清胞衣顆粒對流產(chǎn)后大鼠子宮組織的病理影響

劉墨林 崔瑋麟 張童山 李 淵 王杰瓊* 王 平

（1 山東中醫(yī)藥大學藥學院，山東 濟南 250355；2 山東中醫(yī)研究院中藥藥理實驗室，山東 濟南 250000）

目前，我國人工流產(chǎn)已達到較高數(shù)量，有研究顯示，我國每年約有1000 萬例人工終止妊娠［1］，其中重復流產(chǎn)率更是高達50% 以上［2］，且流產(chǎn)婦女的年齡有年輕化趨勢［1］。子宮為婦女生產(chǎn)前后變化最大的器官，常出現(xiàn)的病癥有產(chǎn)后子宮收縮不好、有壓痛、惡露持續(xù)不斷等［3］。由流產(chǎn)所導致的最嚴重問題是子宮出血量大、恢復時間久和恢復不完全等［4］。產(chǎn)后子宮功能的恢復對于產(chǎn)后婦女來說是尤為重要的［5］。清胞衣顆粒中包含赤芍、蒲黃、桃仁、益母草等中藥［6］。目前已知清胞衣顆粒主治血瘀內(nèi)停胞宮證，對藥物引起的不完全流產(chǎn)有較好的醫(yī)治效果，但對于此藥物的作用機制與規(guī)律仍然不清。本實驗旨在通過分析子宮系數(shù)和子宮組織HE 病理染色切片，觀察清胞衣顆粒對大鼠流產(chǎn)后子宮的病理影響和修復功能。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 SD 大鼠60 只，均為雌鼠，體質(zhì)量（200±20）g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，大鼠飼養(yǎng)于23～25 ℃的環(huán)境中，自由進食、攝水。動物許可證號：SCXK（京）2016-0006。

1.1.2 實驗藥品及試劑 米非司酮混懸液，由上海新華聯(lián)制藥有限公司提供，批號：c019170901；米索前列醇，由浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號：170903；清胞衣顆粒，自制。益母草顆粒，由河南輔仁堂制藥有限公司生產(chǎn)，批號：20161102；蒸餾水；4% 甲醛溶液，由萊陽市康德化工有限公司生產(chǎn)，批號：20140326；無水乙醇，由國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)，批號：100092683；二甲苯，由國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)，批號：10023418；蘇木素染液套裝，由武漢谷歌生物科技有限公司生產(chǎn)，批號：G1005；鹽酸，由國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)，批號：10011008；氨水，由國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)，批號：10002118；中性樹膠，由國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)，批號：10004160。

事實上，卡夫卡心中的父親形象已經(jīng)超越了一般的倫理概念范疇而開始具有宗教學、社會學等多個層面的含義，他把對父親的感受和現(xiàn)實世界的運行機制關聯(lián)起來，由此在他心中也形成了一種蘊含著極其復雜的社會文化內(nèi)涵和個人情感的體驗?？ǚ蚩ǖ母赣H形象與他所認知的世界有著深遠的聯(lián)系，對于父親形象的描繪和建構，來自于卡夫卡作為一個敏感作家的親身生存體驗，也來自于他的文化記憶和積淀，成為了一個關于現(xiàn)實世界的絕妙比喻。這也是為什么在卡夫卡的許多作品中，世界就像是一個沒有人能夠窺視到全貌，弄清楚結構的錯綜復雜的迷宮，人們永遠無法真正接近它，卻又無時無處不感受到它的威嚴和壓迫。

1.1.3 儀器 脫水機，型號JJ-12J，由武漢俊杰電子有限公司生產(chǎn)；包埋機，型號JB-P5，由武漢俊杰電子有限公司生產(chǎn)；病理切片機，型號RM2016，由上海徠卡儀器有限公司生產(chǎn)；凍臺，型號JB-L5，由武漢俊杰電子有限公司生產(chǎn)；組織攤片機，型號KD-P，由浙江省金華市科迪儀器設備有限公司生產(chǎn)；烤箱，型號GFL-230，由天津市萊玻瑞儀器設備有限公司生產(chǎn)；載玻片及蓋玻片，型號10127105P-G，由江蘇世泰實驗器材有限公司生產(chǎn)；正置光學顯微鏡，型號Nikon Eclipse E100，由日本尼康生產(chǎn)；成像系統(tǒng)，型號NIKON DS-U3，由日本尼康生產(chǎn)。

現(xiàn)今流行一句話，“這是個看臉的社會”，并為此專門誕生了新的詞匯“顏值”，以此來評價和劃分人的不同。按說這已經(jīng)不是一天兩天的現(xiàn)象了，各種方興未艾的選美大賽，顏值擔當?shù)拿餍撬鶑氖碌难菟噴蕵返谋├袠I(yè)，乃至于招工用人明確標出的要求“形象好、氣質(zhì)佳”，更不消說找對象的熱門標準“高富帥”或“白富美”。對于顏值的過分迷戀和執(zhí)著，漸成為整個社會的嗜好。這種對人外表要求的價值觀波及開來，流行得那么自然自樂，似乎有以表象掩蓋實質(zhì)之嫌，又有以小搏大之虞。

