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      鐵皮石斛DoLIS基因克隆與榮莉酸甲酯誘導(dǎo)表達(dá)分析

      2020-02-21 08:41:11林江波鄒暉王偉英戴藝民
      福建農(nóng)業(yè)學(xué)報 2020年10期
      關(guān)鍵詞:鐵皮石斛表達(dá)分析基因克隆

      林江波 鄒暉 王偉英 戴藝民

      摘要:【目的】克隆鐵皮石斛(Dendrobium officinale)芳樟醇合酶(linalool synthase,LIS)基因,分析該基因在鐵皮石斛開花期花、葉、莖和根中的表達(dá)及茉莉酸甲酯( Methyl Jasmonate,MejA)誘導(dǎo)表達(dá)模式,以期為進(jìn)一步鑒定其功能及分析鐵皮石斛單萜類代謝機(jī)制奠定基礎(chǔ)?!痉椒ā坷肦ACE-PCR和RT-PCR技術(shù)克隆DoLIS基因全長cDNA序列和開放閱讀框(open reading frame,ORF),利用ProtParam和BLAST P在線軟件進(jìn)行理化性質(zhì)分析和氨基酸同源性比對,采用MEGA 6.O構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。利用qPCR方法分析DoLIS基因在開花期鐵皮石斛花、葉、莖和根中的表達(dá)及MejA處理后葉片中的表達(dá)模式?!窘Y(jié)果】DoLIS基因cDNA序列全長2 844 bp,含有1個2 538 bp的ORF,編碼845個氨基酸。分子量為98.298 kD,理論等電點(diǎn)為7.04,不穩(wěn)定系數(shù)是46.29,屬不穩(wěn)定蛋白。DoLIS蛋白具有Terpene_cyclase_plant_CI保守結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明,DoLIS與其他物種的(S) -(+)-LIS聚在同一支,與姬蝴蝶蘭( XP 020576697)的LIS親緣關(guān)系最近。qPCR分析結(jié)果顯示,DoLIS基因在鐵皮石斛開花期葉片中的相對表達(dá)量最高,在MejA處理后相對表達(dá)量呈先上升后下降的趨勢,處理后5h相對表達(dá)量達(dá)到最高,是誘導(dǎo)前的3.88倍。【結(jié)論】本研究克隆了鐵皮石斛DoLIS基因cDNA全長,該基因在葉片中的相對表達(dá)量極顯著高于花、莖和根中的表達(dá)量。MejA處理能顯著誘導(dǎo)DoLIS基因的表達(dá)。

