miR-216a-5p調(diào)控XIAP對急性胰腺炎腺泡細胞增殖、凋亡的影響

丁謙謙,樓定進,王海英

丁謙謙,義烏市中心醫(yī)院急診科 浙江省義烏市 322000

樓定進,義烏市中心醫(yī)院全科醫(yī)學(xué) 浙江省義烏市 322000

王海英,義烏市中心醫(yī)院消化內(nèi)科 浙江省義烏市 322000

核心提要： miR-216a-5p在急性胰腺炎模型細胞中高表達,miR-216a-5p靶向負調(diào)控XIAP,抑制miR-216a-5p表達可以通過上調(diào)XIAP的表達抑制胰腺炎腺泡細胞凋亡,促進細胞增殖.

0 引言

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是一種臨床常見的急腹癥,發(fā)病急,進展快,其發(fā)病機制復(fù)雜[1].細胞凋亡是AP的一個重要病理特征,參與其發(fā)病過程,是胰腺炎發(fā)病后對機體有利的一種反應(yīng),凋亡能減輕炎癥反[2,3].微小RNA(microRNA,miRNA)具有組織特異性且涉及調(diào)控轉(zhuǎn)錄后的基因表達,在AP中的作用機制及臨床實用性的研究有助于為AP的診斷和治療提供新的思路和方法[4].已有研究表明AP患者血清miR-216a表達水平明顯升高,可作為AP輔助診斷及預(yù)后監(jiān)測的生物標志物[5].miR-216a-5p是致癌基因,miR-216-5p有助于宮頸癌細胞的腫瘤發(fā)生[6],在胃癌中miR-216a-5p促進細胞增殖,抑制細胞凋亡[7].miR-216a-5p通過下調(diào)MMP16表達抑制人肺癌細胞的侵襲能力[8].X-連鎖凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP) 是凋亡抑制基因家族中重要的成員之一,可通過抑制caspase-3,caspase-7和caspase-9,并參與其他途徑來抑制細胞的凋亡,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)[9].但miR-216a-5p及XIAP在AP表達及對其分化、增殖、凋亡的影響和作用機制等尚未清楚,本文旨在研究miR-216a-5p對XIAP的調(diào)控機制及對AP腺泡細胞分化、增殖、凋亡的影響.為AP的診斷和治療提供一定的理論依據(jù).

1 材料和方法

1.1 材料 胰腺腺泡細胞株AR42J購自中國科學(xué)院上海細胞庫.雨蛙素(caerulein,CAE)購自美國Sigma公司; 胎牛血清、RPMI 1640培養(yǎng)基均購自美國Gibco公司; RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒和qPCR試劑盒購自日本Takara公司; Western Blot試劑盒購自上海信裕生物技術(shù)有限公司; BCA試劑盒、MTT試劑盒、膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素(Annexin V-FITC)和碘化丙錠(PI)試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所; LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒購自美國Invitrogen公司; 雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒購自美國Promega公司; 細胞板、流式細胞儀購自賽默飛公司; 兔抗人Bax多克隆抗體、兔抗人Bcl-2多克隆抗體、兔抗人Cyclin D1多克隆抗體、兔抗人p21多克隆抗體、兔抗人XIAP多克隆抗體、兔抗人GAPDH 多克隆抗體、山羊抗兔IgG-辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)的均購自上海煊翎生物科技有限公司.

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng)及CAE處理構(gòu)建AP模型：胰腺腺泡AR42J細胞常規(guī)培養(yǎng)于含10% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基,置于37 ℃,含5%CO2恒溫箱培養(yǎng).每2-3 d傳代一次.取正常AR42J細胞接種于6孔板上,培養(yǎng)24 h后加入10 nmol/L的CAE,震蕩混勻后繼續(xù)培養(yǎng),即AP細胞,記為AR42J+CAE組.

