基于TMT標(biāo)記定量蛋白組學(xué)分析SATB1過(guò)表達(dá)前后鼻咽癌細(xì)胞中差異蛋白質(zhì)及信號(hào)富集*

李汝佳， 袁建玲， 賈亞楠， 邵鐘銘， 封慕茵， 伍彩霞， 鄒 園， 揭 偉， 申志華△

(廣東醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 1病理學(xué)系， 2病理生理教研室， 廣東 湛江 524023)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)起源于鼻咽黏膜上皮細(xì)胞，是東南亞和我國(guó)南方常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，華南五省(特別是廣東省)是我國(guó)的高發(fā)地區(qū)。最新全球腫瘤權(quán)威統(tǒng)計(jì)報(bào)告顯示，2018年全球新增NPC患者129 079例[1]。由于NPC發(fā)病隱匿，早期癥狀不明顯，大部分患者在確診時(shí)已發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，已處于臨床中晚期[2],因此，尋找合適的生物標(biāo)志物對(duì)提高NPC的早期診斷、評(píng)價(jià)治療效果與分析預(yù)后具有極其重要的意義。近來(lái)，基于宏觀角度的蛋白組學(xué)和基因組學(xué)等組學(xué)研究可能為此提供潛在的方案。

富含AT序列的特異性核基質(zhì)區(qū)結(jié)合蛋白1(special AT-rich sequerce binding protein 1, SATB1)是一種全局基因表達(dá)調(diào)節(jié)因子[3]，能夠介導(dǎo)表觀遺傳修飾而影響多種基因的表達(dá)，在免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡和腫瘤轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮著重要作用[3-6]。近來(lái)的研究表明，SATB1在多種人類惡性腫瘤組織中高表達(dá)。在NPC方面，包括我們?cè)趦?nèi)的國(guó)內(nèi)外多個(gè)課題組報(bào)道已指出，SATB1過(guò)表達(dá)可以促進(jìn)NPC的增殖、遷移和臨床進(jìn)展，并改變化療的敏感性，靶向干預(yù)SATB1則抑制這種效應(yīng)[7-10]。然而，SATB1過(guò)表達(dá)對(duì)NPC細(xì)胞內(nèi)各種生存、耐藥、轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號(hào)通路的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)尚待進(jìn)一步闡明。

本研究采用串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)簽(tandem mass tag，TMT)標(biāo)記的蛋白定量技術(shù)和串聯(lián)質(zhì)譜分析技術(shù)，檢測(cè)SATB1表達(dá)改變前后NPC細(xì)胞的蛋白表達(dá)譜，表征NPC中SATB1誘導(dǎo)的差異蛋白，結(jié)合生物信息學(xué)中常用的GO和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)分析來(lái)探究差異蛋白涉及的功能、分布及參與的信號(hào)通路，以期從宏觀角度為NPC的發(fā)病機(jī)制、治療以及預(yù)后靶點(diǎn)的選擇和評(píng)估提供新的思路和方法。

材 料 和 方 法

1 細(xì)胞系、主要試劑及儀器

NPC細(xì)胞系CNE1(本實(shí)驗(yàn)室保存)。兔抗人SATB1 I 抗(Novus)；鼠抗人β-actin I 抗(Santa Cruz)；HRP標(biāo)記 II 抗(武漢三鷹生物技術(shù)有限公司)；RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清(Hyclone)；SATB1過(guò)表達(dá)(over-expression, OV)慢病毒和陰性對(duì)照(negative control, NC)慢病毒顆粒(廣州復(fù)能基因有限公司)；PMSF、SDT裂解液和BCA蛋白定量試劑盒(碧云天)；考馬斯亮藍(lán)、二硫蘇糖醇、5%羥胺、乙腈、碘乙酰胺和胰蛋白酶(上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司)；TMT試劑盒(Thermo Fisher)。冷凍離心機(jī)、高分辨質(zhì)譜儀Q-Exactive Plus和超聲儀(Thermo Fisher)；CO2培養(yǎng)箱(BNA-311型)、電泳儀、電泳槽和轉(zhuǎn)膜槽(Bio-Rad)；熒光顯微鏡(Olympus)；PVDF膜和超濾管(Milipore)。

