三七葡萄籽軟膠囊抗氧化功能實(shí)驗(yàn)研究

周艷梅，馬 妮 ，高明菊，楊 福，李建明

（1.云南七丹藥業(yè)股份有限公司，云南文山663099；2.文山學(xué)院文山三七研究院，云南文山663099）

三七葡萄籽軟膠囊是以三七提取物、葡萄籽提取物為主要成分研究開發(fā)所得的保健食品。方中三七提取物是從五加科人參屬植物三七中提取的活性成分，其主要成分為三七總皂苷（PNS）、黃酮、糖類等。有學(xué)者測定三七多糖、總黃酮、總皂苷（PNS）還原/抗氧化能力及清除DPPH自由基、羥自由基、ABTS自由基、超氧自由基能力，均表明三七具有較強(qiáng)的抗氧化作用，能保護(hù)DNA免受自由基氧化損傷[1～2]。葡萄籽含有豐富的亞油酸、原花青素、蛋白質(zhì)等活性成分，而葡萄籽提取物為從葡萄籽中提取的生物類黃酮，具有抗氧化活性，廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品等領(lǐng)域[3]；葡萄籽提取物能升高小鼠血中SOD和GSH-Px活性，具有明顯的抗脂質(zhì)過氧化作用[4]。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供的SPF級ICR品系雄性小鼠100只，體重25g～30g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號：SCXK （京）2012-0001。

1.2 樣品

三七葡萄籽軟膠囊，由云南七丹藥業(yè)股份有限公司提供。規(guī)格0.5g/粒。人口服推薦劑量為每日2次,每次2粒,成人體重按60kg計(jì)算,折合人體日推薦劑量33mg/kg·bw。取膠囊內(nèi)容物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 主要儀器及試劑

天平、TU1901型紫外可見分光光度計(jì)、酶標(biāo)分析儀、恒溫水浴鍋。

橄欖油，D-半乳糖，注射用生理鹽水，丙二醛（MDA）測試盒，蛋白質(zhì)羰基試劑盒，微量還原型谷胱甘肽（GSH）試劑盒，SOD 試劑盒（WST-1法）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

健康雄性成年小鼠100只，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天，選取25g～30g小鼠 （剩余小鼠處死），用D-半乳糖100mg/kg BW腹腔注射造模，注射量0.1ml/10g，每日1次，連續(xù)造模6周，眼眶取血測定血清MDA，按MDA水平分組，隨機(jī)分為1個(gè)模型對照組和3個(gè)受試物劑量組，每組15只小鼠（剩余小鼠處死）。受試物3個(gè)劑量組小鼠分別經(jīng)口給予受試樣品1000.0mg/kg BW，333.3mg/kg BW,166.7mg/kg BW（分別相當(dāng)于人體日推薦用量的30、10、5倍），模型對照組給予等體積橄欖油，每天給予1次，同時(shí)繼續(xù)腹腔給予100mg/kg D-半乳糖，連續(xù)給予30天，給予期間每周測1次體重。實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死小鼠，測定小鼠脂質(zhì)氧化產(chǎn)物，丙二醛（MDA）含量，蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物，蛋白質(zhì)羰基含量，抗氧化物質(zhì)，還原性谷胱甘肽（GSH）含量，抗氧化酶，谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力。

3 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.5軟件做方差分析。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 三七葡萄籽軟膠囊對小鼠體重的影響

結(jié)果如表1所示，給予受試物實(shí)驗(yàn)期間，受試物各劑量組與模型對照組相比，小鼠體重?zé)o顯著性差異（P＞0.05）。

表1 三七葡萄籽軟膠囊對小鼠體重的影響（X±SD，n=15）

4.2 三七葡萄籽軟膠囊對小鼠血清MDA含量的影響

結(jié)果如表2所示，給予受試物30天后，受試物各劑量組與模型對照組相比，脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA含量均顯著降低（P＜0.01）。

表2 三七葡萄籽軟膠囊對小鼠血清MDA含量的影響（X±SD，n=15）

4.3 三七葡萄籽軟膠囊對小鼠血清蛋白質(zhì)羰基含量的影響

結(jié)果如表3所示，給予受試物30天后，受試物高、中、低劑量組與模型對照組相比，蛋白質(zhì)羰基含量均顯著減低（P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01）。

表3 三七葡萄籽軟膠囊對小鼠血清蛋白質(zhì)羰基含量的影響（X±SD，n=15）

4.4 三七葡萄籽軟膠囊對小鼠血清GSH含量的影響

結(jié)果如表4所示，給予受試物30天后，受試物各劑量與模型對照組相比，抗氧化物質(zhì)GSH含量均無明顯差異。

表4 三七葡萄籽軟膠囊對小鼠血清GSH含量的影響（X±SD，n=15）

4.5 三七葡萄籽軟膠囊對小鼠血清GSH-Px活力的影響

結(jié)果如表5所示，給予受試物30天后，受試物各劑量組與模型對照組相比，抗氧化酶GSH-Px活力均顯著性提高（P＜0.05 或P＜0.01）。

表5 三七葡萄籽軟膠囊對小鼠血清GSH-Px活力的影響（X±SD，n=15）

5 結(jié)論

分 別 以 1000.0mg/kgBW、333.3mg/kgBW、166.7mg/kg BW （分別相當(dāng)于人體日推薦用量的30、10、5倍）劑量的三七葡萄籽軟膠囊，經(jīng)口給予D-半乳糖氧化損傷模型小鼠30天，能夠降低小鼠血清中脂質(zhì)氧化產(chǎn)物和蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物含量，同時(shí)提高抗氧化酶活力，但對抗氧化物質(zhì)無明顯影響。根據(jù)國食藥監(jiān)?；痆2012]107號文附件1：抗氧化功能評價(jià)方法判定[5]，三七葡萄籽軟膠囊對D-半乳糖氧化損傷模型小鼠具有抗氧化功能。

6 討論

三七葡萄籽軟膠囊選方以三七提取物和葡萄籽提取物為主要原料，其中三七提取物中含三七總皂苷等活性成分，高云濤[2]等發(fā)現(xiàn)，三七總皂苷具有良好的清除氧自由基和抗氧化能力；胡軍霞[6]發(fā)現(xiàn)，三七醇提物對體外氧化損傷模型有很強(qiáng)的抗氧化作用，對輻射引起的大鼠體內(nèi)肝臟氧化損傷具有一定的抗氧化損傷修復(fù)功效。而葡萄籽提取物中有大量的活性酚羥基，是氫的供體，能有效地清除多種活性氧自由基，影響某些酶的生物活性，具有極強(qiáng)的抗氧化活性[7]。

本實(shí)驗(yàn)中，D-半乳糖氧化損傷模型中，經(jīng)口連續(xù)給予不同劑量的三七葡萄籽軟膠囊30d，可明顯降低血清中的MDA含量，并提高GSH-Px活力。提示三七葡萄籽軟膠囊的抗氧化作用可能通過抑制MDA的生成，提高GSH-Px的活性起作用。GSH-Px是機(jī)體內(nèi)催化過氧化氫分解的一種酶，它特異性催化還原谷胱甘肽（GSH）還原過氧化氫反應(yīng)，增強(qiáng)這些抗氧化酶清除自由基的能力，減少過氧化產(chǎn)物丙二醛的生成，從而減少氧化應(yīng)激反應(yīng)；由此表明三七葡萄籽軟膠囊可抑制血清中MDA的生成，而增強(qiáng)GSH-Px活力達(dá)到抗氧化作用。