通元針法對慢性不可預知溫和應激抑郁癥模型大鼠行為學的影響

祝曉忠　吳曉玲　張貴鋒

【摘要】 目的：觀察通元針法對慢性不可預知溫和應激抑郁癥模型大鼠行為學的影響，探索針刺干預抑郁癥的臨床優(yōu)化方案。方法：SD大鼠60只，按照處理方法不同分成空白對照組10只，造模組50只?？瞻讓φ战M不予處理，造模組采用慢性不可預知溫和應激法進行造模。選造模成功大鼠40只，按照隨機數字表法分成模型對照組、帕羅西汀組、常規(guī)針刺組、通元針法組，每組10只;模型對照組予生理鹽水灌胃，帕羅西汀組每日予帕羅西汀灌胃，常規(guī)針刺組電針百會、印堂，通元針法組電針百會、大椎、氣海、關元;采用體質量、糖水偏好實驗、曠場實驗、懸尾實驗評價干預治療效果。結果：與空白對照組比較，造模后各組大鼠體質量均顯著減輕、糖水偏好度均顯著降低、中央區(qū)域停留時間均顯著縮短、懸尾不動時間均顯著延長（P<0.05）。干預2周后，帕羅西汀組、常規(guī)針刺組、通元針法組大鼠各項指標與模型對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），常規(guī)針刺組與通元針法組大鼠的糖水偏好度、中央區(qū)域停留時間、懸尾不動時間比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），帕羅西汀組與通元針法組的大鼠懸尾不動時間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論：帕羅西汀、常規(guī)針刺、通元針法均能有效改善抑郁癥模型大鼠的抑郁癥狀，通元針法對觀測指標的改善效果更加明顯。

【關鍵詞】 通元針法; 抑郁癥; 針刺; 行為學; 大鼠模型

Effect of Tongyuan Acupuncture Method on Behavior of Chronic Unpredictable Moderate Stress Depression Rats/ZHU Xiaozhong，WU Xiaoling，ZHANG Guifeng.//Medical Innovation of China，2019，16（20）：0-032

【Abstract】 Objective：To observe the effect of tongyuan acupuncture on behavior of chronic unpredictable mild stress depression model rats.Method：60 SD rats were divided into blank control group（n=10）and model group（n=50）according to different treatment methods.The blank control group was not treated，and chronic unpredictable mild stress method was adopted in the model group.40 rats were selected for successful modeling，and were divided into model control group，Paroxetine group，routine acupuncture group and tongyuan acupuncture group according to random number table method，with 10 rats in each group.Normal saline was given to the model control group and Paroxetine was given to the paroxetine group daily，routine acupuncture group electroacupuncture baihui，yintang，tongyuan acupuncture group electroacupuncture baihui，dazhui，qihai，guanyuan.The effects of intervention were evaluated by body mass，sugar water preference test，open-field test and tail suspension test.Result：Compared with the blank control group，the body mass of the rats in each group were significantly reduced after modeling，the preference degree of sugar and water were significantly reduced，the stay time in the central region were significantly shortened，and the tail suspension time were significantly prolonged（P<0.05）.After 2 weeks of intervention，all the indicators of the Paroxetine group，the conventional acupuncture group and the tongyuan acupuncture group were compared with the model control group，the differences were statistically significant（P<0.05）;comparison of sugar water preference，central region residence time and tail suspension time between the conventional acupuncture group and the tongyuan acupuncture group showed statistically significant differences（P<0.05），comparison of tail suspension time between Paroxetine group and tongyuan injection group showed statistically significant difference（P<0.05）.Conclusion：Paroxetine，routine acupuncture and tongyuan injection can effectively improve the depression symptoms of the depression model rats，and tongyuan injection has a more obvious effect on the improvement of the observation indexes.

