GMPS，PR，CD40和p21對(duì)卵巢癌預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值（Prognostic values of GMPS,PR CD40,and p21 in ovarian cancer全譯）

王萍 張?jiān)隼?馬予潔 路君 趙虎 王水良 譚建明 李冰燕

卵巢癌致死率在女性疾病中處于領(lǐng)先地位。上皮性卵巢癌約占所有類型卵巢癌的90%[1]并且在癌細(xì)胞已經(jīng)轉(zhuǎn)移到其他器官的晚期階段才被診斷出來[2]。比如，卵巢癌只占所有女性癌癥的2.5%，但是在女性癌癥死亡率中卻占了5%，其表明卵巢癌5年生存率很低[2]。然而，如果早期確診，5年生存率將會(huì)達(dá)到93%[3]。因此，早期腫瘤診斷和有效預(yù)后預(yù)測(cè)是提高卵巢癌患者生存的關(guān)鍵。為此，之前有研究已經(jīng)評(píng)估了生物標(biāo)記物以便及早診斷這種致命的疾病并預(yù)測(cè)生存或治療效果，或針對(duì)生物標(biāo)記基因開發(fā)新的卵巢癌治療靶點(diǎn)[2]。有一些研究也分析粘液性和透明卵巢細(xì)胞癌之間，低級(jí)別與低惡性潛能和高級(jí)別轉(zhuǎn)移性卵巢癌之間的差異基因表達(dá)模式[2-4]。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)基因或基因表達(dá)的改變與卵巢癌的早期診斷或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的生物標(biāo)志物相關(guān)聯(lián)[5-6]。然而，迄今為止，沒有可用于此目的有用（可靠）的分子及臨床標(biāo)記物[7]。目前使用基因表達(dá)譜尋找差異基因的方法多是比較卵巢癌與正常組織差異，這會(huì)導(dǎo)致獲取數(shù)據(jù)有限。早期前驅(qū)病變和卵巢癌之間的差異基因表達(dá)譜可用于卵巢癌的早期診斷、預(yù)測(cè)預(yù)后，并為治療靶標(biāo)的生物標(biāo)志物提供新的見解。

本文根據(jù)Gamwell等[8]描述的方法建立并鑒定了小鼠上皮卵巢癌進(jìn)展的體外細(xì)胞模型。該細(xì)胞模型是從小鼠卵巢中分離卵巢表面上皮細(xì)胞（mouse ovarian surface epithelial cells，MOSECs）并在體外連續(xù)培養(yǎng)。這些MOSECs在體外可以發(fā)生自發(fā)的惡性轉(zhuǎn)化形成上皮卵巢癌細(xì)胞。在體外細(xì)胞培養(yǎng)和傳代期間，MOSECs顯示出形態(tài)變化和基因表達(dá)改變[8-11]，這可能是模擬人卵巢癌發(fā)生的良好體外細(xì)胞模型。先前的研究表明，自發(fā)轉(zhuǎn)化的MOSECs具有HGSC腫瘤細(xì)胞所有特征。同時(shí)MOSE-I細(xì)胞具備癌前良性腫瘤所有特質(zhì)，而MOSE-II細(xì)胞是惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞[10]。

材料與方法

一、試劑與儀器

本研究的動(dòng)物方案經(jīng)福州總醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并遵循美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院的監(jiān)管動(dòng)物護(hù)理指南。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司），所述DMEM F12培養(yǎng)基（美國(guó)Thermo-Fisher Scientific 公司），4%熱滅活的胎牛血清（美國(guó)Gibco公司）。慶大霉素，青霉素和鏈霉素溶液（美國(guó)Invitrogen公司），EVOS XL成像系統(tǒng)（美國(guó)Thermo-Fisher Scientific 公司）。

