白屈菜對(duì)大鼠軟組織損傷中炎性因子1L-1β的影響

王 研，鞠薇薇，夏榮鈞，丁 哲，李衛(wèi)東，林黎娟

(1. 遼東學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，遼寧 丹東 118003; 2. 丹東市第一醫(yī)院 麻醉科，遼寧 丹東 118002)

急性軟組織損傷是指人體的皮膚、皮下組織、肌肉、肌腱、筋膜、韌帶、關(guān)節(jié)嚢和神經(jīng)、血管等遭到外來(lái)暴力傷害所引發(fā)的急性損傷，但無(wú)骨折、脫位。主要表現(xiàn)為局部疼痛腫脹、瘀斑及功能障礙等，是運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)中的一種常見(jiàn)病[1]，中醫(yī)治療急性軟組織損傷有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，如療效可靠、副作用小等。白屈菜是一種傳統(tǒng)滿藥，近年來(lái)藥理學(xué)研究表明，白屈菜堿具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、解痙、抗炎、降低血管通透性、減輕腫脹等多方面的藥理作用，滿族民間驗(yàn)方中常使用白屈菜治療急性軟組織損傷，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究白屈菜對(duì)大鼠急性軟組織損傷中1L-1β含量的變化，探討其治療急性軟組織損傷的機(jī)制，為滿藥的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠52只(48只正式實(shí)驗(yàn)，余備用)，雄性，體重220±10 g，遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司提供。動(dòng)物房清潔、通風(fēng)、干燥，SD大鼠用固體干燥飼料喂食，自由飲水，大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 w后正式實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 試驗(yàn)藥物與試劑

硫化鈉由成都金山化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為060320；白屈菜購(gòu)于百草廳大藥房，委托中醫(yī)院制劑室制備成外用藥膏；扶他林由北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為國(guó)藥準(zhǔn)字H11021640；IL-1β指標(biāo)檢測(cè)試劑和Rat 1L-1 beta ELISA Kit均由ABclonal Biotechnology公司生產(chǎn)，武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司進(jìn)口分裝，批號(hào)為968NM74320,規(guī)格為96孔/盒。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)3 w后，將48只大鼠按體重編號(hào)，編號(hào)完成后按隨機(jī)數(shù)字表法分為4個(gè)大組(n=12)，即實(shí)驗(yàn)組(白屈菜組)、藥物對(duì)照組(扶他林組)、模型對(duì)照組、空白對(duì)照組。各大組再分為4 個(gè)小組(n=3)，即第1、3、7、10 d組。

1.2.2動(dòng)物造模

按參考文獻(xiàn)[2]～[4]的方法，在造模前一天將所有大鼠左側(cè)臀部及大腿用7%硫化鈉溶液脫毛, 將模型對(duì)照組、白屈菜組、扶他林組大鼠采用打擊法進(jìn)行造模。大鼠側(cè)臥于自制的軟組織打擊器上,用提前準(zhǔn)備好的直徑20 mm、100 g砝碼,沿自制的直徑23 mm、高80 cm的PVC管中自由下落至左側(cè)下肢標(biāo)記處，反復(fù)8次，造成軟組織損傷模型。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)給藥

大鼠造模成功后1 h開(kāi)始敷藥，將醫(yī)用棉布裁剪成超過(guò)造模邊緣0.5 cm的圓形，將白屈菜藥膏涂抹于棉布上外敷于損傷處，并用3M透明膠貼粘貼，每次敷藥4 h，為防止大鼠撕咬敷藥處，用伊麗莎白圈套于大鼠頸部，并全程守護(hù)，每日固定時(shí)間為大鼠敷藥，共10 d。

1.2.4 臨床觀察

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，于造模成功大鼠清醒后及造模后第1、3、7、10 d觀察大鼠軟組織損傷癥狀，并參照王佳[5]等的軟組織損傷評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)(見(jiàn)表1)，由同一人進(jìn)行盲評(píng)。

表1 大鼠軟組織損傷癥候指數(shù)評(píng)分表

1.2.5 指標(biāo)檢測(cè)

造模次日為第1 d，于造模后第1、3、7、10 d分別于各組處死3只大鼠，在損傷中心部位切取切約0.5 cm×0.5 cm×0.25 cm肌肉組織，將肌肉組織用生理鹽水漂洗1 min，吸干后用電子天平秤取15 mg，按10 mg∶0.5mL比例加入0.9%生理鹽水，用玻璃組織勻漿器勻漿，待標(biāo)本充分勻漿后，導(dǎo)入事先準(zhǔn)備好的試管中編號(hào)，以2 500 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min，收集離心后的上清液，后放入-80 ℃深凍冰箱中保存?zhèn)溆?。采用酶?lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)組織中1L-1β濃度。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析方法

2 結(jié)果

2.1 大鼠軟組織損傷癥候指數(shù)評(píng)分

造模后白屈菜組、扶他林組和模型對(duì)照組大鼠損傷證候指數(shù)評(píng)分隨時(shí)間推移而逐漸降低，造模后第0、1、10 d白屈菜組和扶他林組相較于模型對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，第3、7 d評(píng)分較造模后白屈菜組、扶他林組與模型對(duì)照組在第1、3 d無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,白屈菜組與扶他林組較模型對(duì)照組在第7、10 d評(píng)分明顯降低(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠軟組織損傷癥候指數(shù)評(píng)分