2 方法

2.1SATB1穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建 參考既往方法[9, 11]常規(guī)培養(yǎng)CNE1細(xì)胞。簡(jiǎn)言之，CNE1細(xì)胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液重懸，接種于直徑6 cm的培養(yǎng)皿，置于37 ℃、5% CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)，每3 d換液1次。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于6孔板，每孔2×105個(gè)，待過(guò)夜貼壁并恢復(fù)細(xì)胞狀態(tài)后開(kāi)始感染病毒。按MOI=20準(zhǔn)備慢病毒顆粒，將病毒顆粒輕柔重懸于RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)液中，6孔板每孔按600 μL添加慢病毒顆粒懸液(含1 μL感染增強(qiáng)液)，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置12 h，更換為完全培養(yǎng)液，72 h后熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的信號(hào)，并與明視野對(duì)比來(lái)判斷病毒感染效率。之后換為含2.0 mg/L嘌呤霉素的完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)1周。將6孔板中剩余細(xì)胞用含0.5 mg/L嘌呤霉素的完全培養(yǎng)液擴(kuò)大培養(yǎng)，采用Western blot檢測(cè)SATB1的蛋白表達(dá)以判斷SATB1的過(guò)表達(dá)情況，將SATB1過(guò)表達(dá)細(xì)胞系標(biāo)記為CNE1-SATB1-OV，陰性對(duì)照慢病毒感染細(xì)胞系標(biāo)記CNE1-NC。

2.2樣本處理和收集 將CNE1-SATB1-OV和CNE1-NC細(xì)胞接種于直徑為10 cm的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，37 ℃、5% CO2條件下在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每48 h更換培養(yǎng)基，待細(xì)胞生長(zhǎng)至90%匯合后加入SDS裂解液裂解細(xì)胞并收集至EP管中。樣本于95 ℃條件下煮10 min，期間每隔4 min打開(kāi)EP管蓋以排出氣體。后將樣本置于冰上，并于30%功率、間隔5 s條件下超聲40 s。4 ℃、12 000 r/min離心15 min后收集上清液。用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度，并取等量蛋白進(jìn)行SDS-PAGE以檢驗(yàn)蛋白豐度和樣本間的平行性。

2.3濾膜輔助蛋白酶解法酶解蛋白 取等量蛋白質(zhì)，加入含8 mol/L尿素的PBS調(diào)整濃度至1 g/L，轉(zhuǎn)移至30 kD超濾管后14 000 ×g離心15 min以替換樣本儲(chǔ)存液。加入一定量的二硫蘇糖醇(終濃度為5 mmol/L)，37 ℃ 孵育3 h。離心10 min后，加入一定量的碘乙酰胺(終濃度為12.5 mmol/L), 避光放置1 h。14 000 ×g離心15 min，再次加入一定量的二硫蘇糖醇室溫放置1 h，14 000 ×g離心20 min后加入適量50 mmol/L的碳酸氫銨清洗，14 000 ×g離心15 min，重復(fù)操作2次。更換管套后，按照蛋白∶胰蛋白酶=100∶1的比例加入胰蛋白酶，充分混勻后置于37 ℃水浴鍋，16 h后14 000×g離心10 min，收集上清液，放入真空濃縮蒸發(fā)儀干燥后置于-80 ℃保存。

2.4TMT標(biāo)記 用100 mmol/L TEAB復(fù)溶干燥后的樣本，取6標(biāo)的TMT試劑盒，利用TMT試劑對(duì)所獲得的全部肽段進(jìn)行室溫標(biāo)記1 h。加入適量的5%羥胺終止反應(yīng)，干燥除去乙腈后，調(diào)節(jié)pH至2以下并用Sep-Pak C18柱除鹽，-80 ℃保存樣本。