二、方法

（一）分離與培養(yǎng)MOSECs

根據(jù)Gamwell等[8]和McCloskey等[10]描述的方案，分離MOSECs并在“MOSE培養(yǎng)基”中培養(yǎng)它們，所述培養(yǎng)基來自Thermo-Fisher Scientific Company的DMEM F12培養(yǎng)基，補(bǔ)充有4%熱滅活的胎牛血清，5 U/ml青霉素和5 μg/ml鏈霉素溶液，0.1 μg/ml慶大霉素，在 37 ℃，5%CO2下培養(yǎng)。根據(jù)先前的研究[9]，具有自發(fā)惡性轉(zhuǎn)化表型的MOSECs維持在MOSE培養(yǎng)基中，其會(huì)經(jīng)歷2個(gè)階段，即早期階段（MOSE-Ⅰ；正常上皮細(xì)胞）和晚期階段（MOSE-Ⅱ；卵巢癌細(xì)胞的各種表型）。

（二）MOSE-I和MOSE-II細(xì)胞的培養(yǎng)和特征鑒定

為了誘導(dǎo)MOSECs的自發(fā)惡性轉(zhuǎn)化，本研究在MOSECs培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)和傳代原代MOSECs。小于35代的MOSECs細(xì)胞命名為MOSE-Ⅰ細(xì)胞，MOSE-Ⅰ繼續(xù)培養(yǎng)超過35代命名為MOSE-Ⅱ細(xì)胞。使用0.05%胰蛋白酶消化并傳代細(xì)胞，用磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）洗滌，制備單細(xì)胞懸液，然后將100個(gè)細(xì)胞接種到35 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)14 d。然后使用結(jié)晶紫染色，拍照，計(jì)數(shù)。在軟瓊脂測(cè)定中，在60 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中1 : 1混合2×Ham's F-12：MOSE培養(yǎng)基與瓊脂糖制備基層瓊脂。然后將細(xì)胞懸浮液（2.5×104）與超純LMP瓊脂糖在37 ℃下混合，然后將其倒入瓊脂基層頂部，并在37 ℃下孵育14 d。使用EVOS XL成像系統(tǒng)拍攝細(xì)胞克隆，并使用Image J軟件定量。

（三）新一代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)MOSE-Ⅰ和MOSE-Ⅱ細(xì)胞之間差異表達(dá)基因

為了分析MOSE-Ⅰ和MOSE-Ⅱ細(xì)胞之間差異表達(dá)的基因，對(duì)MOSE-Ⅰ和MOSE-Ⅱ細(xì)胞進(jìn)行了新一代測(cè)序。根據(jù)測(cè)序商的方案，使用Trizol Reagent從MOSE-Ⅰ和MOSE-Ⅱ細(xì)胞中分離提取總細(xì)胞RNA。在RNA定量和逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后，本研究使用Illumina TruSeq文庫(kù)制備每種細(xì)胞類型的cDNA文庫(kù)，然后使用Illumina HiSeq 2000 NGS平臺(tái)對(duì)MOSE-Ⅰ和MOSE-Ⅱ細(xì)胞之間的差異表達(dá)基因進(jìn)行新一代測(cè)序。GEPIA是一個(gè)網(wǎng)絡(luò)工具（http://gepia.cancer-pku.cn/），用于分析腫瘤和非腫瘤組織之間的基因表達(dá)，并提供交互式數(shù)據(jù)分析。本研究利用這個(gè)在線工具分析卵巢癌標(biāo)本和正常對(duì)照之間四種選定顯著差異表達(dá)基因（different expression genes，DEGs）（即 GMPS，PR，CD40和p21）的水平。

（四）進(jìn)行生物信息學(xué)分析，構(gòu)建成蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)