【Key words】 Tongyuan acupuncture method; Depression; Acupuncture; Behavior; Rat Model

First-authors address：Zhaoqing Hospital of Traditional Chinese Medicine，Zhaoqing 526020，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.20.007

抑郁癥是人類的一種常見精神疾病，主要表現為高級認知功能紊亂，以情緒低落、興趣減少、思維緩慢、睡眠障礙等為典型臨床特征，嚴重者可出現自殺傾向[1]。大量研究證實針刺治療抑郁癥具有操作便捷、適用人群廣、安全經濟、不良反應少的優(yōu)勢[2]?！巴ㄔ樂ā笔菑V東省名中醫(yī)賴新生教授創(chuàng)立的一種新型針刺方法，對抑郁性神經癥有顯著效果[3]。筆者在文獻[4]研究基礎上，觀察了通元針法對抑郁癥模型大鼠行為學的影響，并與常規(guī)針刺、帕羅西汀的干預效果進行了比較，探索針刺干預抑郁癥的臨床優(yōu)化方案，現將結果報道如下。

1 對象與方法

1.1 動物與分組 在南方醫(yī)科大學實驗動物中心采購SPF級健康成年SD雄性大鼠60只[實驗動物使用許可證編號SYXK（粵）2016-0167，大鼠批號44002100013989]，180～220 g，6～7周齡。單籠飼養(yǎng)于通風良好、溫度（24±2）℃、濕度50%～60%、保持12 h明暗周期的SPF級動物實驗室。60只大鼠按照處理方法不同分為空白對照組10只和造模組50只。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 造模組50只大鼠采用慢性不可預知溫和應激法（CUMS）造模[5-8]，在21 d內隨機給予12種不同應激刺激：禁水24 h、禁食24 h、潮濕墊料24 h、晝夜顛倒24 h、頻閃照明12 h、束縛2 h、36 V電擊足底5 min、4 ℃冰水游泳5 min、45 ℃溫水游泳5 min、水平震蕩5 min、夾尾3 min、傾斜鼠籠24 h，上述刺激重復1～2次，共21種，納入隨機表格中，每天隨機給予1種刺激，使大鼠不能預料將發(fā)生何種刺激。造模結束后，用行為學指標檢測抑郁癥大鼠模型是否成功建立。

1.2.2 干預方法 從造模組中選擇40只合格的抑郁癥模型大鼠，按照隨機數字表法分為模型對照組、帕羅西汀組、常規(guī)針刺組、通元針法組，每組10只。從第22天開始，分別接受不同的干預，時間均為2周。（1）空白對照組：單籠飼養(yǎng)，自由飲水攝食，不予任何處理。（2）模型對照組：給予生理鹽水灌胃處理，生理鹽水灌胃量同帕羅西汀組灌胃量，自由飲水攝食。（3）帕羅西汀組：每日予帕羅西汀（鹽酸帕羅西汀片，購自南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院）灌胃治療，按1.844 mg/kg給藥，1次/d，治療期間自由飲水攝食。（4）常規(guī)針刺組：固定大鼠，取百會、印堂，消毒后用0.25 mm×13 mm針灸針進行針刺，進針后均勻捻轉30 s，接通G6805-Ⅰ型電針儀，頻率15 Hz，連續(xù)波，電流強度約1 mA，以大鼠安靜耐受為度，每次20 min。（5）通元針法組：固定大鼠，取百會、大椎、氣海、關元，消毒后用0.25 mm×13 mm針灸針進行針刺，進針后均勻捻轉30 s，接通G6805-Ⅰ型電針儀，頻率15 Hz，連續(xù)波，電流強度約1 mA，以大鼠安靜耐受為度，20 min/次。腧穴定位參照《實驗針灸學》中大鼠的腧穴定位方法[9]。

