來源于Penicillium sp. C1的水產(chǎn)用中性植酸酶基因在畢赤酵母中的表達及性質(zhì)研究

李雅楠 余利紅 陳新美 楊浩萌 黃火清

（1. 廣州醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣州 511436；2. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，北京10081）

對畜禽及魚類等單胃動物而言，磷是其生長的必要元素。在谷物類及粕類飼料中，總磷的60%-70%是以植酸的形式存在的［1］。植酸又名肌醇六磷酸，在單胃動物（如人、豬和雞和魚類等）體內(nèi)，缺乏有效降解植酸的消化酶類，因此對植酸磷的利用率極低，不被消化的植酸磷排出體外導(dǎo)致土地和水資源污染；另一方面，植酸往往與蛋白類、糖類及有益礦物質(zhì)如鐵、鋅、鈣等鰲合，也是一種抗?fàn)I養(yǎng)因子，不利于營養(yǎng)物質(zhì)及礦物質(zhì)的消化和吸收［2］。因此，為了避免磷缺乏，飼料中往往還要額外添加無機磷（如磷酸氫鈣），這導(dǎo)致飼料成本提高，也造成磷礦這種不可再生資源的浪費［3］。

植 酸 酶（Myo-inositol hexakisphosphate phosphohydrolase）是指能夠水解植酸及其鹽類物質(zhì)中磷酸單酯鍵而生成低級磷酸肌醇和無機磷的一類酶的總稱［4］。飼料用植酸酶的商業(yè)化是在1991年荷蘭關(guān)于減少磷對環(huán)境污染立法的背景下啟動的［5］，在隨后的幾十年中，研究者們對植酸酶進行了深入廣泛的研究，一些綜述文章總結(jié)了植酸酶的發(fā)展過程［6-12］。植酸酶可以在單胃動物體內(nèi)水解植酸釋放無機磷，作為飼料添加劑，能夠明顯提高植酸磷的利用率，降低動物飼料中無機磷的補充量，同時降低排泄物中的磷含量，減少環(huán)境污染，而且植酸酶降解植酸并釋放出鰲合的有益礦物質(zhì)，可有效提高飼料中可吸收鐵、鋅、鈣的含量［13］。目前，植酸酶已經(jīng)成為在單胃動物（如豬、雞、魚）飼料中應(yīng)用最廣的酶制劑之一，其在單胃動物日糧中的添加效果也已經(jīng)得到了廣泛的認同［14］，實現(xiàn)了生態(tài)效益和經(jīng)濟效益的“雙贏”。

植酸酶的作用場所主要是單胃動物的胃及腸道，對于魚類而言，其消化道組成具有很大的多樣性，有的有胃，有的無胃，并且魚類的消化道相對較短，消化道的pH一般為6.5-7.5，接近中性，與豬和雞酸性的消化道有很大區(qū)別，因此，水產(chǎn)飼料里的植酸酶制劑要求在中性pH下具有較高的酶活性；另外由于魚類養(yǎng)殖的水體溫度一般在 0-30℃之間，因此，投放到養(yǎng)魚池的植酸酶需在低溫環(huán)境中具有較高的活性。而到目前為止，在飼料上應(yīng)用的植酸酶最適pH值主要是酸性的，只能在酸性條件下發(fā)揮水解植酸的能力，在pH高于6.0時，酶活性損失嚴(yán)重［15］。但在中性pH值及低溫條件下具有高酶活性的植酸酶報道還很少，因此，開發(fā)中性低溫植酸酶在水產(chǎn)養(yǎng)殖中具有較大的應(yīng)用潛力和商業(yè)價值。

本研究通過兼并引物和Tail-PCR技術(shù)克隆了來自青霉的中性植酸酶基因［16］，并成功將其在畢赤酵母中進行異源表達，并對其酶學(xué)性質(zhì)和動力學(xué)參數(shù)進行了分析，為植酸酶在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供了新的候選基因。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 質(zhì)粒與菌株 從自云南錫礦的酸性廢水中分離的青霉 C1菌株（Penicilliumsp. C1）［17］，保存于中國普通微生物菌種保藏管理中心，編號為：CGMCC No.4432。pEASY-blunt克隆載體及克隆宿主菌大腸桿菌XL-10購自北京全式金生物技術(shù)有限公司；表達宿主菌株畢赤酵母（Pichia pastoris）GS115由本實驗室保存，表達載體 pPIC9 γ由本實驗室構(gòu)建并保存。

