皮肌炎/多發(fā)性肌炎伴人巨細(xì)胞病毒IgM抗體陽性患者的肺間質(zhì)病變

尹春香，趙琳，王曉非，張曉莉

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，沈陽 110004）

皮肌炎/多發(fā)性肌炎是一種主要累及橫紋肌的炎癥細(xì)胞浸潤伴肌纖維變性壞死為特征的自身免疫性疾病。目前為止發(fā)病機制未明，一般認(rèn)為該病的發(fā)生與感染、遺傳、腫瘤、藥物、環(huán)境等因素相關(guān)，易伴肺部受累，預(yù)后不良。肺間質(zhì)病變是皮肌炎/多發(fā)性肌炎最常見的并發(fā)癥，且是皮肌炎/多發(fā)性肌炎高死亡率的主要原因［1］。人巨細(xì)胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）為皰疹病毒科β屬的線性雙鏈DNA病毒，基因組長約235～240 kb，相對分子量為150×103～160×105。有研究發(fā)現(xiàn)感染HCMV的皮肌炎患者死亡率明顯高于未感染患者，說明存在HCMV加重皮肌炎患者病情的可能性。然而到目前為止，尚無研究提供明確證據(jù)表明HCMV感染對皮肌炎/多發(fā)性肌炎肺間質(zhì)病變的影響。血清涎液化糖鏈抗原（Krebs von den Lungen-6，KL-6）是KOHNO等［2］于1985年發(fā)現(xiàn)并命名的高相對分子質(zhì)量糖蛋白，屬于黏液素黏蛋白家族，主要表達(dá)在肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞，正常的肺組織極少量表達(dá)入血，但在肺間質(zhì)病變患者中卻是有意義的升高，是一個與肺泡損傷直接相關(guān)的血清學(xué)標(biāo)志。本研究通過檢測皮肌炎/多發(fā)性肌炎伴HCMV-IgM抗體陽性患者肺間質(zhì)病變及血清KL-6的表達(dá)水平，從而了解HCMV-IgM抗體陽性對皮肌炎/多發(fā)性肌炎患者肺間質(zhì)病變的影響。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2014年6月至2016年4月于中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院風(fēng)濕免疫科就診的皮肌炎/多發(fā)性肌炎患者的臨床資料，病例均符合BOHAN等［3］皮肌炎/多發(fā)性肌炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。肺間質(zhì)病變的診斷依據(jù)胸部高分辨率CT檢查，主要表現(xiàn)為磨玻璃密度影、實變影、網(wǎng)格及蜂窩狀改變等典型的影像學(xué)特征。排除標(biāo)準(zhǔn)：入院前6周接受過激素、生物制劑、免疫抑制劑治療，并且患有其他基礎(chǔ)疾病、其他感染、腫瘤、其他肺部疾病等。共納入50例皮肌炎/多發(fā)性肌炎患者，其中女24例，男26例，平均年齡（52.0±7.8）歲。HCMV-IgM抗體陽性患者20例（HCMV-IgM抗體陽性組），其中女10例，男10例，年齡（52.5±8.1）歲，病程（5.15±2.81）個月；HCMV-IgM抗體陰性患者30例（HCMV-IgM抗體陰性組），其中女14例，男16例，年齡（51.4±10.2）歲，病程（5.25±2.46）個月。記錄所有研究對象的吸煙情況（吸煙、曾經(jīng)吸煙、從不吸煙）。HCMV-IgM抗體陽性組吸煙4例，曾經(jīng)吸煙4例，從不吸煙12例；HCMV-IgM抗體陰性組吸煙5例，曾經(jīng)吸煙7例，從不吸煙18例。2組間年齡、性別、病程、吸煙情況無統(tǒng)計學(xué)差異。本研究為經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)進行的人體研究。

1.2 研究方法

1.2.1 血液標(biāo)本的收集：采集所有研究對象清晨空腹靜脈血2 mL，4 ℃放置自然凝固后，3 000 r/min離心10 min，分離血清后置于-20 ℃冰箱凍存。

1.2.2 血清中KL-6的測定：應(yīng)用酶促化學(xué)發(fā)光免疫測定兩步夾心法測KL-6的血清濃度，采用日本富士瑞必歐全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)Lumipulse G1200儀器；KL-6試劑盒購于日本富士瑞必歐株式會社。第一反應(yīng)：抗體結(jié)合粒子中的抗KL-6抗體與樣品中包含的KL-6結(jié)合形成免疫復(fù)合物。樣品、KL-6標(biāo)準(zhǔn)溶液10 μL自動與樣品稀釋液180 μL混合。在250 μL結(jié)合有抗KL-6抗體的抗體結(jié)合粒子中，加入已經(jīng)被稀釋的樣品、KL-6標(biāo)準(zhǔn)溶液10 μL，攪拌后，在37 ℃的條件下孵育10 min。清洗：去除反應(yīng)液后，清洗抗體結(jié)合粒子，先用磁鐵富集粒子，然后去除反應(yīng)液。反復(fù)注入及去除清洗液，達(dá)到清洗粒子的目的。第二反應(yīng)：抗KL-6抗體結(jié)合的樣品中的KL-6與堿性磷酸酶標(biāo)記抗KL-6抗體形成免疫復(fù)合物，將250 μL酶標(biāo)記抗體與抗體結(jié)合粒子混合，在37 ℃條件下孵育10 min。清洗：再次去除反應(yīng)液，清洗抗體結(jié)合粒子，先用磁鐵富集粒子，然后去除反應(yīng)液。反復(fù)注入及去除清洗液，達(dá)到清洗粒子的目的。酶反應(yīng)：在粒子中加入底物液200 μL，攪拌后，在37 ℃下使其反應(yīng)5 min。測光：在波長477 nm下，測定具有最大發(fā)光強度的發(fā)光量。