使用GO分析對(duì)這些DEGs進(jìn)行生物信息學(xué)分析，以注釋這些DEGs的獨(dú)特生物學(xué)功能。然后再使用KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步分析了它們參與的信號(hào)通路。使用Fisher檢驗(yàn)生成GO術(shù)語(yǔ)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，并使用P值與錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（FDR）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)校正。在使用GO術(shù)語(yǔ)和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)這些DEGs進(jìn)行生物信息學(xué)分析后，根據(jù)先前的報(bào)告使用STRING將這些DEGs構(gòu)建到PPI網(wǎng)絡(luò)中[12]。該網(wǎng)絡(luò)資源包含用于全面預(yù)測(cè)已知蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)。將DEGs上傳到STRING數(shù)據(jù)庫(kù)，然后網(wǎng)站為這些DEGs生成PPI。本研究使用P＜ 0.05的組合分?jǐn)?shù)作為截止標(biāo)準(zhǔn)，以識(shí)別任何給定的蛋白質(zhì)與另一個(gè)蛋白質(zhì)相互作用，然后根據(jù)Saito等[13]之前的研究將這個(gè)PPI導(dǎo)入Cytoscape軟件，從而進(jìn)一步構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，其中通過計(jì)算連接到其他蛋白質(zhì)與非連接蛋白質(zhì)的程度來揭示中樞節(jié)點(diǎn)（具有重要生物學(xué)功能的關(guān)鍵蛋白質(zhì)）。

（五）TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)和cBioPortal

TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)用于存儲(chǔ)30種不同人類癌癥的差異表達(dá)基因和臨床病理學(xué)數(shù)據(jù)[14]。本研究檢索了浸潤(rùn)卵巢癌數(shù)據(jù)集，其中包括606例卵巢癌與311例正常組織的DEGs數(shù)據(jù)。然后，將DEGs數(shù)據(jù)放入 cBioPortal（www.cbioportal.org），這是一個(gè)幫助探索，可視化和分析DEG數(shù)據(jù)的Web資源。根據(jù)cBioPortal的在線說明計(jì)算這些DEGs對(duì)總生存期（OS）和無病生存期（DFS）的貢獻(xiàn)。此外，根據(jù)之前的研究，使用Kaplan-Meier Plotter在線工具（www.kmplot.com）生成了 GMPS，PR，Cd40和p21 mRNA水平表達(dá)并分析其卵巢癌患者的Kaplan-Meier曲線[15]。該網(wǎng)站包括4 142例卵巢癌患者的基因表達(dá)和存活數(shù)據(jù)。使用Kaplan-Meier曲線和對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)以及風(fēng)險(xiǎn)比的95%置信區(qū)間，分析了GMPS，PR，CD40和p21的高表達(dá)與低表達(dá)對(duì)卵巢癌患者的無復(fù)發(fā)生存期（RFS）影響。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法

使用SAS9.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。細(xì)胞克隆形成率均使用表示。兩樣本之間的差異性分析使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、 MOSE-Ⅰ和MOSE-Ⅱ細(xì)胞的表型

MOSE-Ⅰ和MOSE-Ⅱ細(xì)胞的表型不同。MOSE-Ⅰ細(xì)胞的早期細(xì)胞增長(zhǎng)緩慢，而MOSE-Ⅱ的生長(zhǎng)速率增加。形態(tài)學(xué)上，MOSE-Ⅰ細(xì)胞在倒置顯微鏡下開始失去上皮“鵝卵石”樣外觀（圖1a、b）。MOSE-Ⅱ失去上皮“鵝卵石”樣形態(tài)并轉(zhuǎn)變?yōu)殚g充質(zhì)長(zhǎng)梭形（圖1a、b）。在瓊脂實(shí)驗(yàn)中，MOSE-Ⅱ細(xì)胞能夠在軟瓊脂中形成克隆，而MOSE-Ⅰ則不能（圖1c、b、d）。本研究還使用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定評(píng)估了MOSECs的增殖能力，并發(fā)現(xiàn)MOSE-Ⅱ形成的克隆比MOSE-Ⅰ細(xì)胞形成的更大（圖1f、g、h、i）。