      關(guān)鍵詞:鐵皮石斛;芳樟醇合酶;基因克隆;表達(dá)分析;茉莉酸甲酯

      中圖分類號:S 567

      文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

      文章編號:1008-0384( 2020) 10-1071-07

      0 引言

      【研究意義】芳樟醇,又稱伽羅木醇、沉香油醇、沉香醇等,具有抗菌、鎮(zhèn)靜和殺蟲等功效[1-5]。芳樟醇是一種單鏈狀單萜醇,具有(R) -(一)一芳樟醇和(S)一(+)一芳樟醇2種對映異構(gòu)體,兩者氣味有所差異[6]。不同植物兩種對映異構(gòu)體含有比例不同,薰衣草(Lavendula angustifolia)、依蘭(Canangaodorata)、馬鞭草(Verbena officinalis)等以(R) -(一).芳樟醇為主,鈴蘭(Convalaria majalis)、迷迭香(Rosmarinus officinalis)和甜橙(Citrus sinensis)等以(S).(+).芳樟醇為主[7]。芳樟醇合成酶( linaloolsynthase,LIS)催化底物櫳牛兒焦磷酸(GPP),轉(zhuǎn)化成(R) -(一).芳樟醇或(S).(+).芳樟醇[8]?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前,已經(jīng)從檸檬薄荷(Menthacitrata)[9],金桂(Osmanthus fragrans)[10]、闊葉薰衣草(Lavandula latifolia)[11],小蒼蘭(Freesia)上[12]分離到芳樟醇合成酶基因。劉偲等[13]克隆了桂花(Osmanthus fragrans)‘蓮籽丹桂芳樟醇合酶基因OfTPS5,其表達(dá)量晝升夜降,在盛花期表達(dá)量最高。MeJA是與抗逆性相關(guān)的信號分子,通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)激活或抑制植物次生代謝產(chǎn)物關(guān)鍵酶基因的表達(dá),調(diào)控次生代謝產(chǎn)物的生物合成[14]。韋榮昌等[15]研究表明MejA促進(jìn)羅漢果甜苷V代謝途徑關(guān)鍵酶基因SQS和CS的表達(dá),抑制CAS的表達(dá)。王啟等[16]等研究結(jié)果表明MejA誘導(dǎo)微型月季特定萜類合成相關(guān)基因的表達(dá)。彭亮等[17]對MejA處理后的遠(yuǎn)志幼苗進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序,獲得與三萜合成相關(guān)的關(guān)鍵酶基因59條,其中AACT、MK、SE和β-AS等12個基因上調(diào)表達(dá)?!颈狙芯壳腥它c(diǎn)】鐵皮石斛(Dendrobiumofficinale)是中國傳統(tǒng)名貴中藥材,霍昕[18]等在鐵皮石斛莖和葉揮發(fā)油中都檢測到芳樟醇,相對含量分別為1.738%和1.284%。付濤等[19]提取鐵皮石斛試管苗不同部位揮發(fā)油,結(jié)果表明,芳樟醇占莖揮發(fā)油相對含量的0.77%,葉和根的揮發(fā)油沒有芳樟醇。鄒暉等[20]提取鐵皮石斛原球莖和花的精油中都含有芳樟醇,相對含量分別為3.57%和1.21%。目前,未見鐵皮石斛芳樟醇合酶基因的相關(guān)研究報道?!緮M解決的關(guān)鍵問題】本課題組根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測序獲得的鐵皮石斛芳樟醇合成酶帶5'末端的cDNA序列設(shè)計3 'RACE引物,采用RT-PCR技術(shù)克隆全長cDNA序列和ORF,分析芳樟醇合成酶基因在鐵皮石斛開花期不同器官中的表達(dá)及茉莉酸甲酯( methyljasmonate,MejA)誘導(dǎo)表達(dá)模式,以期為進(jìn)一步鑒定基因功能及分析鐵皮石斛單萜類代謝機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

      1 材料與方法

      1.1 試驗材料和試劑

      試驗材料為冠豸山種源鐵皮石斛,種植于福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)研究所資源圃。取開花期鐵皮石斛的花、葉、莖和根。用100 μ9.mL-1茉莉酸甲酯( MejA)噴霧鐵皮石斛葉片,取噴霧后2、5、8h的葉片。樣品用液氮速凍后,-70℃保存。

      Escherichia coli DH Sa由本實驗室保存;SteadyPure植物RNA提取試劑盒和SYBR Green Pro Taq HS預(yù)混型qPCR試劑盒購自湖南艾科瑞生物工程有限公司;反轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScriptrM Reverse Transcriptase和克隆載體pMD19-T購自寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司;DiaSpin柱式質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒、DNA膠回收試劑盒和San Taq PCR Mix預(yù)混液購自生工生物工程(上海)股份有限公司。

      1.2 試驗方法

      1.2.1總RNA提取和cDNA第1鏈合成按照SteadyPure植物RNA提取試劑盒的操作說明書提取總RNA,參照PrimeScript rM Reverse Transcriptase反轉(zhuǎn)錄試劑盒的操作說明,用隨機(jī)引物逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第1鏈。取10 μL花、根、莖和葉的cDNA混合,用于全長cDNA和ORF的克隆。