2.5液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 樣品經(jīng)LC系統(tǒng)進(jìn)樣，色譜柱分離，從LC液相色譜儀流出的被分離組分通過(guò)接口進(jìn)入離子源，離子化后在第1級(jí)質(zhì)量分析器根據(jù)質(zhì)荷比分離，之后串聯(lián)進(jìn)入第2級(jí)質(zhì)量分析器進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，獲得質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)。

2.6Western blot實(shí)驗(yàn) 應(yīng)用8% SDS-PAGE將蛋白樣本分離，考馬斯亮藍(lán)染色，觀察各樣本蛋白條帶情況。將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜，按既往方法檢測(cè)SATB1的表達(dá)[9]，β-actin為內(nèi)參照。SATB1抗體稀釋濃度為1∶500，β-actin稀釋濃度為1∶3 000。

2.7RT-qPCR實(shí)驗(yàn) 挑選蛋白學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)上調(diào)最顯著的5個(gè)基因(SERPINB3、SATB1、CDH13、HIST1H1D和OLR1)及下調(diào)明顯的5個(gè)基因(CAPN6、GFPT2、STON2、PCGF5和CNTRL)，采用RT-qPCR驗(yàn)證其mRNA的水平，觀察這些顯著改變基因mRNA的變化與蛋白組學(xué)變化趨勢(shì)的一致性。驗(yàn)證基因及引物序列如下(序列均跨外顯子/外顯子區(qū)域)：SERPINB3(NM_006919.3)的上游引物序列為5′-GGAACACAGGAGTCCAGATCA-3′,下游引物序列為5′-TGTGCAGTGTTGTCTTTGGC-3′；SATB1(NM_002971.4)的上游引物序列為5′-CTGGGCTCGTATCAACACCTAT-3′,下游引物序列為5′-TAAGGACTGCTGGGCTAAAAGT-3′；CDH13(NM_001257.5)的上游引物序列為5′-CGGTGCCTCTGGAAGTCATT-3′,下游引物序列為5′-ATCACTGTGGTGCCTGTGG-3′；HIST1H1D(NM_005320.2)的上游引物序列為5′-TATCACCAAGGCAGTGGCAG-3′,下游引物序列為5′-TGAGGCCAAGCTTGATACGG-3′；OLR1(NM_002543.4)的上游引物序列為5′-AGCACAGCTGATCTGGACTT-3′,下游引物序列為5′-TGGGGCATCAAAGGAGAACC-3′；CAPN6(NM_014289.4)的上游引物序列為5′-CCAGCTCAGGGAACTGACTC-3′,下游引物序列為5′-TCTGGACAGGAGAACGGACT-3′；GFPT2(NM_005110.4)的上游引物序列為5′-CATCTCGAGCCATCCAGACC-3′,下游引物序列為5′-CCAGGAGCACTGTGTTGGTT-3′；STON2(NM_001366850.1)的上游引物序列為5′-AACAGCTGAGACAGCCCTAC-3′,下游引物序列為5′-TCGTCTGCTCCTCAGCATTG-3′；PCGF5(NM_032373.5)的上游引物序列為5′-GCGGGTGCTGTTTCTGTTTC-3′,下游引物序列為5′-TTCCGCTTTCCCATGTCCAG-3′；CNTRL(NM_007018.4)的上游引物序列為5′-AGAATTCTGGCCCAACTCCG-3′,下游引物序列為5′-TGCTTCCTGCAACTCCTCTG-3′；內(nèi)參照β-actin的引物序列、qPCR反應(yīng)體系和循環(huán)參數(shù)參見(jiàn)既往經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行[9, 11]。

3 數(shù)據(jù)處理與分析

應(yīng)用Proteome Discoverer 2.1 (Thermo Fisher Scientific)軟件將Q-Exactive Plus質(zhì)譜儀產(chǎn)生的原始圖譜文件(.raw文件)轉(zhuǎn)化為.mgf文件，通過(guò)軟件內(nèi)置的工具提交到Mascot2.6服務(wù)器進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)檢索。蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)為Uniprot(http://www.uniprot.org);再通過(guò)Proteome Discoverer 2.1將Mascot服務(wù)器上形成的查庫(kù)文件(.dat文件)傳回軟件，根據(jù)FDR<0.01的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選，獲得定性結(jié)果。定量分析采用Proteome Discoverer 2.1軟件對(duì)肽段報(bào)告離子峰強(qiáng)度值進(jìn)行抽提，并對(duì)定量值進(jìn)行歸一化處理。

