高效液相色譜法測定飲料中咖啡因

鐘穎

摘要：本文主要針對高效液相色譜法測定飲料中咖啡因中的含量進(jìn)行了研究，其次闡述了高效液相色譜法在應(yīng)用中的實驗過程，并根據(jù)相應(yīng)的實驗結(jié)果展開了飲料中咖啡因的測定價值，希望為相關(guān)研究學(xué)者提供一定的參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;咖啡因含量;標(biāo)準(zhǔn)曲線;咖啡因

1.咖啡因簡述

咖啡因是一種有機(jī)物質(zhì)，能夠從咖啡豆以及茶業(yè)等物質(zhì)提煉的一種物質(zhì)，它又稱之為C8H10N4O2?，F(xiàn)階段，含有咖啡因的飲料被廣大青少年所喜愛，但咖啡因的攝入過量會影響肝臟等功能的正常運(yùn)行，同時也會影響人們的身體健康，孕婦使用會提升流產(chǎn)的幾率，嚴(yán)重的情況會導(dǎo)致女性出現(xiàn)不孕不育。本文通過高效液相色譜法對飲料中咖啡因的含量進(jìn)行了分析，并且可以得到有效的精準(zhǔn)度。這一方法的應(yīng)用操作便捷，并廣泛的應(yīng)用于飲料中的咖啡因含量工作。

2.咖啡因含量測定方法與分析方法

2.1傳統(tǒng)測定方法

傳統(tǒng)的測定方法主要通過萃取分光光度法進(jìn)行飲料含量中的咖啡因測定，雖然有一定的簡單性，但是在提取的過程中，會摻雜一定的雜質(zhì)，因此，在檢測過程中，最終的檢測結(jié)果會出現(xiàn)較大的誤差。如圖1所示：

2.2高效液相色譜法

高效液相色譜法在進(jìn)行飲料中咖啡因含量測定過程中，其主要優(yōu)勢在于可以有效的將咖啡因中的雜質(zhì)以及單寧酸等物質(zhì)進(jìn)行有效的分離，在進(jìn)行測定過程中，沒有雜質(zhì)的情況下，最終的測定結(jié)果會更加精準(zhǔn)，但是在測定過程中必須要進(jìn)行定量的精準(zhǔn)操作。

3.高效液相色譜法測定飲料中咖啡因含量的實驗

3.1實驗設(shè)備和試劑

在進(jìn)行飲料咖啡因含量測定過程中，高效液相色譜法實驗在標(biāo)準(zhǔn)化實驗室內(nèi)進(jìn)行。實驗設(shè)備與儀器：型號為安捷倫1260檢測裝置、自動進(jìn)樣器、在線脫氣裝置、超純水機(jī)設(shè)備，抽濾裝置、天平、超聲波脫氣機(jī)、10、100毫升容量瓶以及燒杯等。試劑：咖啡因、東鵬特飲、甲醇試劑茶等。在選擇實驗設(shè)備以及試劑過程中要結(jié)合實際需求進(jìn)行儀器設(shè)備的挑選，從而保證實驗在進(jìn)行過程中的順利性。

3.2溶液配制

先配置磷酸鹽緩沖液，其次配置1毫克的咖啡因標(biāo)準(zhǔn)儲備液，最后在配置咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液。在配置磷酸鹽緩沖液過程中，利用二次次蒸餾水配置0.01摩爾的磷酸二氫鉀溶液，最后在將其溶液的pH值調(diào)整到3.5左右。1毫克儲備液的配置利用甲醇，并將其溶液定制到100毫升左右。最后在配置咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液過程中，要將其配置成150微克、125微克、100微克、50微克以及25微克的咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液，最后并對其進(jìn)行超聲脫氣。

3.3樣品處理

樣品處理中，雪碧以及可樂中含有一定的碳酸。在進(jìn)行處理過程中，首先要各取30毫升，并將其放在50毫升的燒杯內(nèi)，在進(jìn)行超聲波脫氣，其時間放置到15分鐘左右，直至飲料中的二氧化碳消除。在加水，將原有的濃度稀釋到1/10，在通過0.45微米的濾膜進(jìn)行過濾，并將其做為實驗檢測的樣本[1]。

3.4實驗所需高效液相色譜條件

高效液相色譜中的流動性對于分離來說有一定的而影響，此次實驗將已經(jīng)配置好的摩爾磷酸鹽緩沖液溶液進(jìn)行過濾，在進(jìn)行15分鐘左右的脫氣處理，并按照3：7的配比進(jìn)行相應(yīng)的配比，并制備500毫升的流動相。在進(jìn)行檢測過程中，按照色譜中的要求進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整，并檢測磷酸鹽、甲醇，其溶液的每分鐘流速為1毫升左右。最后在進(jìn)行高效液相色譜儀，并將其基礎(chǔ)線一直處于平直狀態(tài)。

3.5繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

當(dāng)高效液相色譜儀中的基線達(dá)到平穩(wěn)之后，在每20微升中的濃度設(shè)定相應(yīng)的咖啡溶液，按照一定的順序分別進(jìn)樣三次，直至其每個進(jìn)樣色譜中的面積相同，通過相應(yīng)的測試將其記錄下來，并在此基礎(chǔ)上繪制相應(yīng)的曲線圖[2]。

3.6加樣回收率實驗

在進(jìn)行實驗過程中，將每毫升含量50毫克以及100毫升的咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液分別添加到不含咖啡因的飲料中，并根據(jù)實驗處理方法計算出實際空白的咖啡濃度中，最后在計算出空白介質(zhì)中的咖啡因含量濃度，根據(jù)計算結(jié)果顯示，實驗中的誤差范圍在接受的范圍內(nèi)，其中空白介質(zhì)中咖啡因濃度分別是每毫升50.5微克、每毫升100.24微克，回收率分別是101%、100.2%。

3.7各樣品中咖啡因含量的測定

在進(jìn)行樣品測樣分析時，要按照原有的時間找到咖啡因中的對應(yīng)色譜峰，并記錄好各個時間段的峰面積。在測定過程中，要反復(fù)將其進(jìn)樣三次，直到每次的峰面積達(dá)到一致后，在進(jìn)行相應(yīng)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計。最后根據(jù)咖啡因中的溶液標(biāo)準(zhǔn)計算出樣品中的咖啡濃度，并根據(jù)相應(yīng)的稀釋倍數(shù)將咖啡因中的濃度計算出來。

結(jié)論

綜上所述，高效液相色譜法測定飲料中咖啡因含量測量在應(yīng)用中具備一定的高效性，同時在進(jìn)行檢測中，具備較高的敏捷度和靈敏度，因此，在測量飲料中咖啡因的含量時一般采用高效液相色譜法進(jìn)行操作，同時在應(yīng)用中具備較好的實用價值，并為人們的身體健康提出了一定的安全保障。

參考文獻(xiàn)

[1]曾延靈，樸杰，全春梅.超高效液相色譜法測定飲料中咖啡因含量[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2018，9（21）：5721-5724.

[2]李花覺.超高效液相色譜法檢測飲料中山梨酸、苯甲酸、糖精鈉、咖啡因、安賽蜜[J].現(xiàn)代食品，2018，11（21）：137-139.