說起來好笑，因為會寫幾個字，總會有些看起來和文學(xué)有關(guān)的飯局。一天省書協(xié)的朋友喬樹約我吃飯，說是一位富翁請客。

1.2.2 細胞分組和轉(zhuǎn)染：將miR-NC、miR-216a-5p、antimiR-NC、anti-miR-216a-5p轉(zhuǎn)染至正常培養(yǎng)的AR42J細胞中記為miR-NC組、miR-216a-5p組、anti-miR-NC組、anti-miR-216a-5p組; 將anti-miR-NC、anti-miR-216a-5p、pcDNA3.1、pcDNA3.1-XIAP分別轉(zhuǎn)染至CAE處理后的胰腺腺泡AR42J細胞中,記為AR42J+CAE+antimiR-NC組、AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p組、AR42J+CAE+pcDNA3.1組、AR42J+CAE+pcDNA3.1-XIAP組; 將anti-miR-216a-5p分別和si-NC、si-XIAP共轉(zhuǎn)染至CAE處理后的胰腺腺泡AR42J細胞中,分別記為AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p+si-NC組、AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p+si-XIAP組,轉(zhuǎn)染按照LipofectamineTM2000試劑盒進行操作.

1.2.3 qRT-PCR分析miR-216a-5p的表達水平：按照Trizol說明書提取總RNA,用反轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,按照AceQ qPCR SYBR?Green Mix說明書進行qRT-PCR方法擴增.循環(huán)條件為95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s; 72 ℃ 30 s,共40個循環(huán); 60 ℃延長5 min.相對表達量采用2-△△Ct法計算.

1.2.4 Western Blot檢測蛋白表達：提取各組細胞蛋白,用BCA蛋白定量試劑盒進行蛋白定量.各組蛋白上樣量60 μg,SDS-PAGE后,經(jīng)電轉(zhuǎn)將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上.用5%脫脂牛奶室溫封閉90 min,分別加入相應(yīng)的一抗：兔抗人Bax多克隆抗體、兔抗人Bcl-2多克隆抗體、兔抗人Cyclin D1多克隆抗體、兔抗人p21多克隆抗體、兔抗人XIAP多克隆抗體、兔抗人GAPDH多克隆抗體,4 ℃孵育過夜,PBS洗滌3次,每次5 min; 再加入相對應(yīng)的二抗HRP,室溫孵育2 h,PBS洗滌3次,每次10 min,后在暗室中曝光顯影,再浸入定影,最后洗去殘液晾干,將膠片用Quantity One凝膠分析軟件處理,測定各組蛋白條帶的吸光度,以目的條帶和GAPDH條帶的比值作為蛋白表達水平.

1.2.5 MTT檢測細胞增殖活性：在各組細胞培養(yǎng)至24 h、48 h、72 h時加入20 μL(5 g/L)的MTT溶液,繼續(xù)孵育4 h;棄去多余培養(yǎng)基并加入150 μL DMSO振蕩反應(yīng)10 min,酶標儀檢測490 nm處吸光度(OD)值.細胞增殖活力(%)= 實驗組OD值/空白對照組OD值×100%.

1.2.6 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡：用不含EDTA的胰酶消化細胞,離心收集各組細胞,PBS漂洗2次,加結(jié)合緩沖液重懸細胞.依據(jù)試劑盒說明書,先后加入Annexin V-FITC和PI避光孵育.流式細胞儀檢測激發(fā)波長488 nm和發(fā)射波長530 nm處的熒光強度.實驗重復(fù)3次.

圖1 miR-216a-5p在細胞AR42J及CAE作用的細胞AR42J中的表達.aP＜0.05,vs AR42J組.

1.2.7 熒光素酶報告基因檢測實驗檢測miR-216a-5p對XIAP的靶向調(diào)控：TargetScan數(shù)據(jù)庫顯示XIAP 3′UTR區(qū)域有miR-7結(jié)合位點.構(gòu)建野生型和突變型基因靶點XIAP的3′UTR-熒光素酶表達載體(WT-XIAP和MUTXIAP),取對數(shù)生長期大鼠胰腺腺泡AR42J細胞接種于24孔板(5×104個/孔),待細胞生長至80%融合時,用LipofectamineTM2000將WT-XIAP和MUT-XIAP組細胞分別轉(zhuǎn)染miR-NC和miR-216a-5p.依據(jù)說明書要求,使用熒光素酶報告基因檢測儀進行雙熒光素酶報告實驗測定.實驗結(jié)果以熒光素酶活性和Renilla活性的比值進行統(tǒng)計學(xué)分析.實驗重復(fù)3次.

