唾液腺淋巴上皮性病變中免疫組織化學雙染技術(shù)的應用

朱姝美

【摘 ?要】目的：分析免疫組織化學雙染技術(shù)應用于唾液腺淋巴上皮性病變的診斷效果，根據(jù)不同的抗體陽性表達形式及染色效果，判定最佳的病變診斷染色途徑。方法：選取本單位檢測組織樣本包括良性淋巴上皮病、淋巴上皮癌、淋巴組織結(jié)外邊緣區(qū) B 細胞淋巴瘤，分別應用抗體免疫組織化學單染色法及組合雙染色法，對照不同染色方法的染色效果。結(jié)果：單染結(jié)果顯示Ki-67定位區(qū)域為細胞核、AE1/AE3定位區(qū)域為上皮細胞細胞質(zhì)位置，CD20cy定位區(qū)域為B淋巴細胞的細胞膜位置，不同抗體的陽性檢測率及染色對比度優(yōu)良。雙染色順序為 Ki-67 （DAB 顯色）隨后AE1/AE3、CD20cy （AEC 顯色），應用EnvisionTM二步法完成DAB 顯色，抗體的定位相對更為準確，有鮮明的顏色對比，相較于單染，其陽性比率及陽性染色強度無顯著差異（P>0.05）。結(jié)論：通過免疫組織雙染技術(shù)能夠提供輔助診斷的有效途徑，在細胞群蛋白表達中提供更具價值的信息。

【關(guān)鍵詞】唾液腺;淋巴上皮性病變;免疫組織;化學雙染技術(shù)

【中圖分類號】R46??????【文獻標識碼】A??????【文章編號】1672-3783（2020）03-0270-01

唾液腺腫瘤是唾液腺組織中的常見疾病的一種，當前發(fā)病率有逐年增多的趨勢^[1]，多數(shù)唾液腺腫瘤為上皮性腫瘤類型，其病理類型較為復雜，不同的腫瘤在影像學顯示、臨床表征等方面存在差異，常規(guī)的檢測方法為免疫組化檢測方法，免疫組化雙染技術(shù)相較于單染技術(shù)具有顯著的應用優(yōu)勢，能夠在單張切片上同時完成對兩種抗體的標識，且以不同的顏色呈現(xiàn)出來，雙染技術(shù)能夠?qū)μ囟ǖ募毎褐械牡鞍妆磉_進行觀察，在較為復雜的細胞類型檢驗中有廣泛的應用^[2]。此次研究中，應用免疫組織化學雙染法分別對單位組織樣本進行檢驗，現(xiàn)就研究結(jié)果作如下內(nèi)容報道。

1 資料與方法

1.1一般資料

此次研究中，選取我單位檢驗樣本包括良性淋巴上皮?。╞enign lymphoepithelial lesions，BLEL）、淋巴上皮癌（lymphoepithelial carcinoma，LEC）、淋巴組織結(jié)外邊緣區(qū) B 細胞淋巴瘤（extranodal marginal zone lymphomaof mucosa-associated lymphoid tissue，MALT 淋巴瘤）各10例。

1.2方法

此次研究中，所有的樣本材料應用甲醛液體進行固定，在完成脫水及石蠟包埋處理后進行常規(guī)H-E染色，同時由有豐富經(jīng)驗的醫(yī)師進行閱片診斷。（1）免疫組織化學染色單染應用的抗體為Ki-67、AE1/AE3、CD20cy，0.3h，應用免疫組織化學單染法進行檢測，進行常規(guī)脫蠟入水處理，進行抗原修復后經(jīng)PBS緩沖液清洗，清洗5min×3次。滴加一抗于37℃狀態(tài)下孵育時間為60min，經(jīng)PBS緩沖液清洗5min×3次，DAB顯色共5min，后經(jīng)流水清洗處理。應用蘇木精染色共60min，后完成常規(guī)脫水后進行封片。（2）應用免疫組織化學雙染法對BLEL及淋巴上皮惡性病變檢測，LEC病例雙染所應用的抗體為Ki-67和 AE1/AE3，應用Ki-67 和 CD20cy進行MALT淋巴瘤病例雙染，以抗體陽性顯示的具體位置信息，選用對應的滴加順序，完成顯色劑的顯色作用，首先為 Ki-67 （DAB 顯色）隨后AE1/AE3、CD20cy （AEC 顯色），應用EnvisionTM二步法完成DAB 顯色，應用PBS 緩沖液進行清洗，在完成一抗滴加后在37℃狀態(tài)下孵育時間為60min，經(jīng)PBS緩沖液清洗5min×3次，隨后滴加HPR復合物二抗，在37℃狀態(tài)下孵育時間為60min，經(jīng)PBS緩沖液清洗后完成AEC顯色反應，隨后應用蘇木精染色共60min，后完成常規(guī)脫水后進行封片。