1.2.1 流產(chǎn)模型的制備 取成年健康的大鼠，雌雄以2∶1合籠使其自行交配，此后每24 h 陰道涂片鏡檢一次，直至鏡檢結果見精子，即雌鼠受孕第1 天，此后正常自由進食飲水。第7 天將動物（雌性大鼠）隨機選取10 只做為正常對照組，其余大鼠均繼續(xù)造模。要進行造模的大鼠均灌胃喂予劑量為8.3 mg/kg 的米非司酮混懸液（早上8：30）和劑量為126 mg/kg 的米索前列醇（下午4：30）3 d，此時造模后的大鼠即為所需的流產(chǎn)模型，繼而將流產(chǎn)模型的大鼠分為模型對照組、益母草組和清胞衣顆粒高、中、低劑量組，共6 組，每組10 只并分組給藥。每組大鼠均等體積灌胃給藥，共觀察5 d。最后一次給藥30 min 后處死，取子宮待測相關指標。

綜合上述各種理論，Doolittle指出盡管就合作學習的構成還未完全達成一致，但其中五大要素是至關重要的：1）積極的相互依靠，2）面對面的互動，3）個人的義務4）小組&人際溝通技巧，5）團隊自我評估。

1.2.2 子宮組織病理學觀察 本實驗采取子宮組織進行HE染色切片法觀察不同組中藥物對大鼠產(chǎn)后恢復的影響。取出大鼠左邊子宮陰道端，用甲醛溶液固定好后制成HE 石蠟染色切片，放于電鏡下做病理學觀察。

2.1 子宮系數(shù) 益母草組的子宮系數(shù)與空白對照組相比差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；益母草組和清胞衣顆粒中劑量組的子宮重量與模型組相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），清胞衣顆粒低劑量組的子宮系數(shù)與模型組相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1、圖1。

綜上所述，正常對照組的大鼠子宮內(nèi)膜為單層上皮細胞，各組織正常，無炎癥反應；模型組大鼠的子宮內(nèi)膜較厚，固有層水腫，呈現(xiàn)出有中性粒細胞的炎癥細胞浸潤；其余各組的子宮內(nèi)膜均為單皮上層細胞。但除清胞衣組中的大鼠子宮組織形態(tài)和各項數(shù)據(jù)正常外，其他組別都有不同程度的水腫和炎癥反應。見圖2。

1.2 實驗方法

2 結果

HE 染色切片制作基本步驟如下：用10% 中性甲醇溶液固定子宮組織；用濃度逐漸升高的乙醇進行脫水；浸入石蠟，60 ℃包埋；切片；30% 酒精初展；將標片放置于烤箱中約30 min；脫蠟，用濃度從低到高的乙醇和水沖刷；蘇木染色；查看藍化情況，返藍；伊紅染色；脫水、封片；顯微鏡鏡檢，圖像分析。

表1 清胞衣顆粒對流產(chǎn)大鼠子宮系數(shù)的影響 （±s）

表1 清胞衣顆粒對流產(chǎn)大鼠子宮系數(shù)的影響 （±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

圖1 各組大鼠的子宮系數(shù)差異分析

第一種情況是以政策需要代替正當利益?！掇r(nóng)村資金互助社管理暫行規(guī)定》和《關于小額貸款公司試點的指導意見》中明確把“改善農(nóng)村地區(qū)金融服務”作為目標，這雖然在客觀上有利于農(nóng)村資金互助社和小額貸款公司設立、運行，一定程度上保護了融資主體的利益，但利益的保護本身不是目的，而只是實現(xiàn)政策目標的手段。也正因為如此，監(jiān)管者對這些融資組織的準入進行嚴格限制，融資主體的正當利益保護不充分。

1.2.3 統(tǒng)計學方法 子宮系數(shù)用SPSS 軟件處理，采取單因素方差分析，實驗數(shù)據(jù)以（±s）表示，組間均數(shù)比較采用t 檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2.2 子宮組織形態(tài)學 正常對照組：由黏膜層可見子宮內(nèi)膜為單層上皮細胞；固有層膠原含量豐富，結構緊密，漿膜層結構正常，組織未見其它明顯異常。模型組：可見局部子宮內(nèi)膜較厚，為復層上皮；少量上皮細胞及腺上皮細胞點狀壞死，胞核固縮深染或碎裂溶解，胞質(zhì)嗜酸性增強，固有層水腫，結締組織疏松，并伴有中等量中性粒細胞等炎癥細胞浸潤。益母草組：組織黏膜層可見子宮內(nèi)膜上皮細胞為單層上皮，固有層膠原含量豐富，結構緊密，并伴有中性粒細胞等炎癥細胞浸潤，肌層亦可見少量炎癥細胞浸潤。清胞衣顆粒高劑量組：組織黏膜層可見子宮內(nèi)膜上皮細胞為單層上皮，并可見少許內(nèi)膜上皮細胞及較多腺上皮細胞壞死，胞核固縮深染或破裂消融，胞質(zhì)嗜酸性加強；固有層膠原含量豐富，結構緊密，并伴有較多以中性粒細胞為主的炎癥細胞浸潤。清胞衣顆粒中劑量組：組織黏膜層可見子宮內(nèi)膜上皮細胞為單層上皮，未見明顯炎癥反應；組織未見其它顯著異樣。清胞衣顆粒低劑量組：組織黏膜層可見子宮內(nèi)膜上皮細胞為單層上皮，可見少量內(nèi)膜上皮細胞及腺上皮細胞壞死，胞核固縮深染或碎裂溶解，胞質(zhì)嗜酸性增強；固有層可見較多炎癥細胞浸潤，局部固有層水腫，結締組織疏松；組織未見其它顯著異樣。

