基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療高脂血癥的作用機(jī)制＊

姬夢(mèng)姣，朱博冉，魏亞男，張文苑，翟 意，陶偉偉，吳顥昕

（南京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院·中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院 中醫(yī)腦病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南京 210023）

高脂血癥（hyperlipidemia，HLP）主要是脂質(zhì)代謝異常，其病理表現(xiàn)主要與血漿或血清中的總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）水平升高和（或）高密度蛋白-膽固醇（HDL-C）水平降低有關(guān)，可導(dǎo)致多種并發(fā)癥的產(chǎn)生，如動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、阿爾茲海默癥和帕金森病等[1-2]。中醫(yī)學(xué)高脂血癥與“肥胖”“中風(fēng)”“血瘀”“痰濁”“血濁”等病類似，其發(fā)病因素涉及多種方面，飲食、情緒、勞倦均與之相關(guān)[3]；病機(jī)方面，高脂血癥為本虛標(biāo)實(shí)之證，以正虛為本、痰瘀為標(biāo)[4]。

中醫(yī)治療高脂血癥針對(duì)正虛、痰濕、瘀血主要以益氣活血化瘀中藥治療。補(bǔ)陽(yáng)還五湯（Buyang Huanwu decoction）出自清代醫(yī)家王清仁《醫(yī)林改錯(cuò)》，是益氣活血的代表方，由7味中藥（黃芪、赤芍、歸尾、川芎、地龍、桃仁和紅花）組成，本方以補(bǔ)氣為主，活血祛瘀為輔，共奏補(bǔ)氣活血化瘀之功效，主要用于氣虛血瘀之癥[5]?，F(xiàn)代研究表明，補(bǔ)陽(yáng)還五湯具有降脂降糖、抗炎、抗缺氧、降壓、改善微循環(huán)以及抗血栓等作用，對(duì)治療高脂血癥、心血管疾病和糖尿病腎病等療效較佳[6-8]。臨床及實(shí)驗(yàn)研究表明，補(bǔ)陽(yáng)還五湯可顯著改善高脂血癥[9-12]。

由于中藥復(fù)方成分的復(fù)雜性和靶點(diǎn)的不確定性，常規(guī)藥理研究方法難以全面闡明補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療高脂血癥的分子作用機(jī)制。因此，本研究借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從系統(tǒng)性，從整體角度來(lái)探究補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療高脂血癥的作用機(jī)制，以期提供新的思路。

1 方法

1.1 補(bǔ)陽(yáng)還五湯化學(xué)成分的獲取與篩選及靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）對(duì)補(bǔ)陽(yáng)還五湯成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行構(gòu)建，并對(duì)主要活性成分進(jìn)行篩選。根據(jù)TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)使用指南，將OB 值（生物利用度）的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定為≥30%，DL 值（類藥性）≥0.18。因?yàn)門CMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)中未收錄“當(dāng)歸尾”“地龍”相關(guān)數(shù)據(jù)，所以根據(jù)2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》一部規(guī)范藥材名，將當(dāng)歸代替當(dāng)歸尾處理，并從TCMID 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.megabionet.org/tcmid/）中獲取“地龍”的化學(xué)成分。利用STICH 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://stich.embl.de/）將以上獲得的潛在成分進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)并利用UniProt KB 數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.uniprot.org)對(duì)以上獲得的藥物成分靶點(diǎn)進(jìn)行規(guī)范命名。

1.2 高脂血癥疾病靶點(diǎn)獲取

通過(guò)人類表型數(shù)據(jù)庫(kù)HPO（https://hpo.jax.org/）檢索高脂血癥相關(guān)基因，并與成分靶點(diǎn)合并進(jìn)行下一步網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和分析。