統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 20.00進行統(tǒng)計學(xué)分析.計量資料以mean±SD表示,兩組比較行t檢驗,多組間比較采用單因素方差分析,以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義.

2 結(jié)果

2.1 miR-216a-5p在AP腺泡細胞中的表達 qRT-PCR檢測結(jié)果(圖1)顯示,與正常的AR42J細胞相比,CAE處理后的AR42J細胞中miR-216a-5p的表達水平顯著升高(P＜0.05).可見,CAE處理可以提高miR-216a-5p的表達水平.

2.2 抑制miR-216a-5p對AP腺泡細胞增殖的影響 qRTPCR檢測結(jié)果(圖2A)顯示,與AR42J+CAE+anti-miR-NC組相比,AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p組miR-216a-5p的表達水平顯著降低(P＜0.05).MTT法檢測結(jié)果(圖2B)顯示,與AR42J組相比,AR42J+CAE組細胞活性顯著降低,與AR42J+CAE+anti-miR-NC組相比,AR42J+CAE+antimiR-216a-5p組細胞活性顯著升高(P＜0.05).Western Blot檢測結(jié)果(圖2C,D)顯示,與AR42J+CAE+anti-miR-NC組相比,AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p組Cyclin D1蛋白的表達水平顯著升高,P21蛋白的表達水平顯著下降(P＜0.05).可見,抑制miR-216a-5p可促進AP腺泡細胞增殖.

2.3 抑制miR-216a-5p對AP腺泡細胞凋亡的影響 流式細胞儀檢測結(jié)果(圖3A,B)顯示,與AR42J組相比,AR42J+CAE組細胞凋亡率顯著升高; 與AR42J+CAE+anti-miR-NC組相比,AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p組CAE作用的AR42J細胞的凋亡率顯著降低(P＜0.05).Western Blot檢測結(jié)果(圖3C,D)顯示,與AR42J組相比,AR42J+CAE組Bcl-2蛋白的表達水平顯著降低,Bax蛋白的表達水平顯著升高; 與AR42J+CAE+antimiR-NC組相比,AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p組Bcl-2蛋白的表達水平顯著升高,Bax蛋白的表達水平顯著下降(P＜0.05).可見,抑制miR-216a-5p可抑制AP腺泡細胞凋亡.

2.4 miR-216a-5p靶向、調(diào)控XIAP的表達 通過TargetScan數(shù)據(jù)庫預(yù)測到XIAP與miR-216a-5p存在結(jié)合位點(圖4A).熒光素酶報告基因檢測實驗結(jié)果(圖4B)顯示,轉(zhuǎn)染野生型XIAP基因表達載體WT-XIAP后,相較于miRNC組,miR-216a-5p組AR42J細胞的熒光素酶活性顯著降低(P＜0.05); 而轉(zhuǎn)染突變型XIAP基因表達載體MUTXIAP后,相較于miR-NC組,miR-216a-5p組AR42J細胞的熒光素酶活性差異不顯著.qRT-PCR檢測結(jié)果(圖4C)顯示,相較于miR-NC組,miR-216a-5p組AR42J細胞中XIAP mRNA的表達水平顯著降低; 而相較于anti-miR-NC組,anti-miR-216a-5p組AR42J細胞中XIAP mRNA的表達水平顯著升高(P＜0.05).Western Blot檢測結(jié)果(圖4D)顯示,相較于miR-NC組,miR-216a-5p組AR42J細胞中XIAP蛋白的表達水平顯著降低; 而相較于anti-miR-NC組,antimiR-216a-5p組AR42J細胞中XIAP蛋白的表達水平顯著升高(P＜0.05).可見,miR-216a-5p可以靶向調(diào)控XIAP.

