塊菌多糖改善運(yùn)動疲勞的作用原理

范 勇

（鄭州西亞斯學(xué)院體育學(xué)院學(xué)校體育研究中心，河南 鄭州 451100）

塊菌（Tuber）是一種生長在地下土壤中的真菌，可食用菌塊菌主要包括黑孢塊菌、白塊菌和夏塊菌等3類，目前多采用半人工栽培技術(shù)。我們熟知的松露就是一種野生的塊菌，具有獨(dú)特的香味和口感，是一種珍稀美食。塊菌還具有滋陰補(bǔ)腎、降血糖、抗腫瘤等功效，是一種藥食兼用大型真菌[1]。

塊菌中含有的多糖類物質(zhì)對增強(qiáng)人體免疫力、抗衰老和運(yùn)動健康有很好的效果，對人休運(yùn)動疲勞也有很好的緩解和恢復(fù)作用[2]。多糖還具有一定的抗細(xì)菌、抗病毒和抗凝聚的作用，提高肝功能和解毒力，提高動物耐缺氧能力和氧的利用率，降低血液的粘稠度，增加心肌收縮力，改善心律，降血糖、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、平喘、止咳、化痰的功效。因此，常被用于運(yùn)動員訓(xùn)練后的恢復(fù)和保健[3]。但對于運(yùn)動員來說，食品安全與運(yùn)動員的身體健康和比賽成績密切相關(guān)，運(yùn)動員食用來源不明的不安全食品，很可能會對其職業(yè)運(yùn)動生涯產(chǎn)生極大影響。塊菌多糖雖然在運(yùn)動恢復(fù)和提升免疫力方面有一定功效，但其作用機(jī)理還不成熟，塊菌多糖的組成成份比較復(fù)雜，對人體健康的安全性和穩(wěn)定性還需要進(jìn)一步的研究。

1 材料與設(shè)備

1.1 主要試劑藥品

塊菌粉（含量為30%） 為國產(chǎn)夏塊菌提取物，西安澤朗生物科技有限公司；無水乙醇、丙酮、葡萄糖、冰醋酸、鹽酸均為分析純，西安化學(xué)試劑廠；三氯化鐵、亞硫酸鈉均為分析純，天津市天河化學(xué)試劑廠；蒽酮-硫酸試劑、堿性酒石酸銅試劑、三吡啶三吖嗪（tripyridyhriazine，TP11Z），Sigma公司。

1.2 主要試驗(yàn)儀器設(shè)備

臺式離心機(jī)、DT-1000電子天平，常熟市金羊天平儀器廠；8002型科偉電熱恒溫水浴鍋，北京化玻聯(lián)醫(yī)療器械有限公司；756PC紫外可見分光光度計(jì)，上海天普分析儀器有限公司；恒溫箱，蘇州耐氏干燥設(shè)備有限公司。

2 塊菌多糖樣品制備

塊菌粉中除多糖外，還含有大量的蛋白質(zhì)、粗脂肪、微量元素，需要進(jìn)一步對多糖進(jìn)行提純分離。取塊菌粉按加入等比例蒸餾水混合均勻，采用水提法提純獲取多糖。取濾液加三氯乙酸靜置24 h，離心機(jī)處理后進(jìn)行蒸發(fā)濃縮。濃縮液冷卻后加95%乙醇，放入恒溫箱（4±1）℃條件下，靜置24 h后過濾取沉淀即可得到塊菌多糖。加水溶解后用活性炭在恒溫箱（80±2）℃條件下脫色約2 h，過濾蒸發(fā)濃縮，再次加入95%乙醇靜置、離心、沉淀，然后用無水乙醇、丙酮反復(fù)洗滌，放恒溫箱（60±2）℃條件下干燥，得到塊菌多糖干品，將塊菌多糖干品按1∶1的比例加蒸餾水均勻混合成塊菌多糖樣品備用。將葡萄糖粉末干燥后，按1∶1的比例加蒸餾水均勻混合即可得葡萄糖溶液樣品。

3 塊菌多糖的定性鑒別試驗(yàn)

對制備的塊菌樣品溶液有效成份塊菌多糖進(jìn)行定性鑒定，主要采用蒽酮-硫酸反應(yīng)試驗(yàn)和Fehling試驗(yàn)[4]。

3.1 蒽酮-硫酸反應(yīng)

塊菌多糖樣品1 mL，加入1 mL的蒽酮-硫酸試劑，觀察反應(yīng)液變化，確定是否含有多糖。

3.2 Fehling試驗(yàn)

取塊菌多糖樣品1 mL，加鹽酸調(diào)整pH至3左右，放入恒溫箱在（105±2）℃條件加熱20 min充分水解反應(yīng)，自然冷卻30 min后調(diào)整pH至7左右，加1 mL堿性酒石酸銅試劑，觀察反應(yīng)液變化，確定是否含有還原糖。