1.3 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和分析

將以上獲得的成分靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)導(dǎo)入至STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://string-db.org/）中，得到成分靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)的拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)關(guān)系，利用Cytoscape 3.6.1軟件建立可視化網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋱D，了解蛋白與蛋白之間的聯(lián)系。在構(gòu)建補(bǔ)陽(yáng)還五湯所含藥物的靶點(diǎn)與高脂血癥基因相互作用網(wǎng)絡(luò)的核心節(jié)點(diǎn)(hubs)網(wǎng)絡(luò)的基礎(chǔ)上，以“節(jié)點(diǎn)連接度（degree）”“節(jié)點(diǎn)緊密度(closeness)”“節(jié)點(diǎn)介度(betweenness)”的中位數(shù)為卡值，選取同時(shí)滿足三個(gè)卡值的節(jié)點(diǎn)作為補(bǔ)陽(yáng)還五湯防治高脂血癥失衡網(wǎng)絡(luò)的候選靶點(diǎn)。本研究通過(guò)對(duì)上述藥物候選靶點(diǎn)所參與的通路進(jìn)行富集分析，進(jìn)一步挖掘補(bǔ)陽(yáng)還五湯防治高脂血癥的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)分子機(jī)制，并構(gòu)建“補(bǔ)陽(yáng)還五湯-化學(xué)成分-核心靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路”的多層次網(wǎng)絡(luò)關(guān)聯(lián)圖。

1.4 KEGG通路分析

本研究采用DAVID 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://david.ncifcrf.gov/summary.jsp）對(duì)候選靶點(diǎn)進(jìn)行通路富集分析以闡明候選靶點(diǎn)蛋白在信號(hào)通路中的作用，并根據(jù)通路富集結(jié)果獲得相應(yīng)的P值，選擇P＜0.01 的排序前20 的通路，然后再利用R 語(yǔ)言將獲得的KEGG 通路制作成氣泡圖。

2 結(jié)果

2.1 化學(xué)成分篩選與靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

根據(jù)TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)收集補(bǔ)陽(yáng)還五湯的化學(xué)成分，分別獲得各單味藥中的潛在活性成分，黃芪20 個(gè)，當(dāng)歸2個(gè)，赤芍29個(gè)，川芎7個(gè)，桃仁23個(gè)，紅花15個(gè)，從TCMID數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得地龍的潛在活性成分7個(gè)。有些化合物，如黃芪甲苷（黃芪）、阿魏酸（當(dāng)歸）、藁本內(nèi)酯（當(dāng)歸）、苦杏仁苷（桃仁）、紅花黃色素（紅花）、亞油酸（當(dāng)歸）不符合篩選條件，但是根據(jù)2015 年版《中華人民共和國(guó)藥典》得知以上大多數(shù)成分屬于各中藥的指標(biāo)性成分，且阿魏酸和藁本內(nèi)酯為當(dāng)歸與川芎所共有，亞油酸為當(dāng)歸、川芎、桃仁和紅花所共有，結(jié)合文獻(xiàn)搜索也發(fā)現(xiàn)這些成分對(duì)于高脂血癥有相關(guān)治療作用[13-14]，故將這6 個(gè)成分補(bǔ)充到成分篩選中，因此共得107 個(gè)潛在活性成分。通過(guò)查找文獻(xiàn)補(bǔ)充疾病相關(guān)化合物的方法參考了劉楠等[15]的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法。通過(guò)常規(guī)方法再加上手動(dòng)查找2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》以及文獻(xiàn)，能更加全面的反應(yīng)補(bǔ)陽(yáng)還五湯化學(xué)成分防治高脂血癥的機(jī)制。

將以上獲得的107個(gè)潛在成分導(dǎo)入STICH 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，去除無(wú)靶點(diǎn)者共獲得801個(gè)靶點(diǎn)，其中黃芪 202 個(gè)，當(dāng)歸 85 個(gè)，赤芍 138 個(gè)，川芎 112 個(gè)，桃仁67 個(gè)，紅花 138 個(gè)，地龍 59 個(gè)，具體信息見(jiàn)表 1。將以上獲得的補(bǔ)陽(yáng)還五湯的潛在活性成分去掉重復(fù)成分后得到潛在活性成分共計(jì)100 個(gè)。有重復(fù)成分者如β-谷甾醇，阿魏酸，亞油酸等，將其按順序劃歸到最開(kāi)始出現(xiàn)的中藥上，如β-谷甾醇劃歸為黃芪。故最終刪除重復(fù)成分的靶點(diǎn)后共獲得487 個(gè)靶點(diǎn)，用于下一步研究。