2.5 過表達XIAP對AP腺泡細胞增殖、凋亡的影響 MTT法檢測結(jié)果(圖5A)顯示,與AR42J組相比,AR42J+CAE組細胞活性顯著降低; 與AR42J+CAE+pcDNA3.1組相比,AR42J+CAE+pcDNA3.1-XIAP組細胞活性顯著升高(P＜0.05).流式細胞儀檢測結(jié)果(圖5B)顯示,與AR42J組相比,AR42J+CAE組細胞的凋亡率顯著升高; 與AR42J+CAE+pcDNA3.1組相比,AR42J+CAE+pcDNA3.1-XIAP組細胞的凋亡率顯著降低(P＜0.05).Western Blot檢測結(jié)果(圖5C,D)顯示,與AR42J組相比,AR42J+CAE組XIAP、Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表達水平顯著下降,P21、Bax蛋白的表達水平顯著升高; 與AR42J+CAE+pcDNA3.1組相比,AR42J+CAE+pcDNA3.1-XIAP組中XIAP、Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表達水平顯著升高,P21、Bax蛋白的表達水平顯著下降(P＜0.05).可見,過表達XIAP促進AP腺泡細胞增殖,抑制其凋亡.

2.6 抑制XIAP表達能逆轉(zhuǎn)抑制miR-216a-5p對AP腺泡細胞增殖、凋亡的作用 MTT法檢測結(jié)果(圖6A)顯示,與AR42J+CAE+anti-miR-NC組相比,AR42J+CAE+antimiR-216a-5p組細胞活性顯著升高,與AR42J+CAE+antimiR-216a-5p+si-NC組相比,AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p+si-XIAP組細胞活性顯著降低(P＜0.05).流式細胞儀檢測結(jié)果(圖6B)顯示,與AR42J+CAE+anti-miR-NC組相比,AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p組細胞的凋亡率顯著降低,與AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p+si-NC組相比,AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p+si-XIAP組細胞的凋亡率顯著升高(P＜0.05).Western Blot檢測結(jié)果(圖6C,D)顯示,與AR42J+CAE+anti-miR-NC組相比,AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p組中XIAP、Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表達水平顯著升高,P21、Bax蛋白的表達水平顯著下降; 與AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p+si-NC組相比,AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p+si-XIAP組中XIAP、Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表達水平顯著下降,P21、Bax蛋白的表達水平顯著升高(P＜0.05).可見,抑制XIAP表達能逆轉(zhuǎn)抑制miR-216a-5p對AP腺泡細胞增殖促進、凋亡抑制的作用.

圖2 抑制miR-216a-5p對急性胰腺炎腺泡細胞增殖的影響.A：miR-216a-5p的表達; B：抑制miR-216a-5p對急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)腺泡細胞增殖的影響; C,D：抑制miR-216a-5p對AP腺泡細胞增殖蛋白表達的影響.aP＜0.05,vs AR42J組; cP＜0.05,vs AR42J+CAE+anti-miR-NC

圖3 抑制miR-216a-5p對急性胰腺炎腺泡細胞凋亡的影響.A、B：抑制miR-216a-5p對急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)腺泡細胞凋亡的影響; C,D：抑制miR-216a-5p對AP腺泡細胞凋亡蛋白表達的影響.aP＜0.05,vs AR42J組; cP＜0.05,vs AR42J+CAE+anti-miR-NC組.

圖4 miR-216a-5p靶向、調(diào)控XIAP的表達.A：XIAP的3’UTR含有miR-216a-5p互補序列; B：雙分子熒光素酶實驗; C：miR-216a-5p調(diào)控XIAP mRNA的表達; D：XIAP蛋白的表達.aP＜0.05,vs miR-NC組; cP＜0.05,vs anti-miR-NC組.

圖5 過表達XIAP對急性胰腺炎腺泡細胞增殖、凋亡的影響.A：過表達XIAP對急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)腺泡細胞增殖的影響; B：過表達XIAP對AP腺泡細胞凋亡的影響; C、D：過表達XIAP對AP腺泡細胞增殖、凋亡蛋白表達的影響.aP＜0.05,vs AR42J組; cP＜0.05,vs AR42J+CAE+pcDNA3.1組.