二、對(duì)MOSE-Ⅰ和MOSE-Ⅱ細(xì)胞之間差異表達(dá)基因的分析

使用MOSE-Ⅰ和Ⅱ的細(xì)胞模型，并用Illumina HiSeq 2000 NGS平臺(tái)對(duì)DEGs進(jìn)行了分析。在第5代（P5），P15和P25分別隨機(jī)選擇MOSE-Ⅰ細(xì)胞，而在P50，P70和P90分別選擇MOSE-Ⅱ細(xì)胞。其中，檢測(cè)和分析了14 218個(gè)基因。發(fā)現(xiàn)總共263個(gè)DEGs，其中包括的182個(gè)上調(diào)的和81個(gè)下調(diào)（圖2）。上調(diào) DEGs的截點(diǎn)值是 log2 FC＞2和P＜ 0.05，而下調(diào)的 DEGs是 log2 FC ＜ -2，P＜ 0.05（表1）。

三、關(guān)于DEGs的GO，KEGG和PPI網(wǎng)絡(luò)的生物信息分析

GO分析表明這些DEGs在細(xì)胞生物學(xué)中形成了幾個(gè)重要分子功能，生物過程與細(xì)胞組分，如這些基因參與細(xì)胞增殖的正調(diào)節(jié)，RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄正調(diào)節(jié)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（圖3b）。KEGG信號(hào)通路富集顯示這些DEGs形成的中樞基因富集在與卵巢癌相關(guān)的PI3K-Akt信號(hào)通路中（圖3a），上述特征都與卵巢癌發(fā)展正相關(guān)[16-18]。此外，這些DEGs形成的PPI網(wǎng)絡(luò)，如圖4所示。此網(wǎng)絡(luò)中有35個(gè)中樞節(jié)點(diǎn)基因其中包括27個(gè)上調(diào)基因和8個(gè)下調(diào)基因（表2）。

圖1 MOSE-I和MOSE-II細(xì)胞的特征

四、DEGs形成的核心基因的表達(dá)與卵巢癌患者的總體存活率的關(guān)聯(lián)性

本研究使用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中數(shù)據(jù)將這些DEGs形成的中樞基因的表達(dá)與卵巢癌患者的OS和DFS相關(guān)聯(lián)。首先評(píng)估了來自263例浸潤(rùn)性卵巢癌患者的182個(gè)組織樣本中，發(fā)現(xiàn)35個(gè)核心基因中有 4個(gè)（GMPS，PR，CD40和p21）基因在卵巢癌組織中的改變率超過10%（圖5a）。然后，繪制了Kaplan-Meier曲線，并進(jìn)行了對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)，將它們與患者的OS和DFS相關(guān)聯(lián)。本研究結(jié)果顯示GMPS，PR，CD40和p21 mRNA的異常表達(dá)與患者中較差的OS相關(guān)（圖5b），但與患者中的DFS無關(guān)（圖5c）。

實(shí)際上，這4個(gè)基因在卵巢癌與正常組織中均差異表達(dá)。GMPS在卵巢癌組織中高表達(dá)（圖6a），其與患者中RFS相關(guān)（圖6e）。相反，在卵巢癌組織中PR，CD40和p21 mRNA的表達(dá)降低（圖6b、c、d），這與不良的 RFS 相關(guān)（圖6f、g、h）。

討 論

本研究分析了惡變前的MOSE-Ⅰ和高度惡化的MOSE-Ⅱ細(xì)胞之間的DEGs，發(fā)現(xiàn)了182個(gè)上調(diào)的和81個(gè)下調(diào)的DEGs。生物信息學(xué)分析表明，這些DEGs能正調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子的基因轉(zhuǎn)錄和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，而KEGG通路數(shù)據(jù)顯示這些DEGs可能與癌癥中PI3K-Akt信號(hào)通路有關(guān)。此外，這些DEGs的PPI網(wǎng)絡(luò)分析確定了35個(gè)中樞基因（27個(gè)上調(diào)基因和8個(gè)下調(diào)基因），其中4個(gè)與卵巢癌患者的總體存活率相關(guān)。此外這4個(gè)基因在卵巢癌組織與正常組織中均差異表達(dá)。具體而言，GMPS在卵巢癌組織中高表達(dá)，其與RFS相關(guān)，而PR、CD40和p21 mRNA的在卵巢癌組織中的表達(dá)降低，這與RFS不良相關(guān)?？傊?，本研究分析并鑒定了4個(gè)DEGs，其可以預(yù)測(cè)卵巢癌患者的總體存活率和無復(fù)發(fā)存活率。然而本研究結(jié)果在臨床使用之前還需要進(jìn)一步的前瞻性臨床研究驗(yàn)證。