結(jié) 果

1 成功構(gòu)建SATB1過(guò)表達(dá)CNE1細(xì)胞系

慢病毒感染72 h后，熒光顯微鏡下觀察到較強(qiáng)的綠色熒光信號(hào)，證實(shí)病毒感染成功。后續(xù)再通過(guò)嘌呤霉素的選擇，得到穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系，最后經(jīng)Western blot檢測(cè)證實(shí)CNE1-SATB1-OV中SATB1表達(dá)顯著上調(diào)，而CNE1-NC中SATB1表達(dá)水平較低，見(jiàn)圖1。2個(gè)細(xì)胞系分別培養(yǎng)、擴(kuò)增用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

Figure 1. Establishment of SATB1-overexpressing CNE1 cell line. A: observation of EGFP signals under microscope. The scale bar = 50 μm; B: Western blot was used to analysis of SATB1 protein expression in the CNE1-SATB1-OV and CNE1-NC cells.

圖1 SATB1穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞系CNE1-SATB1-OV的建立

2 蛋白樣本質(zhì)控

經(jīng)BCA法測(cè)定各組蛋白濃度，各樣本蛋白濃度均大于5 g/L。取一定量蛋白樣本進(jìn)行SDS-PAGE，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色，結(jié)果顯示各樣本電泳條帶均清晰，樣本間平行性較好。蛋白質(zhì)譜顯示酶解正常，色譜質(zhì)譜行為正常，見(jiàn)圖2。

Figure 2. Identification of protein samples subjected to quantitative proteomics analysis. A: the results of SDS-PAGE of protein samples; B: the mass spectrometry peak map of protein samples.

圖2 定量蛋白組學(xué)分析鑒定待測(cè)樣本

3 差異表達(dá)蛋白的鑒定和篩選

通過(guò)TMT蛋白定量技術(shù)和串聯(lián)質(zhì)譜分析，共得到二級(jí)質(zhì)譜譜圖總數(shù)292 749個(gè)，肽段匹配到的譜圖數(shù)為129 647個(gè)，肽段總數(shù)47 661個(gè)，唯一肽段總數(shù)45 355個(gè)，蛋白質(zhì)總數(shù)5 808個(gè),見(jiàn)圖3A。以差異倍數(shù)大于1.2倍(上調(diào)或下調(diào))且P(ttest)<0.05作為標(biāo)準(zhǔn)，與CNE1-NC細(xì)胞相比較，CNE1-SATB1-OV細(xì)胞中顯著上調(diào)蛋白115個(gè)，顯著下調(diào)蛋白163個(gè)，總共差異表達(dá)蛋白278個(gè)，見(jiàn)圖3B;差異蛋白火山圖如圖3C所示，其中上調(diào)和下調(diào)最顯著的5個(gè)蛋白繪制熱圖如圖3D所示，其中115個(gè)上調(diào)表達(dá)蛋白涉及細(xì)胞學(xué)功能包括增殖、周期、黏附、血管生成、氧化應(yīng)激、凋亡、表觀遺傳修飾、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及其它等多個(gè)方面，見(jiàn)圖3E；其中26.95%的蛋白與腫瘤細(xì)胞的黏附、遷移、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、血管生成等有關(guān)，這部分差異蛋白聚類熱圖如圖3F所示。

Figure 3. The results of qualitative identification of protein samples. A: quantitative results of protein samples subjected to tandem mass spectrometry; B: number of identified differential proteins; C: volcano plot of differential proteins; D: heat maps of 5 most up-regulated and down-regulated proteins; E: classification of significantly up-regulated proteins; F: heat map of up-regulated differential proteins involved in cell migration, adhesion, angiogenesis and epithelial-mesenchymal transition EMT.

