快速糾正乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少的臨床新方法

高曉玲　吳惠玲　朱江賢

摘要目的：建立一種新的準確、簡便糾正乙二胺四乙酸（EDTA）依賴性假性血小板減少（EDTA-PTCP）的處理方法。方法：收治EDTA-PTCP患者118例。采用含乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K）千粉的抗凝管二次抗凝處理標本，同時取患者末梢血手工法計數(shù)血小板，比較兩種方法處理結(jié)果。結(jié)果：118例樣本中，116例用上述方法處理后，檢測結(jié)果與末梢血手工法計數(shù)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;涂片、染色鏡檢觀察血小板無集聚，呈散在分布，能糾正EDTA-PTCP;2例樣本用上述方法處理后，未能糾正EDTA-PTCP，涂片、染色觀察血小板仍集聚。結(jié)論：臨床工作中發(fā)現(xiàn)EDTA-PTCP時，可采用含EDTA-K2干粉的抗凝管糾正，該方法避免了二次采血，能縮短患者標本檢測平均時間，提高了檢驗效率。

關(guān)鍵詞 血小板假性減少;抗凝劑;檢測方法

乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）是國際血液學標準化委員會（ICSH）1993年建議用作血液分析的抗凝劑，近年來發(fā)現(xiàn)此種抗凝劑偶可誘導血小板的體外聚集，血細胞分析儀不能識別，而導致血小板計數(shù)明顯低于實際數(shù)值，這就是EDTA依賴性假性血小板減少（EDTA-PTCP）。有文獻報道EDTA-PTCP的發(fā)生率為0.15%～0.25%;約占所有血小板<100x10/L患者的0.85%～1.05%，而在門診患者中，EDTA-PTCP的發(fā)生率高達2.5%～4.0%"。EDTA-PTCP本身無病理學意義，然而，EDTA-PTCP容易造成臨床的誤診、誤治，甚至導致不必要的血小板輸注。因此準確快速糾正EDTA-PTCP患者血小板計數(shù)，對于減少臨床誤診是非常重要的。目前，臨床常用的糾正EDTA-PTCP的方法有EDTA抗凝靜脈血加，人阿米卡星后重新計數(shù)、重新采枸櫞酸鈉抗凝靜脈血計數(shù)，采集末梢血計數(shù)等，以上方法均存在一定的不足。本文對本實驗室新舊方法做對比，尋找一種更為快速、準確的方法來糾正EDTA-PTCP。

資料與方法

2014年10月-2016年12月收治血常規(guī)檢測出現(xiàn)EDTA-PTCP患者118例，男51例，女67例;門診患者49例，住院患者53例，健康體檢16例。

儀器與試劑：XE-2100血液分析儀、配套試劑及質(zhì)控品，儀器狀態(tài)良好，每天均檢測高、中、低3種質(zhì)控品，且均在控后進行標本檢測;2mg/mLEDTA-K2抗凝管;0.5mLEDTA-K2干粉抗凝管;光學顯微鏡;草酸銨稀釋液，按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第4版）進行配制。

方法：118例SYSMEX-2100血液分析儀（阻抗法）結(jié)果顯示血小板<80x10%/L，涂片、染色鏡檢鏡下血小板集聚（圖1）的患者抗凝血標本，分別取150μL加人含有EDTA-K干粉抗凝劑的2個抗凝管內(nèi)（考慮抗凝劑濃度、標本檢測量），充分混勻后合并為1管，于37C恒溫箱放置10～15min，再次用SYSMEX-2100血液分析儀（光學法）檢測糾正血小板計數(shù)，并涂片染色鏡檢觀察血小板是否仍集聚。同時，按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第4版）操作，采取同一患者末梢血，由經(jīng)驗豐富的2名主管以上檢驗師進行血小板人工計數(shù)，結(jié)果取均值作為參照。

統(tǒng)計學方法：采用PEMS3.0統(tǒng)計軟件，計量資料（x+）表示，采用1檢驗;P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

118例中116例用上述方法處理后，檢測結(jié)果與末梢血手工法計數(shù)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

涂片染色鏡檢觀察血小板無集聚，呈散在分布，能有效糾正EDTA-PTCP。見圖1～2。有2例用上述方法處理后，涂片、染色鏡檢觀察血小板仍聚集，未能糾正EDTA-PTCP。

討論

血小板在體內(nèi)主要參與止血、血栓形成，在止血、血栓形成的病理生理過程中起著重要作用，血小板的數(shù)量異?；蚬δ苋毕菔浅鲅约膊』蜓ㄐ约膊〉闹匾颉．斞“逶冢?0～50）x10*/L時，可有輕度出血或術(shù)后出血癥狀凹。因此，血小板計數(shù)結(jié)果準確對指導臨床診斷和治療非常重要。

目前，臨床傾向于用血小板衛(wèi)星現(xiàn)象、抗磷脂抗體等理論解釋EDTA-PTCP的機制。然而，也有學者提出假性血小板減少患者的主要原因在于血小板膜糖蛋白GPIl//ITal。EDTA-PTCP患者血小板的GPIIb/lIa表達要明顯強于正常人，導致血小板的聚集能力增加。一般來說，處于正常情況下的GPIIb//IIa主要隱藏于血小板膜的亞單位中，而鈣離子鰲合劑的變化，可促使血小板膜出現(xiàn)蛋白暴露現(xiàn)象，最終導致血小板聚集，而使血細胞分析儀不能正確計數(shù)，造成血小板計數(shù)假性減低。這種聚集是一種可逆的，可以被糾正的弱聚集。本次試驗中，EDTA能將已發(fā)生EDTA依賴聚集的血小板重新解離，其關(guān)鍵可能在于EDTA的濃度（二次抗凝）、標本混勻后的放置時間及溫度。根據(jù)國際血液學標準化委員（ICSH）1993文件建議，血細胞計數(shù)應(yīng)用EDTA-K，為抗凝劑4，為防止稀釋低滲作用，EDTA-K2抗凝劑應(yīng)使用干粉。臨床工作中常常因為患者的個人情況導致采血量過多或者過少，導致EDTA-K，濃度偏低或偏高。過高濃度的EDTA-K2誘導血小板抗體與血小板結(jié)合，引起血小板聚集而不被計數(shù);EDTA-K，濃度偏低時，血液不能有效抗凝，PLT聚集而不被計數(shù)[51。2.25mg/mL是EDTA-K2的最適抗凝濃度，該濃度不會影響白細胞的數(shù)目和大小，對紅細胞形態(tài)的影響也最小，并且可以抑制血小板的聚集問。本次試驗中EDTA二次抗凝后將標本溫浴15min，原因有二，其一是據(jù)文獻報道，EDTA-Kz抗凝血，血小板在15min測得值最高"，血小板聚集主要發(fā)生在血液離體15～60min，即抽血15min后血小板會進行性下降，在采血15min內(nèi)分析EDTA-K2抗凝的全血標本，可提高血小板測量結(jié)果的準確性圖;其二，EDTA-PTCP，具有溫度依賴性回，最適聚集溫度為4～20C，在37C條件下采血則不產(chǎn)生聚集。

EDTA-PTCP發(fā)生率較低，常因被忽視而出現(xiàn)誤診誤治，導致了醫(yī)療資源的浪費，及時發(fā)現(xiàn)并糾正PTCP非常重要。EDTA-K2干粉二次抗凝的方法能快速準確糾正PTCP，同時避免對患者的重新抽血，既節(jié)省了檢測的時間和成本，也規(guī)避了患者對醫(yī)護工作者產(chǎn)生怨懟的可能，有良好的臨床應(yīng)用前景。

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