1.1.2 試劑 植酸鈉購自Sigma公司；Genome Walking Kit（TaKaRa code：D316） 試 劑 盒 購 自TaKaRa公司；實驗所用的限制性內(nèi)切酶SnaBⅠ和NotⅠ為TaKaRa公司產(chǎn)品；DNA 回收試劑盒購自北京天根生物科技有限公司；Fly DNA聚合酶及pEASY系列克隆載體購自北京全式金生物技術(shù)有限公司；脫糖基化酶 Endo-［β］-N-acetylglucosaminidase H（Endo H）以及T4DNA連接酶為 New England Biolabs公司產(chǎn)品；真菌DNA提取試劑盒購自O(shè)MEGA公司（Fungal DNA Mini Kit，D3390-01）；蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)為上海生化研究所產(chǎn)品；蛋白純化層析介質(zhì)為Amersham Pharmacia產(chǎn)品；其它所用試劑為國產(chǎn)分析純試劑。

1.1.3 培養(yǎng)基 LB培養(yǎng)基：0.5%酵母提取物，1%NaCl，1%蛋白胨；MD固體培養(yǎng)基：葡萄糖20 g/L，瓊脂粉20 g/L，生物素4×10-4g/L，YNB 13.4 g/L；BMGY培養(yǎng)基：酵母提取物10 g/L，蛋白胨20 g/L，甘油10 mL，生物素4×10-4g/L，YNB 13.4 g/L；BMMY培養(yǎng)基：酵母提取物10 g/L，蛋白胨20 g/L，生物素4×10-4g/L，YNB 13.4 g/L，甲醇0.5%。

1.2 方法

1.2.1 PhyC1成熟蛋白編碼區(qū)的克隆 根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中的真菌HAP植酸酶保守序列RHGVRXPT和HDTN，設(shè)計簡并引物HAP-FF和HAP-FR（表1），用于植酸酶基因片段的擴增。

表1 引物名稱及序列信息

提取青霉C1的基因組DNA（詳見Fungal DNA Mini Kit 說明書），并以此為模板，以HAP-FF和HAP-FR為上下游引物，F(xiàn)ly DNA聚合酶擴增植酸酶保守區(qū)DNA序列，用膠回收試劑盒回收該PCR產(chǎn)物，克隆到pEASY-blunt載體上，進行DNA測序，根據(jù)測序結(jié)果，設(shè)計擴增植酸酶保守基因的側(cè)翼序列的特異性引物，5'側(cè)翼序列的特異性引物為usp1/2/3；3'側(cè)翼序列的特異性引物為dsp1/2/3。特異性引物設(shè)計及PCR擴增程序詳見Genome Walking Kit試劑盒說明書。擴增得到的PCR產(chǎn)物經(jīng)過1%的瓊脂糖凝膠電泳分離，特異性擴增的DNA條帶經(jīng)過瓊脂糖凝膠回收試劑盒回收，送至華大基因進行測序，直至獲得編碼PhyC1成熟蛋白的全長基因序列。

1.2.2 真核表達載體 pPIC9 γ-phyC1的構(gòu)建 以青霉C1的基因組DNA為模板，以phyC1-mF和phyC1-mR 為上下游引物，用Fly DNA聚合酶擴增植酸酶phyC1基因全長序列，PCR產(chǎn)物帶有限制性內(nèi)切酶SnaBⅠ和NotⅠ的酶切位點（表1黑色斜體），用膠回收試劑盒回收該PCR產(chǎn)物，將其克隆到pEASY-blunt-simple載體上，經(jīng)過DNA測序，獲得正確的帶有phyC1基因的重組質(zhì)粒，重組質(zhì)粒經(jīng)SnaBⅠ和NotⅠ雙酶切，與經(jīng)過同樣雙酶切的pPIC9γ表達載體連接，獲得重組表達載體pPIC9 γ-phyC1。