表1 MOSE-I和MOSE-II細(xì)胞之間的差異表達(dá)基因

圖2 使用火山圖表示所有差異表達(dá)基因（DEGs）

這種卵巢癌體外惡性轉(zhuǎn)化的細(xì)胞模型是用于鑒定基因改變和藥物效應(yīng)測(cè)試的有用工具。在該系統(tǒng)中，體外培養(yǎng)的MOSECs可以自發(fā)地惡性轉(zhuǎn)化為卵巢癌細(xì)胞[10]。形態(tài)學(xué)上，MOSE-Ⅱ細(xì)胞失去了正常的上皮細(xì)胞“鵝卵石”特征，能夠形成軟瓊脂集落以及基因改變。當(dāng)將MOSE-Ⅱ細(xì)胞注射到免疫缺陷動(dòng)物的腹膜腔中時(shí)，在小鼠腹膜腔中形成腫瘤轉(zhuǎn)移和血性腹水[19-20]，這是典型的人晚期卵巢癌患者的表現(xiàn)[21]。2014年McCloskey等[10]發(fā)現(xiàn)，MOSE-Ⅱ的差異表達(dá)基因與人類高級(jí)別漿液性卵巢癌（human high-grade serous ovarian cancer，HGSC）腫瘤樣本及其卵巢癌細(xì)胞系的差異基因一致。免疫組化分析后的HGSC腫瘤組織證實(shí)MOSE-Ⅱ可作為HGSC的同源模型。MOSE-Ⅱ似乎比卵巢癌細(xì)胞系更具攻擊性，體外克隆形成效率增加，體內(nèi)腫瘤發(fā)作更快[10]。因此，這種細(xì)胞模型可用于未來的卵巢癌預(yù)防和治療研究[22]。本研究使用該模型系統(tǒng)分析了MOSE-Ⅰ和MOSE-Ⅱ細(xì)胞之間的DEGs，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)分析確定35個(gè)中樞節(jié)點(diǎn)的其中9個(gè)基因參與PI3K-Akt信號(hào)通路。這證實(shí)了先前研究結(jié)論，表明PI3K-Akt為卵巢癌的潛在治療靶點(diǎn)[17]。PIK3CA突變或在高達(dá)30%的卵巢癌患者中擴(kuò)增，而PTEN在40%的患者中表達(dá)喪失[16,23]。此外，這35個(gè)中樞基因中的6個(gè)是Rap1信號(hào)通路的一部分，之前的一項(xiàng)研究報(bào)道它們與漿液性卵巢癌轉(zhuǎn)移相關(guān)[24]。