      1.2.2 DoLIS基因全長cDNA克隆 設(shè)計3 'RACE引物3LIS-F1、3LIS-F2和3 'adaptor引物dT-adapt、adapt(表1,下同)。以3LIS -F1和dT-adapt進(jìn)行第一輪PCR,引物3LIS -F2和adapt進(jìn)行巢式PCR,PCR程序:94℃預(yù)變性5min;94℃變性30s,52℃退火30 s,72℃延伸40 s,30個循環(huán);72 CC延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)回收、與pMD19-T連接后轉(zhuǎn)化DH Sa感受態(tài)細(xì)胞,涂布于帶氨芐霉素(Ampicillin)抗性平板后37℃培養(yǎng)過夜,挑取單克隆進(jìn)行PCR鑒定,鑒定為陽性的克隆送去測序。引物合成和測序委托生工生物工程(上海)股份有限公司。

      1.2.3 DoLIS基因ORF克隆 根據(jù)全長cDNA序列信息設(shè)計引物DoLIS-F(帶EcoRI酶切位點(diǎn))和DoLIS-R(帶Xho I酶切位點(diǎn)),以2μL混合的cDNA為模板,用引物DoLIS-F和DoLIS-R進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)程序為:94℃預(yù)變性5 min,然后94℃變性30 s,58℃退火30 s,72℃延伸2 min,30個循環(huán),最后72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)膠回收、克隆后測序。提取經(jīng)DNAMAN V6.0比對正確的陽性克隆質(zhì)粒pMD19-T-Do//S,-20℃保存。

      1.2.4 DoLIS基因生物信息學(xué)分析 利用ProtParam預(yù)測蛋白質(zhì)產(chǎn)物的理化性質(zhì)。通過NCBI的BLASTP在線比對,搜索氨基酸保守結(jié)構(gòu)域和同源性較高的其他物種的氨基酸序列,采用MEGA 6.0(NeighborJoining Tree, Bootstrap 1000)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹[21]。

      1.2.5 DoLIS基因表達(dá)分析 用超微量紫外可見光分光光度計( ND-IOOO)將鐵皮石斛各樣品cDNA第1鏈質(zhì)量濃度定量為200 ng.μL-1。根據(jù)已經(jīng)獲得的DoLIS基因全長cDNA序列設(shè)計引物L(fēng)IS-F和LIS-R,擴(kuò)增長度為30lbp。以鐵皮石斛Actin為內(nèi)參基因,引物為DoACT-F和DoACT-R,產(chǎn)物長度為215 bp。根據(jù)SYBR Green Pro Taq HS預(yù)混型qPCR試劑盒的說明書進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增(Roche LightCycler96)。反應(yīng)體系20 μL:cDNA模板2μL,SYBR GreenPro Taq HS 10 μL,上、下游引物各1μL,ddH2O補(bǔ)至20 μL。反應(yīng)程序:95℃預(yù)變性30 s;95℃變性10 s,61℃退火20 s,50個循環(huán),每個處理設(shè)置3個生物學(xué)重復(fù),3次技術(shù)性重復(fù)。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 DoLIS基因全長cDNA克隆

      以鐵皮石斛混合cDNA第1鏈為模板,經(jīng)二輪的PCR擴(kuò)增,獲得1條約600 bp的清晰條帶(圖1-A),PCR產(chǎn)物經(jīng)過克隆和測序,測序結(jié)果利用DNAMAN V6.0進(jìn)行序列拼接,結(jié)果表明獲得目的基因的3 '末端,cDNA全長2 844 bp(圖2),含有一個2 538 bp的ORF,編碼845個氨基酸,5'末端非翻譯區(qū)58 bp,3 '末端非翻譯區(qū)248 bp。