塊菌多糖樣品溶液的定性鑒定結(jié)果如表1所示。

表1 塊菌多糖鑒定結(jié)果Tab.1 Identification results of Tuber polysaccharide

由表1可知，觀察蒽酮-硫酸反應(yīng)結(jié)果發(fā)現(xiàn)氧化亞銅紅色沉淀明顯增多，反應(yīng)呈陽性，證明塊菌樣品溶液中含有多糖類化合物；Fehling試驗(yàn)反應(yīng)溶液為藍(lán)色透明狀，反應(yīng)結(jié)果也呈陽性，表明樣品溶液中可能含有還原糖類化合物。

4 還原劑（Na2SO3）對塊菌多糖穩(wěn)定性的影響

塊菌的還原能力與抗氧化活性之間有顯著的相關(guān)性，因此，對塊菌多糖樣品進(jìn)行多糖的還原劑（Na2SO3）穩(wěn)定性試驗(yàn)。按1∶1比例配制塊菌多糖溶液100 mL，分成5份，加入Na2SO3配制混合溶液5份各20 mL，5份混合溶液的Na2SO3含量分別為0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%，靜置12 h，在510 nm處用紫外可見分光光度計(jì)測量吸光度，試驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。

由圖1可知，塊菌多糖溶液顯色后，吸光度數(shù)值與氧化劑濃度成反比，濃度越高吸光度越低。說明塊菌多糖不易被還原，具有很好的抗還原性和抗氧化性。

5 抗氧化活性試驗(yàn)

機(jī)體的抗氧化活性（antioxidant activity）是指抗氧化能力的大小。主要通過對塊菌的體外抗氧化能力進(jìn)行測定，采用總抗氧化活性測定方法進(jìn)行試驗(yàn)評價(jià)塊菌多糖的抗氧化能力。

5.1 總抗氧化活性測定

總抗氧化活性測定的測定原理為，根據(jù)鐵離子還原法（ferric reducing/antioxidant power assay，F(xiàn)RAP）的基本原理，多糖樣品中的還原物質(zhì)可將三價(jià)鐵-三吡啶吖嗪（tripyridy-triazine，TPTZ） 還原為二價(jià)鐵離子，使溶液呈現(xiàn)藍(lán)色，用光度儀測量會在590 nm處有最大吸光度，通過吸光度的數(shù)值來評價(jià)塊菌樣品中多糖的抗氧化能力的大小，該方法操作簡便易于標(biāo)準(zhǔn)化。根據(jù)這一原理，分別配制20%、40%、60%、80%濃度的塊菌多糖樣品溶液100 uL，分別依次加入50 mL的0.3 mol·L-1醋酸鹽緩沖液，5 mL 的 20 mmol·L-1氯化鐵和 10 mmol·L-1的 TPTZ 溶液5 mL，混合搖勻后放入水浴鍋，在（35±2）℃下水浴15 min充分反應(yīng)，取出后在590 nm處分別測量吸光度的數(shù)值。

5.2 總抗氧化活性的測定結(jié)果

試驗(yàn)中5組溶液的顏色均由黃色變?yōu)樗{(lán)綠色，顯示了正常的還原反應(yīng)現(xiàn)象。測定還原力的體系中，樣品中的還原性物質(zhì)將Fe3+還原成Fe2+，在593 nm處有一強(qiáng)吸收?？寡趸瘎┠芙o出電子使Fe3+還原，會有吸光度數(shù)值的變化，以此來對抗氧化能力的強(qiáng)弱進(jìn)行評價(jià)，即吸光值越大，還原力越強(qiáng)，抗氧化活性也就越高。對不同濃度的塊菌多糖樣品溶液進(jìn)行總抗氧化性測定，試驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。

由圖2可知，不同濃度的塊菌多糖樣品溶液對三價(jià)鐵離子的還原能力存在一定的差異。隨著多糖濃度的增加，樣品溶液的還原力變強(qiáng)，即多糖樣品溶液的抗氧化能力越強(qiáng)。說明多糖對抗氧化能力的提高有明顯的效果。

6 結(jié)論

隨著人們對健康越來越多的關(guān)注，人們對抗衰老、抗疲勞類的保健食品需求日益增多，而塊菌正是一種藥食兼用的天然“抗衰老、抗氧化”保健品。通過介紹塊菌多糖的進(jìn)一步提純制備方法，并對塊菌多糖進(jìn)行了定性鑒別試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明塊菌中含有種多糖類、還原糖類化合物。在此基礎(chǔ)上，對塊菌中含有的多糖類物質(zhì)進(jìn)行了休外抗氧化試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明塊菌多糖具有很好的抗還原性和抗氧化性，能夠顯著提高機(jī)體的抗氧化能力。