表2 在所有差異基因中，點(diǎn)度中心值大于5的核心基因

此外，GO分析顯示這些DEGs參與正向調(diào)控細(xì)胞增殖，這是癌癥六個(gè)基本標(biāo)志之一：生長(zhǎng)信號(hào)的自給自足[25]。實(shí)際上，細(xì)胞增殖的正向調(diào)節(jié)是癌癥發(fā)生和發(fā)展的基礎(chǔ)。在當(dāng)前研究中鑒定出的每一種生物學(xué)途徑都可以促進(jìn)或?qū)⒄＜?xì)胞轉(zhuǎn)化為癌細(xì)胞[26]。本研究確定了4個(gè)基因特征來預(yù)測(cè)卵巢癌患者的總體存活率。GMPS是鳥苷5'-單磷酸合酶，是將黃嘌呤核苷一磷酸轉(zhuǎn)化為鳥苷一磷酸的酶。因此，GMPS在正常細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生中重要的核苷酸生物合成酶。Reddy的數(shù)據(jù)顯示，TRIM21與USP7會(huì)聯(lián)合GMPS形成了一種分子級(jí)聯(lián)反應(yīng)，可控制DNA損傷或核苷酸缺失時(shí)p53的穩(wěn)定性。因此，GMPS是一種促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和DNA復(fù)制的經(jīng)典生物合成酶，也是p53限制細(xì)胞增殖的關(guān)鍵[27]。我們發(fā)現(xiàn)與非腫瘤組織相比，GMPS在卵巢癌組織中高表達(dá)，并且GMPS表達(dá)與患者的RFS相關(guān)尚未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。GMPS是肝癌細(xì)胞中重要的p53抑制靶點(diǎn)[28]，這進(jìn)一步表明了GMPS在腫瘤發(fā)生中的重要性。PR作為核受體，其功能是調(diào)節(jié)激素響應(yīng)組織的發(fā)育和循環(huán)，例如乳腺和生殖道。之前的研究表明PR表達(dá)作為預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜樣和高級(jí)別漿液性卵巢癌預(yù)后較好的生物標(biāo)志物[29-32]，它會(huì)在卵巢癌的晚期缺失表達(dá)[33]。實(shí)際上，本研究也證實(shí)了以前的數(shù)據(jù)：孕酮和孕激素對(duì)卵巢癌的發(fā)生具有保護(hù)作用，PR的表達(dá)是卵巢癌患者無進(jìn)展生存期延長(zhǎng)有利的預(yù)后標(biāo)志物[34-36]。CD40是跨膜糖蛋白和腫瘤壞死因子受體超家族的成員，其可介導(dǎo)多種免疫和炎癥反應(yīng)[37]。CD40經(jīng)常在不同的免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞中表達(dá)。CD40與CD40配體的結(jié)合會(huì)出現(xiàn)在人體的各種生理和病理過程[37-38]。CD40配體增強(qiáng)了上皮卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑治療的敏感性[39]。CD40在卵巢癌細(xì)胞系和腫瘤樣品中高表達(dá)，但在正常卵巢組織中不表達(dá)[40]。本研究中，與MOSE-Ⅰ細(xì)胞相比，MOSE-Ⅱ細(xì)胞中CD40表達(dá)升高；然而，卵巢癌組織中CD40表達(dá)降低，這與先前研究的結(jié)果相反[40]。因此，需要進(jìn)一步研究以確定這種差異的原因。p21也稱為CDKN1A是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A，其功能是通過抑制Cdks調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，這是細(xì)胞周期從G1期轉(zhuǎn)變?yōu)镾期的關(guān)鍵[41]。通過與增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的相互作用，p21能夠抑制DNA復(fù)制[18]。p21在正常組織中高表達(dá)，但在卵巢癌組織中減少，這與患者的更好的存活率相關(guān)，與先前的研究一致[42]。實(shí)際上，之前的研究表明吡啶衍生物誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞衰老是通過p21激活而發(fā)生的[43]。然而，其他研究報(bào)道CDKN1A/p21表達(dá)促進(jìn)乳腺癌并介導(dǎo)其耐藥性[44-45]。臨床研究表明。p21高表達(dá)與胃癌和食管癌預(yù)后不良有關(guān)[46-47]。因此，需要進(jìn)一步研究以澄清這種差異。

圖3 DEGs形成的中樞基因的功能和通路富集分析

圖4 差異表達(dá)基因形成的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)

圖5 前四個(gè)核心基因的鑒定與卵巢癌患者的存活率的關(guān)聯(lián)性

圖6 GMPS，PR，CD40和p21在卵巢癌和正常組織之間的差異表達(dá)以及與卵巢癌患者的無復(fù)發(fā)存活率的關(guān)系

當(dāng)然，本研究確實(shí)存在一些局限性。例如，只是描述了卵巢癌中差異表達(dá)的基因，并將它們與卵巢癌的預(yù)后相關(guān)聯(lián)，進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，將其中四種基因與卵巢癌進(jìn)展聯(lián)系起來；在對(duì)卵巢癌發(fā)生和進(jìn)展中的生物學(xué)功能和作用還沒有更多的研究。此外，在臨床應(yīng)用之前，還需要對(duì)卵巢癌中的這些DEGs進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證。