1.2.3 臨床實驗室檢查指標(biāo)：皮肌炎/多發(fā)性肌炎患者HCMV-IgM抗體檢測結(jié)果來自我院病毒檢驗室，檢測方法為化學(xué)發(fā)光免疫分析法。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

HCMV-IgM抗體陽性組和HCMV-IgM抗體陰性組肺間質(zhì)病變的患者比例分別為95%（19/20）和53%（16/30），KL-6表達(dá)水平分別為（316.30±78.54）和（238.77±80.71）U/mL，HCMV-IgM抗體陽性組的肺間質(zhì)病變的患者比例和KL-6表達(dá)水平均明顯高于HCMV-IgM抗體陰性組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。

3 討論

肺部是皮肌炎/多發(fā)性肌炎最常見的累及部位，大約78%的病例被診斷有肺間質(zhì)的改變［4］。同時，肺間質(zhì)病變與皮肌炎/多發(fā)性肌炎的死亡率明顯有關(guān)，EUSTAR數(shù)據(jù)庫也證實了這一觀點［5］，早期明確診斷對于治療和預(yù)后有重要意義。

HCMV具有巨大的蛋白質(zhì)組和編碼能力，在人群中感染率很高。其具有潛伏-活化的生物學(xué)特性，一旦侵入人體將長期或終身存在于體內(nèi)，在免疫正常的健康個體中多呈無癥狀感染，但在免疫抑制個體中易引起特異性器官損害。HCMV相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，HCMV的病毒DNA檢出陽性率較低［6］。HCMV的抗體檢測研究發(fā)現(xiàn)，HCMV-IgM陽性表示最近活動性HCMV感染。而且RASMUSSEN等［7］發(fā)現(xiàn)，HCMV-IgM定量可能與HCMV感染的嚴(yán)重程度相關(guān)。MARIE等［8］發(fā)現(xiàn)，感染HCMV的皮肌炎患者死亡率明顯高于未感染的皮肌炎患者，說明存在HCMV加重皮肌炎患者病情的可能性。然而到目前為止，尚無研究提供明確證據(jù)證實HCMV感染對皮肌炎/多發(fā)性肌炎病情的誘發(fā)或促進等影響。

KL-6是一種相對高分子量的糖蛋白，主要表達(dá)在肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞，它能夠影響肺部成纖維細(xì)胞的凋亡，從而加重肺部纖維化［9］。KUBO等［10］發(fā)現(xiàn)，血清KL-6水平可能預(yù)示皮肌炎/多發(fā)性肌炎的肺間質(zhì)病變程度。HIRASAWA等［11］發(fā)現(xiàn)，肺纖維化患者小氣道內(nèi)上皮細(xì)胞襯液KL-6增加可導(dǎo)致肺泡纖維變性。SATO等［12］認(rèn)為，血清KL-6是可以反映肺損傷的血清學(xué)特異性指標(biāo)。同時，OHNISHI等［13］的研究也表明，KL-6可以作為肺間質(zhì)病變的生物化學(xué)指標(biāo)之一。最新的一個橫斷面研究［14］發(fā)現(xiàn)，血清KL-6糖蛋白可以作為預(yù)測結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺疾病的生物標(biāo)志物。由此可見，KL-6對于肺間質(zhì)病變有重要意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，皮肌炎/多發(fā)性肌炎伴HCMV-IgM抗體陽性組肺間質(zhì)病變的患者比例明顯高于HCMV-IgM抗體陰性組，HCMV-IgM抗體陽性組血清KL-6的表達(dá)水平明顯高于HCMV-IgM抗體陰性組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義?？梢奌CMV感染后出現(xiàn)的HCMV-IgM抗體，對皮肌炎/多發(fā)性肌炎患者的肺間質(zhì)病變可能有一定的促進作用，而且HCMV-IgM抗體陽性提示近期存在HCMV感染，所以在治療皮肌炎/多發(fā)性肌炎原發(fā)病的同時，也應(yīng)該對HCMV-IgM抗體陽性的皮肌炎/多發(fā)性肌炎患者給予抗病毒治療。早期診斷和管理肺間質(zhì)病變至關(guān)重要，以防止終末期疾病不可逆的肺間質(zhì)病變，從而減少患者的不良預(yù)后及降低死亡率。本研究的不足之處在于納入樣本量不十分充足，可能導(dǎo)致結(jié)論的局限性和偏倚。在今后的臨床實踐過程中，將繼續(xù)納入、整理和分析相關(guān)資料，并進行歸納總結(jié)。