圖3 蛋白定性鑒定結(jié)果

4 差異表達(dá)蛋白的驗(yàn)證

分別選取蛋白組學(xué)篩查出表達(dá)上調(diào)最顯著的5個(gè)蛋白的編碼基因SERPINB3、SATB1、CDH13、HIST1H1D和OLR1及表達(dá)下調(diào)最顯著的5個(gè)蛋白的編碼基因CAPN6、GFPT2、STON2、PCGF5和CNTRL進(jìn)行RT-qPCR驗(yàn)證，以表達(dá)倍數(shù)(fold change, FC)轉(zhuǎn)化為log2數(shù)值為縱坐標(biāo)，繪制柱狀圖，結(jié)果如圖4，證實(shí)RT-qPCR的結(jié)果與蛋白組學(xué)的結(jié)果具有一致性。

5 GO(gene oncology)注釋及富集分析

運(yùn)用GO數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行注釋和富集分析，結(jié)果顯示差異表達(dá)蛋白主要參與了細(xì)胞過(guò)程(cellular process)、單有機(jī)體過(guò)程(single-organism process)、生物調(diào)控(biological regulation)和代謝過(guò)程(metabolic process)等，發(fā)揮生物分子結(jié)合(binding)和催化(catalytic)等功能；細(xì)胞組件(cell component)主要存在于細(xì)胞部分(cell part)、細(xì)胞(cell)和細(xì)胞器(organelle)上。通過(guò)Fisher精確檢驗(yàn)對(duì)GO注釋進(jìn)行顯著性富集分析，結(jié)果顯示胞外空間(extracellular space)、受體活性(receptor activity)和分子轉(zhuǎn)導(dǎo)活性(molecular transducer activity)等GO條目最容易受到SATB1過(guò)表達(dá)的影響,其中富集最顯著的前30個(gè)GO 條目，見(jiàn)圖5。

Figure 4. RT-qPCR was used to verify differentially expressed proteins.

圖4 RT-qPCR驗(yàn)證差異表達(dá)蛋白

Figure 5. Significantly enriched 30 GO terms.

圖5 顯著富集的30個(gè)GO 條目

6 KEGG通路注釋及富集分析

為了更系統(tǒng)全面地了解SATB1所參與的生物學(xué)過(guò)程，將上述差異表達(dá)蛋白與KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)后進(jìn)行差異信號(hào)分析。同樣通過(guò)Fisher精確檢驗(yàn)來(lái)分析計(jì)算各個(gè)通路蛋白富集度的顯著性水平，以P<0.05，F(xiàn)DR<0.05作為篩選標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果顯示差異表達(dá)蛋白主要參與了263條信號(hào)通路，與腫瘤密切相關(guān)的通路主要有MAPK、PI3K-Akt、AMPK、JAK-STAT、p53、PPAR、mTOR、HIF-1和Hippo通路等，見(jiàn)表1。

表1 腫瘤相關(guān)KEGG通路差異表達(dá)蛋白注釋

討 論

早期的研究顯示，在mRNA水平上干擾SATB1表達(dá)影響了眾多與腫瘤有關(guān)的重要分子和信號(hào)通路[12]。SATB1為一種核基質(zhì)結(jié)合蛋白，主要通過(guò)表觀遺傳學(xué)改變多種下游基因的表達(dá)。為從宏觀上獲得SATB1表達(dá)改變后NPC細(xì)胞中蛋白組學(xué)特征，我們首先基于慢病毒載體構(gòu)建了SATB1過(guò)表達(dá)及陰性對(duì)照慢病毒，以此慢病毒感染CNE1細(xì)胞，經(jīng)嘌呤霉素篩選得到穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。在獲得合格的細(xì)胞及蛋白樣本的基礎(chǔ)上，經(jīng)TMT標(biāo)記的串聯(lián)質(zhì)譜分析技術(shù)，鑒定到2株細(xì)胞中總蛋白數(shù)量為5 808個(gè)，其中顯著表達(dá)差異蛋白質(zhì)共278個(gè)，SATB1過(guò)表達(dá)細(xì)胞中顯著上調(diào)蛋白數(shù)量115個(gè)，顯著下調(diào)蛋白數(shù)量163個(gè)。過(guò)表達(dá)SATB1組上調(diào)的蛋白中16.52%與細(xì)胞增殖有關(guān)，15.89%與細(xì)胞黏附和轉(zhuǎn)移有關(guān)，5.96%與細(xì)胞周期調(diào)控有關(guān)，11.91%與細(xì)胞凋亡有關(guān)，3.31%與血管生成有關(guān)，這些蛋白的表達(dá)上調(diào)對(duì)促進(jìn)NPC細(xì)胞演進(jìn)無(wú)疑起到重要的作用。

