鋅指蛋白36單核苷酸基因多態(tài)性與阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征合并高血壓患者遺傳易感性的相關(guān)性研究

韓旭，李雪佳，李飛

（1.沈陽醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院2015級康復(fù)治療學(xué)專業(yè)，沈陽 110032；，2.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科，遼寧 大連 116023；3.沈陽醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院2013級康復(fù)治療學(xué)專業(yè)，沈陽 110032；4.沈陽醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科，沈陽 110032）

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS）是一種病因不明確的睡眠呼吸疾病，睡眠時每小時至少15次呼吸暫停或呼吸不足［1］。由于呼吸暫停引起反復(fù)發(fā)作的夜間低氧和高碳酸血癥，體內(nèi)可出現(xiàn)氧化應(yīng)激［2］、促炎細胞因子釋放［3］、免疫功能障礙［4］，慢性交感神經(jīng)激活、內(nèi)皮功能失調(diào)、內(nèi)皮素水平升高及高凝狀態(tài)等［5］，最終可導(dǎo)致高血壓、冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ê喎Q冠心?。┖湍X血管病等并發(fā)癥，甚至出現(xiàn)夜間猝死。中國人群OSAHS合并高血壓的發(fā)生率為49.3%［6］。鋅指蛋白36（zinc finger protein 36，ZFP36）是一種對蛋白質(zhì)、RNA和DNA的識別具有重要調(diào)節(jié)作用的蛋白，參與炎癥反應(yīng)的相關(guān)進程，可能與OSAHS的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。本研究從Hap Map數(shù)據(jù)庫挑選3個ZFP36基因位點，檢測了OSAHS合并高血壓患者該位點的單核苷酸基因多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP），旨在探討OSAHS合并高血壓發(fā)生發(fā)展可能的遺傳機制。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2018年1月至3月于沈陽醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院住院并確診為OSAHS合并高血壓的患者160例，設(shè)為研究組。另外選取175例同期于我院進行健康體檢的健康志愿者，設(shè)為對照組。

所有高血壓患者均符合2010年《中國高血壓防治指南》的高血壓診斷標準，即收縮壓（systolic blood pressure，SBP）＞140 mmHg和（或）舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）＞90 mmHg。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準同意，所有患者簽署知情同意書且愿意配合。

排除標準：中樞性、混合型睡眠呼吸暫停綜合征；惡性腫瘤；其他繼發(fā)性高血壓、糖尿病、冠心病、慢性阻塞性肺疾病、風(fēng)濕免疫性疾病、凝血功能障礙性疾病、嚴重肝腎功能不全；睡眠不足4 h、檢測監(jiān)測過程中出現(xiàn)嚴重低氧血癥需要中途吸氧者；有精神障礙、嚴重抑郁癥病史者。

1.2 研究方法

記錄并分析2組的基線資料，主要包括身高、頸圍、腹圍、體質(zhì)量等，并同時檢測DBP和SBP。利用全自動生化分析儀檢測高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、總膽固醇（cholesterol total，TC）、血尿酸（blood uric acid，UA）、甘油三酯（glycerin trilaurate，TG）以及空腹血糖（fasting blood-glucose，F(xiàn)PG）。

監(jiān)測2組的夜間睡眠呼吸情況，監(jiān)測時間≥7 h，記錄呼吸紊亂指數(shù)（apnea hypopnea index，AHI）相關(guān)指標。

通過Hap Map數(shù)據(jù)庫篩選出3個ZFP36基因位點，即rs251846（-194A＞G）、rs3746083（1181C＞T）及rs17879933（2436-/T），這3個基因位點分別位于3’非翻譯區(qū)和外顯子中。采用TaqMan-PCR方法進行基因型的分型鑒定。根據(jù)基因的特定序列選擇基因分型測定引物和探針。3個位點的引物由應(yīng)用生物系統(tǒng)網(wǎng)站（http：//www.appliedbiosystems.com）提供。TaqMan-PCR的反應(yīng)體系為25 μL，包含PCR Master Mix 12.5 μL，Probe/Primer Mix 1.25 μL，DNA（20 mg/L ）2 μL，ddH2O 9.25 μL。反應(yīng)條件：95 ℃ 預(yù)變性10 min，90 ℃變性13 s，55 ℃復(fù)性50 s，70 ℃延伸70 s，40個循環(huán)后，70 ℃延伸5 min，4 ℃停止反應(yīng)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 2組基線資料的比較

