蝴蝶蘭組織培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)探討

摘要：蝴蝶蘭大多是通過組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖培育的。組培苗能夠保持母本性狀，減少組培苗變異和具有植株整齊等特點(diǎn)。通過對蝴蝶蘭組織培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)中外植體選擇、培養(yǎng)基成分以及培養(yǎng)條件等進(jìn)行探討，以期提高蝴蝶蘭組培苗的生產(chǎn)效益。

關(guān)鍵詞：褐變;蝴蝶蘭;外植體;組織培養(yǎng)

蝴蝶蘭屬于蘭科蝴蝶蘭屬，其花的形態(tài)和結(jié)構(gòu)近似蛾蝶，故命名為蝴蝶蘭。迄今發(fā)現(xiàn)原生種70多個，大多數(shù)分布在潮濕的亞洲地區(qū)，原產(chǎn)于中國的有4種。蝴蝶蘭為附生蘭，喜歡溫暖、遮蔭且濕度大的環(huán)境，其氣生根可吸取空氣中的水分和樹中的腐殖質(zhì)。蝴蝶蘭的繁殖方法有2種：一種是有性繁殖。但其種子非常細(xì)小，且在自然條件下極難萌發(fā)。另一種是無性繁殖，即組織培養(yǎng)技術(shù)。目前，花卉市場上的蝴蝶蘭大多是通過組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖培育的。我們不僅需要采用合理有效的、簡化的以及低成本的技術(shù)措施，還需要保證蝴蝶蘭組培苗保持母本性狀、減少變異和植株整齊等，達(dá)到工廠化育苗和規(guī)?；a(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，提高生產(chǎn)效益。

1 外植體選擇

蝴蝶蘭外植體材料的選擇非常重要，不同器官之間分化能力差異很大。合適的外植體不僅能減少變異率，還能縮短誘導(dǎo)時間。目前，蝴蝶蘭的外植體選擇主要有葉片、莖尖、莖段、花梗以及根部等。蝴蝶蘭組織培養(yǎng)苗可通過外植體誘導(dǎo)原球莖獲得，也可以通過誘導(dǎo)叢生芽獲得。原球莖誘導(dǎo)途徑增殖系數(shù)較高、數(shù)量大，但是變異率高，且誘導(dǎo)時間長。叢生芽誘導(dǎo)途徑技術(shù)難度較低，且保持遺傳穩(wěn)定性，縮短周期。因此，叢生芽誘導(dǎo)途徑更適用于工廠化生產(chǎn)。

花梗培養(yǎng)的整個過程對母本的生長和花芽分化并不會造成影響?；üＥ囵B(yǎng)操作簡便，且能使難以誘導(dǎo)原球莖的蝴蝶蘭品種均能依靠此方法進(jìn)行培育，而且使用帶腋芽的花梗節(jié)段為外植體材料易獲得較多的不定芽。此外，花梗誘導(dǎo)原球莖的效率高于其他外植體材料?？梢?，花梗是蝴蝶蘭組培快繁的最佳外植體。

2 培養(yǎng)基成分

蝴蝶蘭品種、外植體材料和組織培養(yǎng)階段對培養(yǎng)基的要求均有不同。合適的培養(yǎng)基會提高外植體誘導(dǎo)率，降低褐變率以及玻璃化率等。一般以低無機(jī)鹽濃度的MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，如6-BA、NAA、2，4-D、KT以及有機(jī)添加物椰子汁等。培養(yǎng)基成分中，植物激素添加的種類和濃度起到了至關(guān)重要的作用。在蝴蝶蘭的工廠化生產(chǎn)中，植物激素6-BA、NAA濃度決定了原球莖發(fā)生的誘導(dǎo)速度，而椰子汁、香蕉泥和土豆泥等對蝴蝶蘭組培苗一致性有顯著的影響。

生根壯苗培養(yǎng)是提高植株成活率的一項(xiàng)重要內(nèi)容，壯苗生根階段為試管苗的移栽和成活奠定基礎(chǔ)，直接影響到工廠化生產(chǎn)的種苗質(zhì)量。在組培苗壯苗生根階段，通常提高培養(yǎng)基的生長素濃度，下調(diào)細(xì)胞分裂素濃度，從而促進(jìn)植物發(fā)根。此外，培養(yǎng)基中添加了椰子汁、香蕉汁、蘋果汁等天然添加物，對蝴蝶蘭組培苗的生根壯苗有明顯的促進(jìn)作用，移栽成活率也較高。