注：*P<0.05，與模型組相比較

2.2 各組大鼠肌肉組織 IL-1β含量比較

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠損傷肌肉組織中IL-1β含量，造模后第1 d白屈菜組、扶他林組與模型對(duì)照組較空白對(duì)照組比較均升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，白屈菜組、扶他林組與模型對(duì)照組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，白屈菜組與扶他林組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；造模后第3 d，白屈菜組、扶他林組、模型對(duì)照組較造模后第1 d均增高，與模型組比較白屈菜組、扶他林組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，白屈菜組與扶他林組相比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；造模后第7 d，與空白對(duì)照組比較白屈菜組、扶他林組與模型對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，白屈菜組與扶他林組相較于模型對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，白屈菜組與扶他林組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；造模后第10 d天，與空白對(duì)照組比較，白屈菜組、扶他林組與模型對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與模型對(duì)照組比較，白屈菜組、扶他林組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表3和圖1。

表3 各組肌肉組織中1L-1β濃度結(jié)果單位：ng/L，n=3)

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05 ；與空白對(duì)照組比較，☆P<0.05

3 討論

IL-1是一組炎癥前期細(xì)胞因子，而IL-1β是其主要的分泌形式，對(duì)炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生和加重方面發(fā)揮著重要作用，對(duì)炎癥的產(chǎn)生和促進(jìn)發(fā)揮著重要作用，主要表現(xiàn)為：不僅可以啟動(dòng)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，還可以刺激產(chǎn)生相關(guān)的炎癥遞質(zhì)和其他細(xì)胞因子而引起組織損傷?，F(xiàn)有研究已經(jīng)表明在血液及局部組織中IL-1β的含量與炎癥的嚴(yán)重程度成正相關(guān)，所以在相關(guān)炎癥的臨床和實(shí)驗(yàn)研究中IL-1β常被用來(lái)判斷疾病嚴(yán)重程度和評(píng)價(jià)藥效的可靠指標(biāo)[6]。

造模后第1 d，白屈菜組、扶他林組和模型對(duì)照組大鼠肌肉組織中IL-1β含量較空白對(duì)照組均明顯升高，表明造模成功，證明實(shí)驗(yàn)所采用的造模方法已經(jīng)造成大鼠急性軟組織損傷，白屈菜組、扶他林組與模型對(duì)照組比較IL-1β含量降低，說(shuō)明白屈菜和扶他林可以抑制炎性因子的釋放，相較于模型對(duì)照組抑制效果還不明顯(P>0.05)。造模后第3 d，白屈菜組、扶他林組、模型對(duì)照組大鼠損傷肌肉組織中IL-1β含量達(dá)到最高值，提示損傷組織炎性因子釋放達(dá)到高峰，炎癥反應(yīng)最為明顯。白屈菜組與扶他林組相較于模型對(duì)照組IL-1β含量降低，提示白屈菜與扶他林可以有效抑制組織釋放炎性因子，有一定的治療效果。造模后第7 d，白屈菜組、扶他林組、模型對(duì)照組大鼠損傷肌肉組織中IL-1β含量較第3 d下降，提示炎癥因子釋放減少，損傷組織已進(jìn)入恢復(fù)期，且白屈菜組與扶他林組比模型對(duì)照組IL-1β含量低，提示兩種藥物對(duì)抑制炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)有一定的效果。造模后第10 d，造模各組大鼠肌肉組織中IL-1β含量持續(xù)降低，其中白屈菜組與扶他林組比模型對(duì)照組IL-1β含量低，提示白屈菜和扶他林對(duì)抑制炎癥因子的釋放具有一定的作用，但與空白對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示即使不予治療，大鼠在肌肉組織損傷后第10 d組織也會(huì)逐步愈合，且白屈菜組與扶他林組治療效果相近(P>0.05)。

通過(guò)對(duì)大鼠造模后局部組織肌肉顏色、腫脹程度、皮下淤血情況以及肢體活動(dòng)障礙情況的觀察，統(tǒng)計(jì)大鼠軟組織損傷癥候指數(shù)評(píng)分，提示造模后從第1 d到第10 d，白屈菜組、扶他林組以及模型對(duì)照組損傷證候指數(shù)評(píng)分逐漸降低，在造模后第0、1 d，造模的3組大鼠軟組織損傷評(píng)分無(wú)差異(P>0.05)，造模后第3 d，評(píng)分達(dá)到高峰，提示炎癥反應(yīng)癥狀在造模后第3 d最為嚴(yán)重，造模后第3、7 d白屈菜組與扶他林組評(píng)分低于模型對(duì)照組，提示白屈菜與扶他林對(duì)緩解軟組織損傷后的炎癥反應(yīng)癥狀有一定療效。造模后第10 d，白屈菜組與扶他林組評(píng)分相較于模型對(duì)照組，損傷指數(shù)評(píng)分無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，大鼠在實(shí)驗(yàn)后第10 d，脫毛區(qū)鼠毛已經(jīng)開(kāi)始生長(zhǎng)，大鼠趨向痊愈，白屈菜組與扶他林組療效無(wú)顯著性差異。結(jié)合炎性因子實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提示大鼠軟組織損傷后10 d，敷藥治療與不治療無(wú)顯著性差異，可以考慮在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中適當(dāng)縮短實(shí)驗(yàn)的時(shí)間。

4 結(jié)論

白屈菜能夠抑制大鼠急性軟組織損傷后組織釋放IL-1β，可以有效緩解損傷局部組織炎癥反應(yīng)，對(duì)治療急性軟組織損傷有一定療效。