      2.2 DoLIS基因ORF的克隆

      以混合cDNA為模板,利用引物DoLIS-F和DoLIS-R進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果(圖1-B)顯示,在2 603 bp左右有1條亮帶,大小與預(yù)測的DoLIS基因ORF -致。PCR產(chǎn)物經(jīng)過克隆和測序,結(jié)果表明獲得了帶EcoR I和Xho I酶切位點(diǎn)的DoLIS基因ORF。提取質(zhì)粒pMD19-T-Do//S,-20℃保存,供進(jìn)一步試驗。

      2.3 DoLIS的生物信息學(xué)分析

      DoLIS蛋白的分子量為98.298 kD,帶正電荷氨基酸( Arg、Lys) 109個,帶負(fù)電荷氨基酸(Asp、Glu) 111個,理論等電點(diǎn)為7.04,不穩(wěn)定系數(shù)是46.29,屬不穩(wěn)定蛋白。

      使用BLAST P在線檢索結(jié)果表明,DoLIS蛋白具有Terpene_cyclase_plant_C1保守結(jié)構(gòu)域,E值為4.85×10-55,氨基酸序列與姬蝴蝶蘭(Phalaenopsisequestris,XP一020576697)和非洲油棕(Elaeisguineensis,XP一019708546)的LIS氨基酸序列相似度分別為62%、46%。將DoLIS蛋白的氨基酸序列與其他13個物種的LIS氨基酸序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,結(jié)果(圖3)表明,LIS分為(R) -(一)-LIS和(S) -(+) -LIS兩大分支,鐵皮石斛DoLIS與(S).(+).LIS聚在同一支,與姬蝴蝶蘭(XP一020576697)的LIS親緣關(guān)系最近,推測其屬于(S) -(+)-LIS。

      2.4 DoLIS基因在不同器官的表達(dá)

      利用熒光定量PCR法檢測鐵皮石斛開花期的花、莖、葉和根中DoLIS基因的相對表達(dá)量,結(jié)果如圖4所示,花、莖、葉和根中都能檢測到DoLIS基因的表達(dá),在葉片中的相對表達(dá)量最高,與花、莖和根的差異達(dá)到極顯著,花、莖和根之間相對表達(dá)量差異不顯著。

      2.5茉莉酸甲酯對DoLIS基因表達(dá)的影響

      利用熒光定量PCR法檢測鐵皮石斛葉片經(jīng)100μg.mL-1MejA噴霧處理2h、5h、8h后DoLIS基因的相對表達(dá)量,結(jié)果如圖5所示,MejA能誘導(dǎo)鐵皮石斛DoLIS基因的表達(dá),呈先上升后下降的趨勢。DoLIS基因在MejA處理后5h的相對表達(dá)量達(dá)到最高,是誘導(dǎo)前的3.88倍,隨后表達(dá)量開始下降,處理后8h回落到正常水平。

      3 討論與結(jié)論

      芳樟醇主要通過甲基赤蘚糖醇磷酸(Methylerythritol 4-phosphate,MEP)途徑合成[22]。萜烯合酶是芳樟醇等單萜類物質(zhì)合成的限速酶[23]。本研究克隆了鐵皮石斛DoLIS基因,DoLIS蛋白具有Terpene_cyclase_plant_C1保守結(jié)構(gòu)域,與其他物種的(S) -(+)-LIS聚在同一支,推測其屬于(S).(+).LIS。萜烯合酶功能復(fù)雜,同一種酶可以催化相同底物形成多種產(chǎn)物,也可以催化不同底物形成不同產(chǎn)物。YUE等[24]克隆了2個姜花的萜烯合酶基因HcTPS7and HcTPS8,HcTPS7催化GPP除了生成主要產(chǎn)物檜烯外,還可生成其他9種單萜副產(chǎn)物;HcTPS8催化GPP形成特異性產(chǎn)物芳樟醇,還可以催化法尼基二磷酸(FPP)合成α-香柑油烯,順式-a-紅沒藥烯,β-.金合歡烯和其他10個倍半萜。GREEN等[25]克隆了獼猴桃萜烯合酶基因AcNES1,能夠催化FPP和GPP形成倍半萜產(chǎn)物橙花叔醇和單萜產(chǎn)物芳樟醇。本研究克隆的DoLIS具有哪些催化活性還有待進(jìn)一步的研究。