研究發(fā)現(xiàn)，表達(dá)上調(diào)的代表性蛋白有SERPINB3、CDH13、HIST1H1D、PAI-1、CHK1、TNFRSF6和PKCα等；表達(dá)水平下調(diào)的代表性蛋白有CAPN6、GFPT2、STON2、PCGF5、CNTRL、PLK2和TIMELESS等。部分代表性的差異蛋白異常表達(dá)與腫瘤關(guān)系已經(jīng)得以報(bào)道[13-15]。本研究共選擇了10個(gè)代表性差異蛋白，采用RT-qPCR檢測(cè)其mRNA水平的變化，結(jié)果證實(shí)蛋白組學(xué)結(jié)果與RT-qPCR結(jié)果是一致的，提示本蛋白組學(xué)結(jié)果是可信的。與鑒定到的總蛋白數(shù)量相比，本次研究得到的差異顯著蛋白總數(shù)不夠大，這可能與本研究所應(yīng)用的細(xì)胞系為非單克隆細(xì)胞株有關(guān)。盡管如此，深入挖掘本研究鑒定到的差異蛋白的信息也可以為NPC中與SATB1表達(dá)有關(guān)分子調(diào)節(jié)機(jī)制提供線索。

GO注釋和KEGG信號(hào)富集是生物信息學(xué)常用的手段[16]。通過(guò)GO注釋發(fā)現(xiàn)，SATB1過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)的差異表達(dá)蛋白主要功能涉及30個(gè)方面,其中與胞外空間、受體活性、分子轉(zhuǎn)導(dǎo)活性、血管生成和系統(tǒng)發(fā)育等關(guān)系密切。KEGG信號(hào)富集發(fā)現(xiàn)SATB1過(guò)表達(dá)可影響多個(gè)信號(hào)通路，其中與腫瘤關(guān)系密切的主要是MAPK、PI3K-Akt、AMPK、JAK-STAT、p53、PPAR、mTOR、HIF-1、Hippo、Ras、ErbB、Rap1、NF-κB、FoxO、VEGF和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factor-β, TGF-β)等16條通路。課題組前期也報(bào)道了PI3K-Akt 和TGF-β1信號(hào)在NPC中的作用[17-18]。腫瘤組織或細(xì)胞中這些信號(hào)通路的活化或異常已經(jīng)被大量文獻(xiàn)所證實(shí)。通過(guò)基于CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建SATB1基因穩(wěn)定敲除的細(xì)胞株，進(jìn)一步反向證實(shí)SATB1的表達(dá)對(duì)于NPC的增殖、遷移、細(xì)胞周期、凋亡和體內(nèi)成瘤等生物學(xué)特性具有重要的影響(未發(fā)表資料)。SATB1過(guò)表達(dá)可改變多個(gè)信號(hào)通路與SATB1作為基因表達(dá)調(diào)控的全局者身份相吻合。

總之，本研究揭示了SATB1過(guò)表達(dá)的NPC細(xì)胞中蛋白組學(xué)變化特征，初步提示了差異蛋白涉及的生物學(xué)功能，富集了差異蛋白主要涉及的信號(hào)通路，從宏觀角度為臨床上SATB1高表達(dá)NPC的診斷和治療方案制定提供了一定的實(shí)驗(yàn)參考。本研究結(jié)果提示NPC中SATB1是一個(gè)很有潛力的臨床靶向干預(yù)指標(biāo)。