圖6 抑制XIAP表達能逆轉(zhuǎn)抑制miR-216a-5p對急性胰腺炎腺泡細胞增殖、凋亡的作用.A：抑制XIAP表達能逆轉(zhuǎn)抑制miR-216a-5p對急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)腺泡細胞增殖的促進作用; B：抑制XIAP表達能逆轉(zhuǎn)抑制miR-216a-5p對AP腺泡細胞凋亡的抑制作用; C、D：抑制XIAP表達能逆轉(zhuǎn)抑制miR-216a-5p對AP腺泡細胞增殖、凋亡蛋白表達的作用.aP＜0.05,vs AR42J+CAE+anti-miR-NC組; cP＜0.05,vs AR42J+CAE+anti-miR-216a-5p+si-NC組.

3 討論

AP是由多種病因誘發(fā)的一種急腹病,發(fā)病率及病死率高,嚴重影響人們生命健康[10].近些年來的研究發(fā)現(xiàn)多種miRNA在AP中異常表達,在其診斷、預(yù)后和發(fā)病機制中具有重要作用[11].miR-216a為急性胰腺損傷的標志物,在AP大鼠模型中上調(diào)表達[12].Ku?nierz等[13]研究發(fā)現(xiàn)miR-216a-5p在AP患者表達升高,可以預(yù)測AP的嚴重程度.轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor,TGF)-β誘導(dǎo)的miR-216a-5p通過Akt和TGF-β通路加重小鼠AP[14].miR-216a-5p在膀胱癌中低表達,可抑制膀胱癌細胞的增殖,促進細胞凋亡[15].miR-216a-5p通過Bcl-2家族蛋白抑制小細胞肺癌的惡性進展[16].上調(diào)miR-216a-5p也能抑制前列腺癌細胞的增殖,遷移和侵襲[17]; 還可通過靶向RUNX1激活NF-κB信號通路抑制人胃癌細胞的增殖,遷移和侵襲[18].本研究結(jié)果顯示,miR-216a-5p在CAE處理的AR42J細胞中表達水平顯著升高,抑制表達miR-216a-5p可提高細胞活性,降低細胞凋亡率.miR-216a-5p靶向負調(diào)控XIAP表達.

XIAP是凋亡抑制蛋白家族中最強的內(nèi)源性的抑制因子,可通過不同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及調(diào)控相關(guān)凋亡蛋白酶的表達產(chǎn)生抗凋亡作用,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系[19].XIAP下調(diào)可以促進腫瘤細胞的凋亡,逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞耐藥,增強腫瘤細胞化療的敏感性[20].研究發(fā)現(xiàn)AP病情輕重程度與XIAP蛋白表達有關(guān),AP病情越重XIAP表達越高[21],XIAP參與細胞凋亡的調(diào)節(jié)[22].李富龍等[23]研究發(fā)現(xiàn)清下化瘀方可通過下調(diào)Survivin、XIAP的表達而起到治療AP的作用.XIAP的下調(diào)與大鼠中CAE誘導(dǎo)的AP中的細胞凋亡相關(guān)[24].XIAP會導(dǎo)致嚴重的AP[25],而XIAP的缺失則能降低AP的嚴重程度[26].XIAP在CAE刺激的大鼠胰腺腺泡細胞中負向調(diào)控AR42J細胞的凋亡[27].本研究結(jié)果顯示,過表達XIAP促進CAE處理的AR42J細胞增殖,抑制細胞凋亡,促進Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表達,抑制P21、Bax蛋白的表達.抑制XIAP表達可逆轉(zhuǎn)抑制miR-216a-5p對CAE處理的AR42J細胞增殖促進、凋亡抑制的作用.

綜上所述,抑制miR-216a-5p表達可以抑制胰腺炎腺泡細胞凋亡,促進細胞增殖,其機制可能與靶向調(diào)控XIAP有關(guān).可為AP診斷和治療提供新靶點和新思路.