如表1所示，2組年齡、性別、HDL-C、LDL-C、UA、TG、FPG比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05）。研究組腹圍、頸圍、SBP、DBP、TC高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。

2.2 2組ZFP36基因3個位點基因型及等位基因頻率分布比較

表1 2組的基線資料比較

對所有受試者ZFP36基因中的rs17879933、rs251864和rs3746083這3個SNP均成功地進行了基因分型，成功率＞99%，次要等位基因所有受試者的頻率均＞5%。

Hardy-Weinberg平衡檢驗結(jié)果顯示，ZFP36基因中的rs17879933、rs251864和rs3746083均處于遺傳的平衡狀態(tài)，有群體代表性。3個位點的基因型對比與分析結(jié)果詳見表2。

2.3 ZFP36的3個不同位點基因型與AHI相關(guān)指標比較

如表3所示，ZFP36基因中的rs17879933、rs251864和rs3746083不同基因型之間AHI相關(guān)指標差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.4 logistic多元回歸分析結(jié)果

如表4所示，將OSAHS設(shè)為因變量，將腹圍、頸圍、SBP、DBP、TC以 及rs17879933、rs251864和rs3746083不同基因型設(shè)定為自變量，予以回歸分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)3個位點的基因型與OSAHS無顯著相關(guān)性。

表2 ZFP36的3個基因位點基因型及等位基因頻率分布對比結(jié)果

表3 ZFP36的3個不同位點基因型與AHI相關(guān)指標的比較結(jié)果

表4 多元logistic回歸分析

3 討論

流行病學(xué)研究［7］表明，30%以上的高血壓與OSAHS相關(guān)，50%～60%的OSAHS患者伴有高血壓。由于OSHAS與高血壓的共存增加了器官損傷的嚴重程度，且具有遺傳風(fēng)險。蔣倩倩等［8］的研究表明，OSAHS是高血壓患者早期腎功能損害的危險因素。SISIRA等［9］則認為OSAHS合并高血壓孕婦的胎兒生長與發(fā)育會受到影響。因此，了解并掌握OSAHS合并高血壓的遺傳學(xué)機制，對OSAHS合并高血壓的診治極為重要。

ZFP36是最具代表性的腺苷酸之一［10］，是一類富含尿苷酸元素的結(jié)合蛋白，具有調(diào)節(jié)炎性細胞因子，如腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-6等表達的作用［11］。最近的研究［12］表明，ZFP36是代謝并發(fā)癥與肥胖的早期預(yù)警篩選基因。本研究采用對照研究評估了ZFP36基因多態(tài)性與OSAHS合并高血壓之間的關(guān)系，并探討了及ZFP36基因多態(tài)性是否與睡眠呼吸暫停參數(shù)相關(guān)。結(jié)果表明，研究組的年齡、性別、HDL、LDL、UA、TG與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異，腹圍、頸圍、SBP、DBP、TC與對照組比較則具有統(tǒng)計學(xué)差異，與DUBEY等［13］的研究結(jié)果一致。2組在ZFP36的3個位點的等位基因的頻率分布和基因型無明顯差異；3個位點的不同基因型在呼吸睡眠相關(guān)因素中無明顯差異，提示ZFP36的基因多態(tài)性并不會直接影響OSAHS，ZFP36可能是通過其他途徑對OSAHS產(chǎn)生影響［14］。logistic 回歸分析結(jié)果顯示，ZFP36的3個位點基因多態(tài)性與OSAHS之間無直接聯(lián)系，說明ZFP36基因這3個位點的突變不是引發(fā)OSAHS的獨立危險因素。OSAHS本身是一種復(fù)雜的綜合征，ZFP36基因多態(tài)性可能只是參與OSAHS發(fā)生機制中的一部分，進一步探索ZFP36基因多態(tài)性在OSAHS發(fā)生發(fā)展中的作用仍需進行更大規(guī)模的深入研究。