2.2 疾病靶點(diǎn)獲取

將高脂血癥（Hypwelipidemia）為關(guān)鍵詞輸入到人類表型數(shù)據(jù)庫(kù)HPO 中，設(shè)置搜索條件為HPO brower，選擇相關(guān)基因（associated genes）條目，得到關(guān)于高脂血癥的疾病靶點(diǎn)95個(gè)，并將其與成分靶點(diǎn)合并以進(jìn)行下一步網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析。

2.3 靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將成分靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)合并導(dǎo)入至STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)中，其中settings 項(xiàng)目下的minimum required interaction score 選擇 highest confidence(0.900)，得到成分靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)的拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)關(guān)系，再利用Cytoscape 3.6.1 軟件建立可視化網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋱D，得到圖1A，然后根據(jù)“degree”“closeness”和“betweenness”條件篩選得到圖1B（圖中黃色部分為符合條件者），將符合條件的靶點(diǎn)篩選出得到圖1C。圖1 是篩選補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療高脂血癥核心靶點(diǎn)的整個(gè)過(guò)程。

表1 “中藥-成分-靶點(diǎn)”基本信息

結(jié)果顯示，核心靶點(diǎn)113個(gè)，其中治療高脂血癥的直接靶點(diǎn)19 個(gè)，潛在靶點(diǎn)94 個(gè)，篩選出的這些靶點(diǎn)組成補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療高脂血癥的潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，將核心靶點(diǎn)整理得到圖2。如圖所示，節(jié)點(diǎn)的大小代表degree值的大小，degree值越大，說(shuō)明這個(gè)節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的作用越大。113個(gè)核心靶點(diǎn)中degree排序前20的靶點(diǎn)分別是CREB 結(jié)合蛋白（CREBBP）、細(xì)胞腫瘤抗原p53（TP53）、維甲酸受體RXR-alpha（RXRA）、絲裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）、轉(zhuǎn)錄因子 AP-1（JUN）、轉(zhuǎn)錄因 子 p65（RELA）、腫瘤壞死因子-α（TNF）、絲裂原活化蛋白激酶3（MAPK3）、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（AKT1）、RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄亞基1 的介體（MED1）、白介素-6（IL6）、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α（PPARA）、白介素8（CXCL8）、載脂蛋白AI（APOA1）、核因子NF-κB p105亞基（NFKB1）、原癌基因酪氨酸蛋白激酶SRC（SRC）、肝型脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP1）、載脂蛋白B（APOB）、胰島素（INS）。見(jiàn)表2。

圖1 網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?/p>

圖2 補(bǔ)陽(yáng)還五湯靶點(diǎn)-疾病靶點(diǎn)相互作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

表2 degree值排名前20靶點(diǎn)

2.4 補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療高脂血癥的通路篩選

利用DAVID 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)以上篩選出的113 個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 通路富集，共獲得126 條通路，其中P＜0.05 的前 20 條通路通過(guò) R 語(yǔ)言（R3.6.1，繪圖包ggplot2）進(jìn)行可視化處理，見(jiàn)圖3。其中氣泡面積大小代表基因數(shù)量，氣泡顏色代表P值的大小，即富集顯著性。篩選出的這20 條通路中與疾病相關(guān)通路有11條，分別是乙肝，癌癥通路，胰腺癌，癌癥中的蛋白多糖，前列腺癌，弓形體病，膀胱癌，丙肝，非小細(xì)胞肺癌，小細(xì)胞肺癌，恰加斯??；另外9 條通路與代謝、炎癥、缺氧及其他方面相關(guān)，分別是HIF-1 信號(hào)通路，TNF 信號(hào)通路，脂肪細(xì)胞因子信號(hào)通路，PI3K-Akt 信號(hào)通路，F(xiàn)oxO 信號(hào)通路，甲狀腺激素信號(hào)通路，反轉(zhuǎn)錄內(nèi)源性大麻素信號(hào)，催乳素信號(hào)通路，γ-氨基丁酸能突觸。