1.3 觀察指標 造模前、造模3周后、干預2周后3個時間點進行相關指標的檢測。（1）體質量：將1個容器放在天平上，去皮歸零將大鼠放于容器內，待讀數穩(wěn)定后，記下稱體質量讀數，記錄3次的體質量，取平均值。（2）糖水偏好實驗：第一個24 h在安靜環(huán)境給予大鼠2瓶質量相當的濃度為1%的蔗糖水;第二個24 h給予質量相當的1%蔗糖水、純凈水各1瓶。禁食禁水24 h后，同時給予質量相當的1%蔗糖水1瓶、純凈水1瓶，記錄1 h內大鼠攝入純凈水和蔗糖水的量。糖水偏好度（%）=糖水消耗量/（糖水消耗量+純凈水消耗量）×100%[7]。（3）曠場實驗：將實驗箱（型號63007，購于深圳市瑞沃德生命科技有限公司）底部平均劃為25格，中央9格為中央區(qū)域，周邊16格為外周區(qū)域;在安靜且昏暗房間，捏住大鼠尾巴輕放入實驗箱中央，測量大鼠在5 min內在中央區(qū)域停留時間[10-11]。（4）懸尾實驗：將大鼠尾端固定于鐵架臺上成倒掛狀態(tài)，頭部距底部5 cm，懸掛6 min，統(tǒng)計大鼠后4 min內保持不動的累計時間（放棄掙扎呈倒立豎直狀態(tài)）[12-13]。

1.4 統(tǒng)計學處理 數據整理后采用SPSS 22.0進行統(tǒng)計學處理，計量資料用（x±s）表示，計量資料組內比較用重復測量方差分析，組間比較用多因素方差分析。統(tǒng)計推斷采用雙側檢驗，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組體質量比較 造模前，各組大鼠體質量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與空白對照組比較，造模后各組大鼠體質量顯著減輕（P<0.05）。干預2周后，模型對照組、常規(guī)針刺組大鼠體質量與空白對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與模型對照組比較，帕羅西汀組、常規(guī)針刺組、通元針法組大鼠體質量均顯著增加（P<0.05）。見表1。

2.2 各組糖水偏好實驗結果比較 造模前，各組大鼠糖水偏好度比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與空白對照組比較，造模后各組大鼠糖水偏好度均顯著降低（P<0.05）。干預2周后，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（F=9.54，P<0.01），帕羅西汀組、常規(guī)針刺組、通元針法組與模型對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），常規(guī)針刺組與通元針法組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 各組曠場實驗結果比較 造模前，各組大鼠中央區(qū)域停留時間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與空白對照組比較，造模后各組大鼠中央區(qū)域停留時間均顯著縮短（P<0.05）。干預2周后，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（F=16.42，P<0.01），帕羅西汀組、常規(guī)針刺組、通元針法組與模型對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），常規(guī)針刺組與通元針法組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表3。

2.4 各組懸尾實驗結果比較 造模前，各組大鼠懸尾不動時間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與空白對照組比較，造模后各組大鼠懸尾不動時間均顯著延長（P<0.05）。干預2周后，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（F=30.51，P<0.01），帕羅西汀組、常規(guī)針刺組、通元針法組與模型對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），常規(guī)針刺組、帕羅西汀組與通元針法組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表4。

3 討論

抑郁癥動物模型要求滿足癥狀相符、致病因素一致、能被抗抑郁藥治療三個條件。癥狀相符指動物模型要與抑郁癥患者具有相同的表現，如食欲不振，體質量減輕，快感缺失及社會交往障礙;致病因素一致指導致抑郁癥的物理心理因素相同，如遺傳因素、環(huán)境因素等;能被抗抑郁藥治療指模型動物的抑郁樣表現能被現階段有效的陽性抗抑郁劑所逆轉[7]。慢性不可預測溫和應激抑郁動物模型是國際公認的一種抑郁癥動物模型，給予動物慢性不可預見性溫和刺激，可以較好地模擬人類絕望、快感消失、探索欲望下降等抑郁行為[14]。本研究采用慢性不可預測溫和應激建立抑郁癥大鼠模型，結果表明造模成功大鼠的體質量、糖水偏好度、曠場實驗中央區(qū)域停留時間、懸尾不動時間與造模前及空白對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示造模成功;經過2周的干預后，帕羅西汀組、常規(guī)針刺組、通元針法組大鼠的相關指標均顯著改善，提示三種方法均能有效改善大鼠的抑郁癥狀。