1.2.3 畢赤酵母的轉(zhuǎn)化和陽性轉(zhuǎn)化子篩選 畢赤酵母GS115菌株劃線獲得單克隆，并在YPD液體培養(yǎng)基中過夜生長至OD600=1.6左右，然后根據(jù)Invitrogen手冊的方法制備畢赤酵母感受態(tài)細胞。重組表達載體pPIC9γ-phyC1用BglⅡ酶切線性化后，取2 μg線性化質(zhì)粒及80 μL感受態(tài)細胞加入電擊杯（0.2 cm Bio Rad）中，電擊（2.1 kV、25 μF、200Ω）轉(zhuǎn)化，然后涂布在MD平板上，于30℃恒溫箱中培養(yǎng)至長出轉(zhuǎn)化子，挑選生長旺盛的轉(zhuǎn)化子在小管中用3 mL BMGY 培養(yǎng)基培養(yǎng)2 d后離心棄去培養(yǎng)基，再加入1.5 mL BMMY 液體培養(yǎng)基誘導(dǎo)2 d，測定各管的植酸酶活性，挑選活性高的單克隆作為種子，誘導(dǎo)PhyC1的大量表達。

1.2.4 PhyC1蛋白的誘導(dǎo)表達 將產(chǎn)植酸酶的菌株接種到裝有300 mL BMGY液體培養(yǎng)基的1 L三角瓶中，在30℃、220 r/min搖床中培養(yǎng)48 h用以增加菌體量，然后將培養(yǎng)液在 7 000 r/min 離心 10 min，棄上清，取沉淀（盡量除盡上清），再用100 mL含有0.5%甲醇的BMMY 液體培養(yǎng)基重懸，繼續(xù)在30℃誘導(dǎo)培養(yǎng)，每隔12 h補加甲醇，使培養(yǎng)基中的甲醇濃度保持在0.5%的終濃度，并且每隔12 h取樣進行酶活測定。

1.2.5 重組植酸酶的純化 將獲取的菌液在4℃、8 000 r/min下離心10 min，收集上清液，對其進行50%-70%硫酸銨沉淀，然后13 000 r/min、4℃離心15 min，收集沉淀，將沉淀的蛋白溶于20 mmol/L pH 8.0 的Tris-HCl緩沖液中，并將其在相同的緩沖液中進行透析，透析后的酶液用PEG 6000進行濃縮。濃縮后的酶液通過陰離子交換層析（HiTrap Q Sepharose XL 5 mL）和分子篩凝膠層析（Sephacryl S-200 HR FPLC column）進行純化，得到電泳純的蛋白樣品。

1.2.6 脫糖基化及SDS-PAGE分析 畢赤酵母表達的異源蛋白往往會被糖基化修飾，造成異源表達的蛋白分子量與理論分子量不符的情況，因此，我們對純化的PhyC1進行脫糖基化處理及蛋白電泳驗證，分析其糖基化情況和實際分子量，脫糖基化反應(yīng)體系如下：向18 μL純化的酶液中加入2 μL 10×Glycoprotein變性緩沖液，100℃煮沸10 min，使酶蛋白充分變性；再加入2.4 μL 10×G 5 緩沖液、2 μL Endo H，37℃水浴處理 1 h。而后通過SDSPAGE電泳分析重組酶的實際和理論分子量。SDSPAGE濃縮膠和分離膠分別是5%和12%的丙烯酰胺凝膠溶液。

1.2.7 植酸酶活性測定 將純化的酶液用NaAc-HAc緩沖液進行稀釋一定倍數(shù)（0.25 mol/L；并含有 0.05%BSA 和 0.05% Triton X-100 ；pH 4.5），將 50 μL 稀釋后的酶液加入到 950 μL 1.5 mmol/L 植酸鈉底物（用上述NaAc-HAc緩沖液配制）中，在37℃水浴鍋中反應(yīng)15 min，加入1 mL 10%（W/V）TCA 終止反應(yīng)，最后加入2 mL顯色液（1%（W/V）四水合鉬酸銨，3.2%（W/V）濃硫酸，7.32%（W/V）硫酸亞鐵）進行顯色。對照管是先加入TCA混勻后再加酶液，其它步驟相同。顯色后，在700 nm光吸收下測定OD值，并計算酶活。