      LIS是單萜類化合物芳樟醇合成限速酶。//S基因在仙女扇、金桂的雌蕊、雄蕊和花瓣中都有表達(dá),而葉片和花萼中不表達(dá)[10,26]。小蒼蘭的花瓣、雌蕊、雄蕊和葉片都能檢測到LIS基因的表達(dá),花瓣中的表達(dá)量最高[12]。鐵皮石斛DoLIS基因在根、莖、花和葉中都能檢測到表達(dá),葉片中的表達(dá)量最高。MeJA是植物次生代謝的重要信號分子,張文娟等[27]研究結(jié)果表明,MeJA可以上調(diào)三萜類代謝途徑關(guān)鍵酶基因HMGR、SQS和FPS的表達(dá),相應(yīng)的總?cè)坪恳裁黠@提高,但3個基因表達(dá)模式存在差異。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),MejA能上調(diào)DoLIS基因在鐵皮石斛葉中的表達(dá),在100 μg.mL-1MejA處理后Sh的相對表達(dá)量達(dá)到最高,是誘導(dǎo)前的3.88倍。MeJA上調(diào)鐵皮石斛DoLIS基因的表達(dá)是否促進(jìn)鐵皮石斛單萜類物質(zhì)芳樟醇的積累有待進(jìn)一步的分析。

      參考文獻(xiàn):

      [1] 姜冬梅,朱源,余江南,等.芳樟醇藥理作用及制劑研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志,2015,40 (18):3530-3533.

      JIANG D M,ZHU Y,YU J N,et al.Advances in research ofpharmacological effects and formulation studies of linalool[J]ChinaJournal of Chinese Materia Medica. 2015, 40(18):3530-3533.(inChinese)

      [2] 吳克剛,趙欣欣,段雪娟,等.芳樟醇?xì)庀嗫咕钚耘c作用機(jī)制[J].食品科學(xué)。2020,41 (1):61-67.

      WU K G,ZHAO X X,DUAN X J,et al.Antibacterial activity andmechaIlism of action of vapor-phase linal001[J].Food Sciemce,2020,4l(1):61—67.(inChinese)

      [3] QUEIROGA C L,DUARTE M C T,ⅪBEIRO B B,et al.LinaloolprodUCtiOn fbm thc leaVeS Of Bursera a10exylOn and itS antimiCrObialactivity[J].Fitoterpia 2007,78(4):327—328.

      [4] ALVIANO W S,MENDONCA.FILHO R R,ALVIANO D S,et al.Antimicrobial activity of Crotom cajucara Benth linalool—rich essenhaloil on artmcial biofilms and planhonic microorganisms[J].D,w,Microbiology and Immunolong,2005,20(2):101一105.

      [5] PARK S N,LIM Y K,F(xiàn)REIRE M O,et al.Amimicrobial effect of1ina100l and a-teIpine01 againSt periodOntopathiC and CariogeniCbacteria[J].Anaerobe,,2012,18(3):369 372.

      [6] BONNLANDER B,CAPPUCCIO R,LIVERANI F S,et al_Analysisof enantiomeric linal001 ratio ingreen and masted coffee[J]Flavourand Fragrance Journal,2006,21(4):637—641.

      [7] CASABIANCA H,GRAFF J,F(xiàn)AUGIER V,et al.Enantiomericdistribution SnldieS 0f lina100l and linalyl acetate.A powerful tool foraumenticity contro1 0fessemial oils[J]。Hrc-journal of High ResolutionChromatography 1998,2l(2):107—112.