1.3統(tǒng)計學方法

此次研究中，所應用的統(tǒng)計學分析軟件為SPSS18.0，其中計量資料以標準差形式表示，通過t進行組間驗證，計數(shù)資料以n（%）形式表示，通過卡方進行組間驗證，若存在顯著的統(tǒng)計學差異，則顯示為P<0.05。

2 結(jié)果

2.1 免疫組織化學單染技術(shù)化學檢測結(jié)果

單染結(jié)果顯示，Ki-67定位區(qū)域為細胞核、AE1/AE3定位區(qū)域為上皮細胞細胞質(zhì)位置，CD20cy定位區(qū)域為B淋巴細胞的細胞膜位置，不同抗體的陽性檢測率及染色對比度優(yōu)良。

2.2 免疫組織化學雙染技術(shù)化學檢測結(jié)果

雙染結(jié)果顯示Ki-67 （DAB 顯色）隨后AE1/AE3、CD20cy （AEC 顯色），應用EnvisionTM二步法完成DAB 顯色，抗體的定位相對更為準確，有鮮明的顏色對比，相較于單染，其陽性比率及陽性染色強度無顯著差異（P>0.05）。

3 討論

應用免疫組織化學雙染技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)在相同組織切片中2種蛋白質(zhì)的標記，在對較為復雜的病變細胞進行檢測時，可以確定淋巴瘤的類型，從而對細胞群中特定的蛋白質(zhì)表達狀況進行分析，上皮細胞具有較強的增值活性，根據(jù)單純形態(tài)學分析以及單染色途徑無法完成準確判斷^[3]，而免疫組織化學雙染色方法通過一抗滴加順序的改變，分別滴加細胞核抗體、細胞質(zhì)抗體、細胞膜抗體，蛋白表達更準確，此次研究中單染結(jié)果顯示Ki-67定位區(qū)域為細胞核、AE1/AE3定位區(qū)域為上皮細胞細胞質(zhì)位置，CD20cy定位區(qū)域為B淋巴細胞的細胞膜位置，不同抗體的陽性檢測率及染色對比度優(yōu)良。雙染色順序為 Ki-67 （DAB 顯色）隨后AE1/AE3、CD20cy （AEC 顯色），應用EnvisionTM二步法完成DAB 顯色，抗體的定位相對更為準確，有鮮明的顏色對比，相較于單染，其陽性比率及陽性染色強度無顯著差異（P>0.05）。綜上所述，通過免疫組織雙染技術(shù)能夠提供輔助診斷的有效途徑，在細胞群蛋白表達中提供更具價值的信息。

參考文獻

[1] 顧挺，胡宇華，夏榮輝， 等.免疫組織化學雙染技術(shù)在唾液腺淋巴上皮性病變中的應用評價[J].中國口腔頜面外科雜志，2019，17（3）：216-220.

[2] 劉奕，周昊，費偉.CD20在口腔潛在惡性病變中的表達及其臨床意義[J].國際口腔醫(yī)學雜志，2018，45（2）：135-139.

[3] 江悅，宋國新，張煒明， 等.兩種免疫組織化學平臺和抗體檢測PD？L1表達的一致性分析[J].中華病理學雜志，2019，48（11）：867-872.