1.2.8 重組植酸酶的酶學(xué)性質(zhì)分析

1.2.8.1 最適pH和pH穩(wěn)定性 最適pH測定：將純化后的酶液在不同的 pH（2.0-12.0）條件下進行酶促反應(yīng)，所使用的緩沖液如下：0.1 mol/L甘氨酸-鹽酸緩沖液，pH 2.0-4.0；0.1 mol/L醋酸鈉-醋酸緩沖液，pH 4.0-7.0；0.1 mol/L Tris-鹽酸緩沖液，pH 7.0-9.0；0.1 mol/L甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液，pH 9.0-12.0。酶促反應(yīng)在37℃下進行。

pH穩(wěn)定性測定：將純化后的酶液用不同pH緩沖液稀釋，使其在不同pH、37℃處理1 h，然后用最適pH緩沖液稀釋，使其在最適pH、37℃下進行酶促反應(yīng)測定酶活性研究酶的pH穩(wěn)定性。每個pH下的測定重復(fù)3次，取平均值。

1.2.8.2 最適反應(yīng)溫度和熱穩(wěn)定性 在最適pH條件下，使酶促反應(yīng)在不同溫度（0℃-70℃）條件下進行，通過測定酶活性來確定最適溫度。熱穩(wěn)定性測定是在40℃、45℃、50℃條件下將酶液分別處理2-60 min后，在37℃、最適pH條件下進行酶活性測定。每個溫度下的測定重復(fù)3次，取平均值。

1.2.8.3 比活性測定 酶活性單位定義：在一定條件下，每分鐘釋放出1 μmol無機磷所需的酶量為一個酶活性單位（U）。比活力單位定義是：每毫克酶蛋白所含有的酶活力單位。用結(jié)晶牛血清白蛋白（BSA）配置標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液，并繪制蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過考馬斯亮藍G-250試劑測定樣品中酶蛋白的含量，同時在37℃下測得重組植酸酶的酶活，由此得到酶的比活。

1.2.8.4 不同化學(xué)試劑及相關(guān)金屬離子對重組植酸酶PhyC1酶活性影響測定 在酶促反應(yīng)體系中加入相應(yīng)的金屬離子及相關(guān)化學(xué)試劑，研究其對酶活性的影響，各種物質(zhì)的終濃度為1 mmol/L，在最適pH、37℃條件下測定。以沒有加金屬離子和化學(xué)試劑的反應(yīng)為對照。

1.2.8.5 PhyC1動力學(xué)常數(shù)Km值及Vmax的測定 在PhyC1的最適反應(yīng)條件下，以 0.0625 mmol/L的植酸鈉為底物，依次在酶促反應(yīng)進行 1、3、5、7、10、15 min 時加入1 mL 10% TCA 試劑終止反應(yīng)，測定酶活性，計算出酶活性與時間的比值，在一定時間內(nèi)比值呈一常數(shù)，則在此時間內(nèi)的酶促反應(yīng)為一級反應(yīng)，此時間即可做為測定Km和Vmax的反應(yīng)時間。在一級反應(yīng)時間內(nèi)，用不同濃度的植酸鈉（0.0625、0.1、0.125、0.2、0.25、0.5、1.0 和 1.5 mmol/L）為底物，在最適條件下測定酶活，計算相應(yīng)的酶促反應(yīng)速度，按照雙倒數(shù)作圖法（Lineweaver-Burk法）測定Km值及Vmax。

1.2.8.6 蛋白酶耐受性的測定 用0.2 mol/L、pH 7.0的Tris-Hcl緩沖液配制0.1 mg/mL的胰蛋白酶。按照蛋白酶與純化植酸酶質(zhì)量比為1∶1的比例在植酸酶中加入胰蛋白酶，在37℃分別保溫 0、5、10、20、30、60 min 后取樣放置于冰上，然后對蛋白酶處理后的樣品用最適pH緩沖液稀釋，在37℃、最適pH條件下進行酶活性測定，研究蛋白酶對植酸酶活性的影響。