2.5 補(bǔ)陽(yáng)還五湯防治高脂血癥的“中藥-成分-靶點(diǎn)-通路”的多層次網(wǎng)絡(luò)關(guān)聯(lián)圖

整合以上綜合數(shù)據(jù)，利用Cytoscape 3.6.1 軟件進(jìn)一步構(gòu)建“補(bǔ)陽(yáng)還五湯-化學(xué)成分-核心靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路”的多層次網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖4。本研究結(jié)果顯示，補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療高脂血癥的作用主要與22 個(gè)化學(xué)成分以及作用于20 條主要作用通路的113 個(gè)核心靶點(diǎn)相關(guān)聯(lián)，這是該方發(fā)揮治療高脂血癥藥效的核心所在，也體現(xiàn)了多成分與多靶點(diǎn)之間共同作用的機(jī)制，符合中藥復(fù)方作用的特點(diǎn)。

圖3 補(bǔ)陽(yáng)還五湯核心靶點(diǎn)參與的通路信息

3 分析與展望

3.1 補(bǔ)陽(yáng)還五湯成分分析

通過(guò)“補(bǔ)陽(yáng)還五湯-化學(xué)成分-核心靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路”的多層次網(wǎng)絡(luò)關(guān)聯(lián)圖可知，補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療高脂血癥的有效成分有22個(gè)，其中有較多作用靶點(diǎn)的成分主要有亞油酸（24）、黃芩素（22）、槲皮素（21）和山奈酚（17）。Bruen等[16]研究證明，亞油酸可抗動(dòng)脈粥樣硬化，主要通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)、抑制泡沫細(xì)胞形成和調(diào)節(jié)循環(huán)膽固醇來(lái)發(fā)揮作用。黃芩素主要發(fā)揮抗氧化和抗炎活性，清除活性氧，并通過(guò)減弱NF-κB 的活性抑制多種炎性細(xì)胞因子和趨化因子，可用于治療糖尿病，心血管疾病，炎性腸病等[17]。山奈酚和槲皮素有降糖降脂、抗炎、抗氧化、抗癌等作用[18]，山奈酚可以通過(guò)增加肝臟 PPARα 水平，下調(diào) SREBPs 并促進(jìn) ACO 和CYP4A1 的肝表達(dá)來(lái)增加脂質(zhì)代謝，從而減少高脂飲食喂養(yǎng)的肥胖大鼠內(nèi)臟脂肪的積累并改善高脂血癥[19]。槲皮素通過(guò)上調(diào)相關(guān)蛋白的表達(dá)水平（例如ABCA1 和ABCG1）以及通過(guò)減少氧化來(lái)提高HDL 和APOA1的膽固醇接受能力來(lái)改善膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)，從而減少脂質(zhì)積累[20]。上述研究表明，大多數(shù)主要成分都有抗炎，抗氧化，降糖降脂的作用，說(shuō)明補(bǔ)陽(yáng)還五湯是多種中藥協(xié)同作用，共奏益氣活血化瘀之功效，協(xié)同起效治療高脂血癥。

圖4 “補(bǔ)陽(yáng)還五湯-化學(xué)成分-核心靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路”多層次網(wǎng)絡(luò)圖

3.2 關(guān)鍵靶點(diǎn)分析

關(guān)鍵靶點(diǎn)的分析主要針對(duì)以上篩選出來(lái)degree值排名前20的靶點(diǎn)。通過(guò)分析，可以發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵靶點(diǎn)主要涉及轉(zhuǎn)錄因子，脂質(zhì)代謝相關(guān)因子和炎癥因子等。其中CREBBP和TP53是degree值最大的兩個(gè)靶點(diǎn)。