體質量測量是評價大鼠情緒狀態(tài)及食欲的重要指標[15]。本研究證實，慢性不可預測溫和應激刺激會導致抑郁模型大鼠體質量顯著減少，經過干預后，大鼠的體質量顯著增加，與模型對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），表明帕羅西汀、常規(guī)針刺、通元針法均能提高抑郁癥模型大鼠的食欲，促進體質量增加。糖水偏好實驗用于評價大鼠對獎賞性行為的反應性，以及對事物的感興趣程度[16]。本研究提示，慢性不可預見性溫和刺激會導致抑郁模型大鼠糖水偏好率明顯下降，經過干預后，大鼠的糖水偏好率顯著增加;表明帕羅西汀、常規(guī)針刺、通元針法均能提高抑郁模型大鼠對獎賞性行為的反應性，改善大鼠的抑郁樣行為。曠場實驗可以評價大鼠在新環(huán)境中自主行為、探究行為與緊張度[10]。本研究結果發(fā)現，慢性不可預見性溫和刺激會導致大鼠在中央區(qū)域停留時間的顯著縮短，在靠近箱壁的邊緣區(qū)域活動時間相對增加，提示大鼠的探究行為降低、緊張度增加;經過干預后，在中央區(qū)域停留時間的顯著增加，說明帕羅西汀、常規(guī)針刺、通元針法均能提高抑郁模型大鼠對新環(huán)境中自主行為、探究行為，減輕大鼠的抑郁癥狀。懸尾實驗主要用于反映抑郁癥動物的行為絕望，是評價焦慮與抑郁情緒的經典方法[17]。本研究發(fā)現，慢性不可預見性溫和刺激會使大鼠保持不動的累計時間顯著延長;經過干預治療后，大鼠保持不動的累計時間顯著縮短，說明帕羅西汀、常規(guī)針刺、通元針法均能減輕抑郁大鼠的絕望狀態(tài)。盡管帕羅西汀、常規(guī)針刺、通元針法均能顯著改善模型大鼠的抑郁癥狀，但是糖水偏好實驗、曠場實驗、懸尾實驗的結果均顯示，通元針法的治療效果要顯著優(yōu)于常規(guī)針刺法;糖水偏好實驗、曠場實驗結果顯示，通元針法對于抑郁癥模型大鼠的抑郁狀態(tài)改善效果與帕羅西汀相當，而懸尾實驗的結果顯示，通元針法在減輕抑郁大鼠的絕望狀態(tài)方面要優(yōu)于帕羅西汀。

抑郁癥屬于中醫(yī)“郁證”范疇，病因病機與陰陽失衡、氣血失和、五臟功能失調、元神失養(yǎng)、痰濁阻滯等密切相關，然其根本在于陰陽失衡、元神失養(yǎng)[18]?！巴ㄔ樂ā奔础巴ǘ金B(yǎng)神、引氣歸元針法”，由全國老中醫(yī)藥專家學術經驗繼承工作指導老師、廣東省名中醫(yī)賴新生教授創(chuàng)立，賴新生教授認為經絡之氣陰陽相應、臟腑腹背氣相交貫，疏通經絡必須調氣，而調氣關鍵在于引氣歸元，陰病取陽之背俞，陽病取陰之腹募，兩者兼而取之，則陰陽二氣貫通歸元，實現陰平陽秘[19]。已有研究證實，通元針法治療抑郁性神經癥、產后抑郁癥效果顯著[3，20]。

《證治匯補·郁證》記載：“郁病雖多，皆因氣不周流，法當順氣為先?！比蚊}為陰脈之海，督脈為陽脈之海，兩者是調節(jié)全身氣血陰陽的關鍵，本研究以督脈的百會穴、大椎穴通督養(yǎng)神，以任脈的氣海穴、關元穴引氣歸元，四穴配合，燮理陰陽、調和氣血，因此對抑郁癥模型大鼠有顯著的治療效果。

綜上所述，帕羅西汀、常規(guī)針刺、通元針法均能有效改善抑郁癥模型大鼠的抑郁癥狀，通元針法對觀察指標的改善效果更加明顯，為針刺治療抑郁癥提供了一條新思路和新方案。

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