2 結(jié)果

2.1 植酸酶基因phyC1的克隆

通過簡并引物的擴增及染色體步移方法，最終獲得了來源于青霉的植酸酶基因phyC1的ORF序列，如圖1所示：phyC1的結(jié)構(gòu)基因全長1 477 bp，有意思的是58 bp的內(nèi)含子序列（黑體加下劃線），正處于phyC1信號肽的內(nèi)部。PhyC1成熟蛋白編碼449個氨基酸，理論分子量為50 kD，預(yù)測等電點4.73，含有6個潛在的N糖基化位點。將phyC1的結(jié)構(gòu)基因在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行序列比對，PhyC1屬于典型的組氨酸植酸酶家族HAP（Histidine Acid Phosphatase），在N端和C端分別含有該家族保守的RHG和HD基序，其中兩個組氨酸和天冬氨酸是植酸酶催化殘基。PhyC1與來源于Talaromycesverruculosus（KUL82701.1）的植酸酶的氨基酸序列最為相似，相似性約為92%；與來源于Talaromycescellulolyticus（GAM38406.1）的植酸酶的氨基酸序列相似性約為90%；與來源于Penicilliumsp. ‘occitanis’（PCG95438.1）的植酸酶的氨基酸序列相似性約為87%。

圖1 植酸酶phyC1的核酸序列

2.2 植酸酶基因phyC1在畢赤酵母中的表達與純化

phyC1基因通過SnaBⅠ和NotⅠ雙酶切位點與 pPIC9γ表達載體連接，獲得重組表達載體pPIC9 γ-phyC1，線性化的重組載體經(jīng)電激轉(zhuǎn)化，導(dǎo)入酵母GS115菌株，經(jīng)過平板篩選和小管篩選，選取植酸酶活性最高的轉(zhuǎn)化子，在裝有200 mL培養(yǎng)基的1 L搖瓶中進行誘導(dǎo)表達，96 h左右發(fā)酵液酶活達到最高，離心收集發(fā)酵液，對其進行50%-70%硫酸銨沉淀、透析、濃縮，濃縮的酶液利用陰離子交換層析和分子篩凝膠層析進行純化，以純化的樣品進行酶學(xué)性質(zhì)的分析。將純化的樣品10 μL進行 SDSPAGE 蛋白電泳分析（圖2），結(jié)果表明，重組酶純化條帶單一，分子量約為60 kD左右，經(jīng)Endo H脫糖基化處理后，重組酶的分子量下降至50 kD左右，說明在GS115菌株中PhyC1蛋白被糖基化。

圖2 重組酶PhyC1的SDS-PAGE分析

2.3 最適pH和pH穩(wěn)定性測定

將純化的酶液在37℃下置于pH 2.0-8.0的緩沖液中測定酶活力，結(jié)果顯示重組植酸酶PhyC1的最適pH為6.5；在pH值為7.0時酶活性也很高，剩余酶活為90%，說明該酶是一個中性的植酸酶（圖 3-a）。

將PhyC1分別在不同pH緩沖液（pH 2.0-12.0）中于冰上處理 60 min，在最適pH6.5，37℃的條件下測定不同pH處理后的酶活力。結(jié)果顯示在pH 2.0-4.0的條件下，剩余酶活為15%-40%，而在pH 5.0-10.0條件下，剩余酶活為80%-100%，pH 11.0-12.0條件下，剩余酶活僅為10%以下（圖3-b）。可見PhyC1在 pH5.0-10.0范圍內(nèi)穩(wěn)定性很好。

圖3 PhyC1的最適pH（a）和pH穩(wěn)定性（b）

2.4 最適溫度和溫度穩(wěn)定性

在最適pH為6.5的條件下，不同溫度下測定PhyC1的活性，結(jié)果如圖4-a所示，PhyC1的最適反應(yīng)溫度為50℃，在0-20℃時，該酶仍然保持一定的酶活性。熱穩(wěn)定性測定時，40℃保溫60 min后，其相對酶活力仍然保留80%以上，說明PhyC1在40℃條件下熱穩(wěn)定性較好；在45℃保溫20 min后，其剩余酶活為40%左右，但在50℃保溫20 min后，酶活完全喪失，說明該酶在50℃條件下熱穩(wěn)定性較差，如圖4-b所示。

圖4 PhyC1的最適溫度和溫度穩(wěn)定性

2.5 PhyC1的比活及動力學(xué)常數(shù)的測定

純化的重組酶，經(jīng)過蛋白濃度測定和酶活性測定，計算出PhyC1的比活性為16 U/mg；在37℃，pH 6.5條件下，純化的重組植酸酶PhyC1對植酸鈉的動力學(xué)參數(shù)Km和Vmax分別為0.11 mmol/L和21.83 μmol/min/mg。