文章亮點

實驗背景

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的發(fā)病機制復(fù)雜,并發(fā)癥較多,對人生命健康危害加大.根據(jù)其嚴重程度的不同,可分為輕型急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)和重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP).MAP較容易治愈,但SAP因為早期病情隱匿,后期發(fā)展快,發(fā)現(xiàn)時已很嚴重,所以死亡率較高.早診斷、早發(fā)現(xiàn)、早治療是對SAP具有重要意義.AP主要病因有膽源性,高脂血癥性,酒精性,暴飲暴食性等.早期主要采用非手術(shù)個體化治療,包括液體復(fù)蘇、抗生素的使用、早期腸內(nèi)營養(yǎng)、特效藥物和我國的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)治療等.更為精準高效的治療需要清楚其進展機制,研究miRNA可以作為AP的生物標志物,預(yù)測并且判定AP的發(fā)生、發(fā)展、并發(fā)癥發(fā)生等,還可以調(diào)控AP的程序性細胞死亡,并且可以作為AP的治療靶點.而本文主要是從miRNA方面研究其對AP凋亡的影響及其可能的作用機制.

實驗動機

本研究的主題是miR-216a-5p對AP增殖凋亡的影響,擬解決的關(guān)鍵問題是了解miR-216a-5p是如何影響AP細胞的增殖和凋亡,以及其和XIAP之間的關(guān)系及它們對AP的影響,在AP中的發(fā)生發(fā)展機制,為以后臨床上的診斷治療等提供新思路和新靶點.

實驗?zāi)繕?/p>

研究的主要目標即miR-216a-5p,XIAP,AP之間的關(guān)系,研究得到miR-216a-5p和XIAP均在AP中異常表達,抑制miR-216a-5p表達和過表達XIAP均可抑制雨蛙素(caerulein,CAE)處理AR42J細胞凋亡,且miR-216a-5p靶向負調(diào)控XIAP.可以從調(diào)控AP凋亡的途徑來調(diào)控其進展,為其治療提供新思路.

實驗方法

本研究首先是用CAE處理大鼠胰腺腺泡來構(gòu)建AP的模型.轉(zhuǎn)染miR-216a-5p抑制表達和XIAP過表達的載體質(zhì)粒,MTT檢測細胞增殖活性,流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡,Western blot檢測XIAP蛋白表達,qRT-PCR檢測miR-216a-5p和XIAP mRNA表達水平,熒光素酶報告基因檢測實驗檢測miR-216a-5p與XIAP之間的靶向關(guān)系.

實驗結(jié)果

本實驗的結(jié)果是在CAE構(gòu)建的AP模型細胞中,miR-216a-5p的表達水平升高.抑制miR-216a-5p表達、過表達XIAP腺泡細胞凋亡率降低.miR-216a-5p靶向負調(diào)控XIAP,抑制XIAP表達逆轉(zhuǎn)了抑制miR-216a-5p對CAE處理AR42J細胞的凋亡抑制作用; 達到了本實驗的目的,對該領(lǐng)域AP的發(fā)病進展機制又增加了相關(guān)的理論依據(jù),以后可以進一步在臨床方面進行研究應(yīng)用.

實驗結(jié)論

miR-216a-5p靶向負調(diào)控XIAP; 抑制miR-216a-5p表達、過表達XIAP抑制腺泡細胞凋亡.可以通過調(diào)控XIAP影響AP的進展.從miRNA角度去研究其對AP的影響拓寬了研究的范圍,更多的miRNA影響AP的進展,增加了可治療的靶點.不同的miRNA在AP中的表達不同,可通過研究不同的miRNA及其不同的靶基因影響AP的進展進而拓展研究思路.miR-216a-5p可以調(diào)控XIAP影響腺泡細胞凋亡.通過上調(diào)或下調(diào)miRNA可以影響AP的細胞的凋亡及其嚴重程度.對未來臨床實踐提供了新的靶點和思路.

展望前景

只是在理論層面上對小鼠模型的研究,到臨床上的研究和應(yīng)用還相差甚遠.進一步深入的研究調(diào)控miR-216a-5p和XIAP對治療AP小鼠的影響及其可能會產(chǎn)生的現(xiàn)象以及進一步往臨床方向進行相關(guān)研究.尋找更接近于真實AP的小鼠或者與人AP更為相似的受體,再次基礎(chǔ)上進行治療,同時觀察其后期的反應(yīng)和狀況.