圖2 藥物流產(chǎn)大鼠HE 子宮染色切片（HE×100；HE×200）

3 討論

清胞衣顆粒的主要成分有赤芍、蒲黃、桃仁、益母草四味中藥。研究表明，赤芍中的主要有效成分——赤芍總苷可減少血小板和紅細胞的集聚，并減少血栓形成的概率［7-8］。蒲黃的功效為止血化瘀通淋，經(jīng)研究，證明其可興奮子宮收縮、降血脂［9-10］。桃仁可通過改善血流動力學，實現(xiàn)活血化瘀的作用［11］。益母草是一種活血化瘀的常用藥，多用于治療產(chǎn)后瘀血腹痛、血液流通不暢、月經(jīng)紊亂等癥，目前發(fā)現(xiàn)起主要作用的化學成分為生物堿類、二萜類、環(huán)形多肽類等［12］。因此對于流產(chǎn)后子宮恢復具有良好的療效。

要想在實際工作中實現(xiàn)對生產(chǎn)規(guī)模的提升，就應該進行必要的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，只有這樣才能在實際工作中實現(xiàn)對農(nóng)產(chǎn)品成本的顯著控制與降低。而要想達成當前的工作目標，培育和發(fā)展新型經(jīng)營主體是一項十分重要的環(huán)節(jié)。當前很多新型經(jīng)營主體對于這一工作還缺乏必要的認識，導致出現(xiàn)了很多問題。

本實驗結果表明，模型組對比空白對照組的子宮系數(shù)顯著升高，說明本實驗成功造模，模型組大鼠藥物流產(chǎn)后確有惡露排出不盡的病癥；益母草組、清胞中組和清胞低組比模型組的子宮系數(shù)顯著降低，這說明清胞衣顆粒對流產(chǎn)模型大鼠有促進子宮收縮的作用，可促進產(chǎn)后惡露排出和子宮內(nèi)膜脫落。根據(jù)HE 染色切片圖像分析，清胞中組的各項指標與正常對照組基本無異，說明清胞衣顆粒對流產(chǎn)的大鼠子宮有明顯的修復作用。而且，清胞衣顆粒的劑量對修復程度也起到關鍵作用，本實驗中，清胞中組（0.4 g/kg）的子宮病理切片并未出現(xiàn)細胞壞死與炎癥反應，表明使用中劑量清胞衣顆粒的修復效果明顯優(yōu)于其余組別。

彭晉［13］、王慧［14］等的研究表明，益母草組子宮組織病理切片顯示子宮內(nèi)較干凈，輕度蛻膜，瘀血已去除并修復血管，且都無炎癥的反應，均可表明藥物對流產(chǎn)后子宮有修復作用。李霞［15］等研究發(fā)現(xiàn)，益母草堿可促進內(nèi)膜絨毛的脫落和瘀血惡露的排出，增強子宮平滑肌收縮，最終可以有效修復流產(chǎn)后子宮內(nèi)膜的破損。在本次的研究中，益母草組雖比模型組的子宮系數(shù)明顯降低且子宮受損較輕，但仍有炎癥反應出現(xiàn)；因而可知，清胞衣顆粒對子宮的修復作用優(yōu)于單味益母草。在諸多中醫(yī)藥研究中，可加快修復子宮內(nèi)膜的藥方都多用化瘀止血類中藥，這更能從藥物組成上力證清胞衣顆粒有良好的子宮修復作用。

綜上所述，清胞衣顆粒可有效修復流產(chǎn)導致的子宮損傷。其中幾味藥根據(jù)功效可推測出，赤芍與蒲黃主要用于流產(chǎn)后子宮內(nèi)膜的愈合，有效縮短出血時間，減少疼痛；桃仁活血的功效可預防內(nèi)膜上皮細胞的壞死；益母草則在多個研究中被證明可減少流產(chǎn)后子宮瘀血。但具體作用機制及清胞衣顆粒的具體使用劑量現(xiàn)仍不明，需要在后續(xù)的研究中給予補充。