3 培養(yǎng)條件

在花梗誘導(dǎo)叢生芽過程中，適宜的溫度十分重要。較低溫度有利于腋芽轉(zhuǎn)化為花芽，而較高溫度則有利于腋芽轉(zhuǎn)化為營養(yǎng)芽。此外，光照強(qiáng)度對蝴蝶蘭試管苗的生長也有較大影響，但光照強(qiáng)度合適范圍還需要進(jìn)一步的探究。蝴蝶蘭幼苗對溫度的要求比較高。溫度過低，蝴蝶蘭根部會停止吸收水分，從而造成生理干旱，進(jìn)而葉片變黃、脫落，甚至死亡。光照過強(qiáng)會灼傷葉片，使葉片老化，甚至枯死。夏季在中午前后要做好遮蔭處理。

4 植物組織培養(yǎng)褐變

在蝴蝶蘭組織培養(yǎng)過程中，材料非常容易出現(xiàn)褐變的情況。尤其是切取莖尖進(jìn)行脫除病毒的步驟，由于莖尖太小，更容易因褐化而導(dǎo)致死亡。因此蝴蝶蘭組織培養(yǎng)過程需要重視褐化問題。褐變是因植物組織多酚氧化酶與其酚類底物結(jié)合，在氧的作用下，二者發(fā)生化學(xué)反應(yīng)形成醒類物質(zhì)。酉昆類物質(zhì)是褐色物質(zhì)，當(dāng)該類物質(zhì)擴(kuò)散到培養(yǎng)基時，會對植物材料造成毒害，進(jìn)而影響植物體內(nèi)酶的活性，阻礙植物正常代謝，嚴(yán)重時甚至導(dǎo)致材料死亡。

目前，常用的褐化抑制劑分為2大類：一類是吸附劑，另一類是抗氧化劑。吸附劑主要包括活性炭、檸檬酸等;抗氧化劑主要有維生素、谷胱甘肽等?；钚蕴渴且环N吸附性極強(qiáng)的吸附劑，可以有效抑制蝴蝶蘭褐化。但是，培養(yǎng)基中添加活性炭不利于蝴蝶蘭組培苗生根，也不利于叢生芽的誘導(dǎo)。谷胱甘肽和檸檬酸抑制褐化的效果一般，但二者對植物生根以及叢生芽誘導(dǎo)影響較小。除添加抑制劑以外，按時更換培養(yǎng)基和及時切除材料的褐化部位，也能有效地抑制褐化情況發(fā)生。

5 病毒感染

感病蘭花植物大多是由建蘭花葉病毒和齒蘭環(huán)斑病毒侵染而成，它們具有侵染性強(qiáng)、復(fù)合感染、潛伏期長以及危害嚴(yán)重等特點(diǎn)。建蘭花葉病毒和齒蘭環(huán)斑病毒會嚴(yán)重?fù)p傷蝴蝶蘭葉片，進(jìn)而導(dǎo)致植株生長不良，影響花朵的質(zhì)量。病毒侵染嚴(yán)重影響了蝴蝶蘭的觀賞性，給企業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。建蘭花葉病毒和齒蘭環(huán)斑病毒的侵染主要是由操作不規(guī)范引起的，例如接觸過染病植株的剪刀、手套等器具又接觸到健康植株或健康材料時，會造成交叉感染。因此，選取健康的蝴蝶蘭植株外植體，以及及時對操作儀器和器具進(jìn)行消毒十分重要。

6 結(jié)語

蝴蝶蘭組織培養(yǎng)對外植體的選擇、操作過程以及培養(yǎng)條件等均有較高的要求，否則蝴蝶蘭組培過程中極易出現(xiàn)褐化問題和病毒感染問題。因此，蝴蝶蘭組培苗的生產(chǎn)需要規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化的工廠化育苗。通過高投入高產(chǎn)出的經(jīng)營模式，培育出高品質(zhì)的優(yōu)良幼苗，進(jìn)而取得規(guī)模經(jīng)濟(jì)的效果，取得良好的經(jīng)濟(jì)效益。

（收稿：2019-07-26）

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基金項(xiàng)目：楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2030226）。

作者簡介：張雯（1989-），女，漢族，陜西西安人，講師，博士研究生，研究方向：園藝技術(shù)。