2.6 PhyC1對不同金屬離子和化學(xué)試劑的耐受性

在最適pH、37℃條件下，測定在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)總體系中加入終濃度為5 mmol/L的不同金屬離子與化學(xué)試劑，結(jié)果如圖5所示，Na+、K+、Li+、EDTA、巰基乙醇在此條件下對酶活性無影響，也有部分金屬離子對酶產(chǎn)生抑制作用，對酶活抑制影響效果排列為 ：Mg2+＜Ni2+＜ Ca2+＜ Cr3+＜ Co2+＜Ag+＜Cu2+＜Fe3+＜Mn2+＜Pb2+＜Zn2+，其中 Cu2+、Fe3+、Mn2+、Pb2+、Zn2+的抑制作用最強，剩余酶活力極低，而化學(xué)試劑中SDS對酶的抑制作用最強，酶活完全受到抑制。

圖5 PhyC1對化學(xué)試劑和金屬離子的耐受性

2.7 胰蛋白酶耐受性

圖6 PhyC1的胰蛋白酶耐受性

如圖6所示，植酸酶PhyC1在胰蛋白酶處理60 min后，剩余酶活達70%以上，說明該植酸酶有很強的抗胰蛋白酶水解的能力。

3 討論

植酸酶廣泛存在于植物、動物和微生物中，目前，應(yīng)用最廣泛的是來源于黑曲霉Aspergillus niger的PhyA［18-19］和來源于大腸桿菌Escherichia coli的AppA［20-21］。但以上植酸酶均為酸性植酸酶，其最適pH值為4.0-6.0，使其在魚類和蝦類飼料中的應(yīng)用受到很大的限制。已有研究表明，在飼料中補充酸性植酸酶對斑節(jié)對蝦、日本對蝦和南亞野鯪的生長性能并無影響，但補充中性植酸酶卻改善了異育銀鯽的生長性能和營養(yǎng)物質(zhì)消化率［22］，因此在植酸酶的選擇上要依據(jù)不同動物的消化道酸堿性而定。

目前，青霉來源的植酸酶已經(jīng)有一些報道，最適pH值均在4.0-5.5之間［23-27］，本研究獲得的植酸酶phyC1是來源于本實驗室分離保存的青霉菌Penicillium pinophilum［17］，植酸酶基因是首次在該菌種中報道，依據(jù)植酸酶分類方法，phyC1屬于組氨酸酸性植酸酶HAP家族［6］，因其最適pH為6.5，偏中性，與現(xiàn)有的組氨酸酸性植酸酶有一定差異，因此屬于HAP家族中一個新的成員，并且phyC1在pH為5-10的范圍內(nèi)維持80%以上的活性，而且在較低的溫度下保持更高的活性，這些性質(zhì)特征都表明植酸酶PhyC1在低溫及pH偏中性的環(huán)境下具有較高的植酸酶活性和穩(wěn)定性，非常適宜在魚類的消化道內(nèi)發(fā)揮作用。但該酶的熱穩(wěn)定性較差，可以通過水產(chǎn)飼料加工中近幾年發(fā)展起來的后噴涂工藝，得到緩解。另外在今后的研究中，通過蛋白質(zhì)工程的手段，對該基因進行酶學(xué)性質(zhì)改良，因此該低溫中性植酸酶PhyC1可以作為儲備的水產(chǎn)用功能性基因資源，為中性植酸酶的研發(fā)和應(yīng)用提供參考。

目前，酶制劑在魚蝦飼料中的應(yīng)用已經(jīng)取得了一定成效，為了使植酸酶得到更加廣泛的應(yīng)用，科學(xué)家們通過遺傳工程和蛋白質(zhì)工程等技術(shù)手段獲得在酶學(xué)性質(zhì)方面具有更加廣泛 pH 作用范圍、蛋白酶抗性、熱穩(wěn)定性提高的植酸酶，以適應(yīng)動物消化道內(nèi) pH 條件的變化、增加蛋白酶抗性、減少飼料制粒過程中的損失［28］。隨著符合水產(chǎn)動物生理特點的酶制劑的開發(fā)，植酸酶將在水產(chǎn)飼料中得到更多的應(yīng)用，從而提高飼料利用率，節(jié)約飼料資源，促進水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。