CREBBP，亦稱為CBP，是一種乙酰基轉(zhuǎn)移酶，由于在其與p300之間觀察到很高的序列同源性，所以現(xiàn)在將這兩種蛋白統(tǒng)稱為p300/CBP[21]。甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子1（SREBP1C）是一種重要的脂肪生成活化劑，研究發(fā)現(xiàn)，在高葡萄糖和胰島素條件下，SREBP1C 在細(xì)胞和小鼠肝臟中均被p300/CBP 乙?；D(zhuǎn)移酶乙酰化，從而提高了其穩(wěn)定性，并向其脂肪形成靶基因啟動(dòng)子募集[22]。碳水化合物反應(yīng)性元素結(jié)合蛋白（ChREBP）也被認(rèn)為是脂肪生成的主要調(diào)節(jié)劑，與SREBP1C 協(xié)同作用以激活脂肪酸合成，研究發(fā)現(xiàn)p300/CBP 將 ChREBP 在 Lys-672 處乙?；?，從而通過(guò)增加其在培養(yǎng)的小鼠肝細(xì)胞中靶基因啟動(dòng)子的募集來(lái)增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性[23]。因此，p300/CBP 可能通過(guò)SCREBP1C 和ChREBP 的乙?；饔脕?lái)調(diào)節(jié)脂質(zhì)的合成，所以p300/CBP可作為高脂血癥的脂肪代謝途徑的重要防治因子。

TP53 是一種抑癌基因，也稱P53，可參與脂質(zhì)代謝，葡萄糖代謝，核苷酸代謝等多種代謝途徑[24]。Vig等[25]研究表明p53 直接結(jié)合于SREBP-1 的啟動(dòng)子區(qū)域，并在轉(zhuǎn)錄上抑制SREBP-1 的表達(dá)，從而抑制脂肪酸的合成。p53 轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)磷脂酰磷脂酶Lipin1，肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶CPT1C 和丙二酰輔酶A 脫羧酶（MCD），從而促進(jìn)脂肪酸氧化并阻止脂質(zhì)在細(xì)胞中的蓄積[26-28]。

另外，PPARA 也是重要潛在靶點(diǎn)之一，與脂質(zhì)代謝密切相關(guān)。PPARα 可調(diào)節(jié)體內(nèi)葡萄糖和脂質(zhì)代謝的平衡，在2型糖尿病中有重要作用[29]，PPARα 對(duì)脂肪酸的代謝有一定調(diào)節(jié)作用，主要通過(guò)調(diào)節(jié)過(guò)氧化物酶、脂肪酸運(yùn)輸和線粒體脂肪酸β 氧化代謝基因轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，但是此作用必須通過(guò)PPARα 激動(dòng)劑激活[30]。PPARα 的激動(dòng)劑有很多，其中包括貝特類藥物，通過(guò)激活脂質(zhì)分解代謝，貝特類藥物持續(xù)降低患者的血漿甘油三酯，還能通過(guò)載脂蛋白A-I 和載脂蛋白A-II 提高人類血漿HDL，可用于治療血脂異常[31]。Tordjman K等[32]研究發(fā)現(xiàn)PPARα對(duì)高脂血癥的并發(fā)癥動(dòng)脈粥樣硬化也有有益作用，PPAR-α 缺乏會(huì)改善ApoE 基因敲除小鼠的胰島素抵抗，并減少動(dòng)脈粥樣硬化病變區(qū)域。常庚等[33]研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)陽(yáng)還五湯可明顯升高2 型糖尿病大鼠模型PPARα/γ mRNA 表達(dá)以及降低糖代謝參數(shù)水平及血脂水平，提示補(bǔ)陽(yáng)還五湯可能通過(guò)調(diào)節(jié)PPARα/γ mRNA 的表達(dá)以達(dá)到改善胰島素抵抗和降血脂的作用。

以上研究說(shuō)明，靶點(diǎn) CREBBP、TP53 和 PPARA 有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，糖代謝等作用，對(duì)于高脂血癥的防治有重要意義，同時(shí)，對(duì)其并發(fā)癥動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病也有一定的作用。