      [8] CHEN X,YAUK Y,NIEUWENHUIZEN N J,et al.Characterisationof an(S)一limloo1 synmase from kiwifruit(Actinidia arguta)matCatalySeS me firSt C0mmitted Step in the prOduCtiOn Of noml lilaccompounds[J].Fumctional Plant Biology,2010,37(3):232—243.

      [9] CROWELL A L,WILLIAMS D C,DAVIS E M,et al.Molecularcloning and cbaracterization of a new linalool synthase[J].Archiveof Bio chemistry and Biophysics,2002,405(1):112—121.

      [10]唐麗,唐芳,段經(jīng)華,等,金桂芳樟醇合成酶基因的克隆與序列分析[J].林業(yè)科學(xué),2009,45(5):11-l9.

      TANG L,TANG F,DUAN J H,et al.ClOning and SeqUenCe analySiSof a hOm01090US linalOoi SyntbaSe gene inyolyeed in floral SCentS inOsmanthus fragrans var.thunbergii[J].Scientia Silvae Sinicae,2009,45(5):11一l9.(inChinese)

      [11]趙鐘鑫,王健,李琴,等,闊葉薰衣草芳樟醇合成酶基因的克隆與表達(dá)載體構(gòu)建[J].植物研究,2013,33(3):308—316.

      ZHAO Z X,WANG J,LI Q,et al.Cloning a hom01090us linaloolsynthase gene of Lavandula latifolia and constmction of planteXpression vector[J].Bulletin of Botanical Research,2013,33(3):308—316.(in Chinese)

      [12]樊榮輝,黃敏玲,鐘淮欽,等,小蒼蘭芳樟醇合酶基因的克隆及表達(dá)分析[J].中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報,2016,38(10):1185 1190.

      FAN R H,HUANG M L,ZHONG H Q,et al.C10ning and expressionof liml001 synthase gene in Freesia [J].Chinese Journal of CellBiology,2016,38(10):1185—1190.(inChinese)

      [13]劉偲,席婉,袁金梅,等.桂花‘蓮籽丹桂芳樟醇合酶基因OfrPS5的克隆及功能鑒定[J].園藝學(xué)報,2020,47(2):310—320.

      LIU C,XI W,YUAN J M,et al.M0leCular Cloning and fLlIlctiOnalCharaCterization of linal001 SyIlthaSe gene OfrPS5 in Osmanthusfragrans 'Lianzi danguif nowers[J].Actu Horticulturae Sinica,2020,47(2):310—320.(in Chinese)

      [14]HO T,MURTHY H N,PARK S.Methyl jasmonate induced oxidativeStreSS and aCCUmUlation of SeCOndary metab01iteS in plant Cell andorgan cultures [J].International Journal of Molecular Sciences, 2020,21 (3):716.

      [15]韋榮昌,覃芳,唐美瓊,等茉莉酸甲酯對羅漢果sos. cs和CAS基因表達(dá)的影響[J].北方園藝。2019 (2):42-47.

      WEI R C,QIN F, TANG M Q, et al_Effect of methyl jasmonate onexpression of SQS. CS and CAS genes in Siraitia grosvenorii [J]Northern Horticulture. 2019(2):42-47.( in Chinese)

      [16]王啟,劉廣達(dá),蘇蕾.水楊酸和茉莉酸甲酯對微型月季萜類次生代謝產(chǎn)物相關(guān)基因表達(dá)的影響[J].分子植物育種,2020, 18 (3):797- 803.

      WANG Q,LIU G D, SU L Effects of salicylic acid and methylJasmonate on expression of terpenoid secondary metabolites relatedgenes of miniature rose [J]. Molecular Plant Breeding, 2020,18 (3): 797803. (in Chinese)

      [17]彭亮,顏永剛,陳瑩,等,茉莉酸甲酯誘導(dǎo)下遠(yuǎn)志幼苗轉(zhuǎn)錄組分析及三萜類生物合成途徑關(guān)鍵酶基因挖掘[J].中草藥,2020, 51(9):2517-2529.

