨酸鉀處理。本研究中，無論在24 ℃還是0 ℃下，48 ℃熱水和5 g/L山梨酸鉀復(fù)合處理組的獼猴桃果實(shí)病斑直徑和發(fā)病指數(shù)均顯著低于同時期其他組（P＜0.05）。

果蔬在遭受外界病原菌侵染傷害時，會誘導(dǎo)苯丙烷代謝途徑中防御酶（PPO、POD）活性的提高。PPO 和POD 能夠?qū)⒎宇愇镔|(zhì)氧化成對病原菌有毒害作用的醌，并參與植物細(xì)胞內(nèi)木質(zhì)素的生物合成，增強(qiáng)細(xì)胞壁厚度，以抵抗病原體感染[24]。本研究結(jié)果表明，經(jīng)山梨酸鉀和熱激處理的獼猴桃果實(shí)表現(xiàn)出較對照更高的PPO 和POD活性。該結(jié)果可能是因為灰葡萄孢侵染果實(shí)后，熱和山梨酸鉀可以作為誘導(dǎo)因子，激發(fā)果實(shí)內(nèi)PPO、POD 活性的升高，以促進(jìn)酚類植保素和木質(zhì)素的合成，從而增強(qiáng)獼猴桃果實(shí)對入侵病原菌的抵抗性[25]。幾丁質(zhì)酶（CHI）和β-1,3-葡聚糖酶（GLU）是2 種非常重要的病程相關(guān)蛋白（Pathogenesis Related protein，PR 蛋白），可以水解入侵病原真菌的細(xì)胞壁主要成分（幾丁質(zhì)和葡聚糖）[24]，抑制真菌的生長和發(fā)育速度，從而減輕由病原菌不斷侵染造成的損失。L-精氨酸可以通過誘導(dǎo)番茄果實(shí)CHI 和GLU 酶活性的升高，減輕由B.cinerea 侵染造成的采后病害[26]；寡殼聚糖可以通過誘導(dǎo)CHI 和GLU 活性的升高，減輕臍橙果實(shí)采后炭疽病的發(fā)生[27]。與之相似，在本試驗中，用5 g/L 山梨酸鉀和48 ℃熱水處理接種灰葡萄孢后的獼猴桃果實(shí)，探究其在24 ℃和0 ℃貯藏條件下對果實(shí)CHI 和GLU 活性的影響，結(jié)果表明：在24 ℃貯藏條件下，熱激和山梨酸鉀在第2 天誘導(dǎo)了兩種酶活的迅速升高；在0 ℃貯藏條件下，CHI 和GLU 活性在第14 天出現(xiàn)明顯的高峰。以上結(jié)果說明熱激和山梨酸鉀處理可能通過提高果實(shí)CHI 和GLU 活性，從而提高果實(shí)抗病性，抑制果實(shí)的病情發(fā)展。綜上所述，在本研究中，熱激、山梨酸鉀及其復(fù)合處理均不同程度提高了獼猴桃果實(shí)PPO、POD、CHI、GLU 活性，從而減輕獼猴桃灰霉病發(fā)生。

SSC、TA、Vc 含量是反映果實(shí)風(fēng)味和營養(yǎng)的重要指標(biāo)。本研究中熱激和山梨酸鉀處理對SSC 含量變化沒有影響，并在一定程度上延緩了TA、Vc 含量的下降，降低了果實(shí)采后營養(yǎng)物質(zhì)的損失。另外，熱激、山梨酸鉀及其復(fù)合處理均顯著降低了獼猴桃果實(shí)在低溫貯藏90 d后的失重率和腐爛率。因此，熱激、山梨酸鉀及其復(fù)合處理有助保持獼猴桃采后果實(shí)的品質(zhì)，并提高果實(shí)的貯藏性。

山梨酸鉀作為世界公認(rèn)的安全性食品添加劑，以其高效的抑菌特性及較為低廉的成本已被廣泛應(yīng)用于飲料、肉類以及化妝品等行業(yè)，且相關(guān)研究報道證實(shí)了其對果蔬防腐的有效性[28-29]，而山梨酸鉀處理對獼猴桃果實(shí)采后病害的抑制效應(yīng)及其對長期貯藏下獼猴桃果實(shí)品質(zhì)影響鮮有報道。Ma 等[30]的研究表明熱水處理較好地維持了獼猴桃果實(shí)在貯藏期間的品質(zhì)，且減輕其冷害，而熱水對于獼猴桃真菌病原及其對長期貯藏下獼猴桃果實(shí)腐爛的抑制效應(yīng)則少見報道。因此，本研究將山梨酸鉀復(fù)合熱水處理，探究其對于離體灰霉菌和獼猴桃果實(shí)的影響，以期在獼猴桃采后長期貯藏過程中，在不損害甚至能更好地維持其營養(yǎng)品質(zhì)的基礎(chǔ)上，降低灰霉病發(fā)生，從而減輕果實(shí)霉?fàn)€帶來的經(jīng)濟(jì)損失，為獼猴桃的防腐保鮮探究一種更加安全有效的措施。

4 結(jié) 論

1）在離體試驗中，在24 ℃下的4 d 培養(yǎng)期間，5 g/L山梨酸鉀及其與熱水復(fù)合處理均始終抑制灰霉菌菌落直徑的擴(kuò)展（P＜0.05），而48 ℃熱水處理的菌落直徑在培養(yǎng)的2～3 d 均與同時期對照組無明顯差異（P＞0.05）。

2）在接種試驗中，5 g/L 山梨酸鉀、48 ℃熱激處理一定程度上抑制了灰霉菌在獼猴桃上的生長和繁殖，而復(fù)合處理不僅延遲了果實(shí)灰霉病發(fā)時間，且復(fù)合處理的果實(shí)病斑直徑和發(fā)病指數(shù)均顯著低于其他組（P＜0.05）?；颐咕秩境跗冢瑹峒ず蜕嚼嫠徕浤軌蜓杆僬T導(dǎo)果實(shí)啟動防御反應(yīng)，提升多酚氧化酶PPO、過氧化物酶POD、幾丁質(zhì)酶CHI 和β-1，3-葡聚糖酶GLU 活性，但隨著灰霉菌在果實(shí)內(nèi)不斷繁殖和蔓延，營養(yǎng)物質(zhì)逐漸被分解，果實(shí)抗病能力減弱，防御相關(guān)酶活性下降。

3）山梨酸鉀和熱水處理延緩了冷藏期間果實(shí)可滴定酸和Vc 含量的下降，維持了可溶性固形物含量的穩(wěn)定，且有效降低貯藏90 d 出庫時獼猴桃果實(shí)的失重率及腐爛率（P＜0.05）。