3.3 通路結(jié)果分析

目前，有研究認(rèn)為，高脂血癥主要涉及脂質(zhì)代謝紊亂和炎癥，與胰島素抵抗密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，KEGG 富集通路中，脂肪細(xì)胞因子信號(hào)通路與肥胖、胰島素抵抗、高血壓和血脂異常等疾病密切相關(guān)，脂肪細(xì)胞因子包括脂類（瘦素、抵抗素、脂聯(lián)素和內(nèi)脂素）和經(jīng)典細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6 等），通過(guò)調(diào)節(jié)血管功能、免疫和脂肪細(xì)胞代謝成為代謝綜合征發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵參與者[34]。多數(shù)研究證明，補(bǔ)陽(yáng)還五湯可降低TNF，IL-6 等相關(guān)因子的表達(dá)[35-36]。高脂血癥的發(fā)生，發(fā)展以及并發(fā)癥常伴有炎癥[37]和內(nèi)皮功能障礙[38]，炎癥組織的特征在于低氧狀況和免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，TNF 信號(hào)通路和HIF-1 信號(hào)通路主要涉及炎癥反應(yīng)和缺氧[39]。Mylonis 等[40]研究發(fā)現(xiàn)，在缺氧條件下，HIF 對(duì)維持細(xì)胞代謝平衡起重要作用，因?yàn)镠IF可以上調(diào)糖酵解通路以及降低線粒體功能，同時(shí)缺氧也可以增強(qiáng)脂肪生成，主要是因?yàn)樯婕爸舅幔‵A）攝取，合成和儲(chǔ)存的基因由HIF 依賴性誘導(dǎo)，所以HIF 參與糖代謝與脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)。其他重要通路還包括PI3K-Akt 信號(hào)通路和FoxO 信號(hào)通路，二者功能密不可分，其中PI3K-Akt 信號(hào)通路作用廣泛，可調(diào)節(jié)葡萄糖穩(wěn)態(tài)，脂質(zhì)代謝，蛋白質(zhì)合成等[41]，F(xiàn)oxO 信號(hào)通路中FoxO 亞家族介導(dǎo)胰島素或類胰島素生長(zhǎng)因子對(duì)涉及細(xì)胞代謝，生長(zhǎng)，分化，氧化應(yīng)激，衰老，自噬和衰老的關(guān)鍵功能起到抑制作用[42]，F(xiàn)oxO1 可被PI3K-Akt 磷酸化所調(diào)節(jié)，所以PI3K/Akt 可通過(guò)FoxO1和GSK-3 調(diào)節(jié)葡萄糖代謝，通過(guò)mTORC1 和SREBP調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝[43]。上述研究表明，PI3K/Akt 與FoxO信號(hào)通路協(xié)同作用于糖脂代謝。Dae Hyun Kim 等[44]研究表明在高齡大鼠中，F(xiàn)oxO1 活性降低會(huì)導(dǎo)致高脂血癥和 PPARγ 升高，F(xiàn)oxO1 與 PPARγ 的相互作用可促進(jìn)肝脂肪變性，這是由于高血糖誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，從而導(dǎo)致Akt 信號(hào)傳導(dǎo)受損，例如與衰老相關(guān)的糖尿病。此外，有研究表明，p300/CBP 組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性的抑制作用顯著降低了空腹小鼠肝臟中FoxO1 的mRNA 和蛋白水平以及空腹血糖水平[45]。通過(guò)以上預(yù)測(cè)通路發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療高脂血癥主要集中于脂質(zhì)代謝、缺氧與炎癥通路，這對(duì)以后的研究是一個(gè)提示。

3.4 展望

本研究表明補(bǔ)陽(yáng)還五湯可能通過(guò)作用于CREBBP、TP53、PPARA、TNF、IL6 等多個(gè)靶點(diǎn)，調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞因子、TNF、HIF-1、PI3K-Akt 和 FoxO 等信號(hào)通路，通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，炎癥反應(yīng)，缺氧，改善胰島素抵抗等機(jī)制治療高脂血癥。另外，補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療高脂血癥與高血糖密切相關(guān)，高血糖與高血脂緊密相關(guān)，其發(fā)病機(jī)制分別涉及糖代謝與脂質(zhì)代謝，糖脂代謝互相關(guān)聯(lián)且補(bǔ)陽(yáng)還五湯可能同時(shí)作用于兩者發(fā)揮降糖降脂的作用，本研究提示補(bǔ)陽(yáng)還五湯可能調(diào)節(jié)代謝用于高脂血癥或高脂血癥伴有高血糖的治療。該研究為深入探討補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)高脂血癥的作用機(jī)制提供了指導(dǎo)。由于本實(shí)驗(yàn)研究是基于生物信息學(xué)及大量數(shù)據(jù)庫(kù)的計(jì)算得出的結(jié)果，后續(xù)還需要進(jìn)一步的體內(nèi)外研究進(jìn)行驗(yàn)證。