      PENG L,YAN Y G,CHEN Y. et al.Transcriptome analysis ofPolygala tenuifolia seedlings induced by methyl jasmonate and keygenes mimng for triterpenoid biosynthetic pathway[J]. ChineseTraditional and Herbal Drugs, 2020,5 1(9): 251 7-2529. (in Chinese)

      [18]霍昕,周建華,劉文煒,等,鐵皮石斛莖、葉揮發(fā)性成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā).2010, 22 (B08):43_45.

      HUO X, ZHOU J H. LIU W W, et al.Determination of chemicalconstituents of the volatile oil from stem and leaf of Dendrobiumcandidum Wall. Ex Lindl EJl. Natural Product Research andDevelopment, 2010, 22 (B08): 43-45. (in Chinese)

      [19]付濤,王志龍,林立,等.GC-MS法比較鐵皮石斛試管苗不同部位中揮發(fā)油的成分[J].中成藥,2015. 37 (10):22332238.

      FU T,WANG Z L,LrN L,et al.Comparison of volatile oils indifferent parts of Dendrobium officinale tube seedlings by GC-MS [J].Chinese

      Traditional Patent Medicine. 2015. 37( 10):2233-2238. (in Chinese)

      [20]鄒暉,王偉英,戴藝民,等.GC-MS法比較分析鐵皮石斛原球莖和花的揮發(fā)性成分[J].福建農(nóng)業(yè)科技。2019 (9):50-56.

      ZOU H,WANG W Y,DAI Y M, et al.Comparative analysis ofvolatile components of Dendrobium officinale protocorm and flower by GC-MS [J].Fujian Agricultural Science and Technology, 2019(9):5056. (in Chinese)

      [21] TAMURA K, STECHER G, PETERSON D, et al. MEGA6: molecularevolutionary genetics analysis version 6.0[J].Molecular Biology andEvolution. 2013. 30( 12): 2725-2729.

      [22] PULIDO P,PERELLO C,RODRIGUEZ-CONCEPCION M. Newinsights into plant isoprenoid metabolism [J].Molecular Plant, 2012,5 (5):964-967.

      [23] DUDAREVA N, KLEMPIEN A,MUHLEMANN J K,et al.Biosynthesis, function and metabolic engineering of plant volatileorgame compounds [J] The New Phytologist, 2013, 198(1):1632.

      [24] YUE Y C,YU R C,F(xiàn)AN Y P.Characterization of two monoterpenesynthases involved in floral scent formation in Hedvchium coronarium[J].Planta, 2014, 240 (4):745762

      [25] GREEN S A,CHEN x Y,NIEUWENHUIZEN N J,et al.Identification, functional characterization, and regulation of theenzyme responsible for floral (E)-nerolidol biosynthesis in kiwifruit(Actinidia chinensis) [J]. Journal of Experimental BotanV, 2012.63 (5):1951-1967.

      [26] DUDAREVA N,CSEKE L,BLANC V M. et al-Evolution of floralscent in Clarkia: Novel pattems of S-Iinalool synthase gene expressionin the C. breweri flower [J] The Plant Cell, 1996,8(7):1137-1148.

      [27]張文娟,曹小迎,蔣繼宏茉莉酸甲酯誘導(dǎo)大戟三萜類代謝的研究[J].廣西植物,2015, 35 (4):591-597.

      ZHANG W J,CAO X Y,JIANG J Triterpene biosynthesis inEuphorbia pekinensis induced by methyl jasmonate [J]. Guihaia.2015. 35 (4): 591-597. (in Chinese)

      (責(zé)任編輯:林海清)

      作者簡介:林江波(1976-),男,碩士,副研究員,研究方向:農(nóng)業(yè)生物技術(shù)(E-mail: 345953257@qq.com)

      通信作者:戴藝民(1969-),男,博士,研究員,研究方向:農(nóng)業(yè)生物技術(shù)(E-mail: dymttcn@163.com)

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