針刺太沖穴對(duì)海洛因成癮模型大鼠腦功能和神經(jīng)內(nèi)分泌因子的影響*

楊 雪，王玫玲△，張 堯

(1.武漢市精神衛(wèi)生中心精神科 430022；2.武漢市衛(wèi)生健康委員會(huì) 430033)

毒品濫用為目前世界范圍內(nèi)最嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一，多數(shù)吸毒者經(jīng)脫毒治療后會(huì)再次吸毒[1]，以海洛因?yàn)E用最為常見[2]。海洛因成癮過程是由偶爾的用藥過渡至強(qiáng)迫性用藥的過程，患者多表現(xiàn)為用藥后欣快狀態(tài)，撤藥后戒斷反應(yīng)伴隨沮喪、焦慮等嚴(yán)重的精神癥狀[3-4]，使成癮者易復(fù)吸，為脫毒治療亟待解決的問題。研究顯示，阿片類物質(zhì)成癮可使大鼠腦海馬、中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA)等部位出現(xiàn)明顯的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、線粒體腫脹，以及細(xì)胞核周圍固縮等神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)變化，改善由成癮物質(zhì)導(dǎo)致的腦神經(jīng)元損傷為臨床研究的熱點(diǎn)問題之一[5-6]。針灸為祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)療法，針刺可通過抗細(xì)胞凋亡、促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞修復(fù)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[7-8]，但在海洛因成癮中的應(yīng)用尚不多見。本研究通過建立海洛因成癮大鼠模型，觀察針刺太沖穴對(duì)大鼠腦功能、神經(jīng)內(nèi)分泌因子的影響，探討針刺太沖穴治療海洛因成癮的機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 雌性SD健康大白鼠90只，體質(zhì)量200～250 g，購自湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，合格證號(hào)：SCXX(鄂)2008-0005。按簡單隨機(jī)抽樣法將90只大鼠分為正常對(duì)照組(A組)，海洛因復(fù)吸模型組(B組)、針刺治療組(C組)，每組30只大鼠。

1.2方法

1.2.1海洛因成癮大鼠模型建立 給予大鼠肌內(nèi)注射遞增量海洛因，建立海洛因成癮模型。染毒階段：第1天劑量0.8 mg·kg-1·d-1，自第2天開始，每天劑量增加0.2 mg·kg-1·d-1，至第8天劑量為2.2 mg·kg-1·d-1。第4～8天，每天注射2次，分別于早7:00，晚7:00注射。脫毒階段：停止注射海洛因5 d，自然戒斷。

1.2.2各組大鼠處理方法 A組根據(jù)建立海洛因成癮大鼠模型的實(shí)驗(yàn)周期，成癮階段給予大鼠肌內(nèi)注射0.9%氯化鈉(NaCl)溶液，劑量為每天0.2 mL；大鼠脫毒實(shí)驗(yàn)階段不給予任何治療措施，實(shí)驗(yàn)第13天處死大鼠，心臟取血待檢。同時(shí)將大鼠斷頭處死，迅速剝?nèi)∪X，洗凈血液，除去腦膜后，放液氮冷凍保存。B組根據(jù)建立海洛因復(fù)吸大鼠模型的實(shí)驗(yàn)周期，成癮階段給予大鼠持續(xù)遞增劑量的海洛因，肌內(nèi)注射；脫毒實(shí)驗(yàn)階段不給予任何治療措施，實(shí)驗(yàn)第13天，同法留全腦及血液待檢。C組根據(jù)建立的海洛因復(fù)吸大鼠模型的實(shí)驗(yàn)周期，在成癮階段，給予持續(xù)遞增量肌內(nèi)注射海洛因；脫毒實(shí)驗(yàn)階段，給予針刺太沖穴治療，按《大鼠穴位圖譜》[9-10]所示選擇太沖穴，以25 mm的針灸針對(duì)太沖穴施以斜刺，進(jìn)入皮下12 mm，留針30 min，每天1次，總共治療5 d。在實(shí)驗(yàn)第13天，同法留全腦及血液待檢。

1.3觀察指標(biāo) (1)海洛因成癮強(qiáng)度評(píng)價(jià)：采用納洛酮激發(fā)實(shí)驗(yàn)，第8天3組各抽取10只大鼠，每只大鼠腹腔注射0.8 mg納洛酮催癮，根據(jù)MALDONADO等[11]戒斷癥狀評(píng)分評(píng)定大鼠的海洛因成癮強(qiáng)度，包括：扭體、濕狗樣顫抖、站立、跳躍、齒顫、上瞼下垂等。觀察時(shí)間為腹腔注射納洛酮后開始計(jì)時(shí)，持續(xù)觀察20 min。(2)行為學(xué)指標(biāo)：將實(shí)驗(yàn)大鼠置于實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)20 min后，大鼠面朝開臂方向放置于十字迷宮中心，記錄大鼠5 min內(nèi)在開臂、閉臂停留時(shí)間，進(jìn)入開臂、閉臂的次數(shù)(以兩前爪進(jìn)入臂內(nèi)判定為進(jìn)臂1次)。開臂停留時(shí)間的百分比，進(jìn)入開臂次數(shù)的百分比作為焦慮程度的檢測指標(biāo)。(3)腦功能指標(biāo)：腹腔注射10%的水合氯醛麻醉大鼠，快速斷頭處死，迅速在冰盤上剝離腦干組織(腦干界定：尾端為枕骨大孔，頭端腹側(cè)為間腦下緣，頭端背側(cè)為上丘上緣)，取腦干組織稱重，置于預(yù)冷酸性丁醇溶液中勻漿，轉(zhuǎn)移勻漿液至離心管內(nèi)，補(bǔ)足正丁醇至10 mL，3 000 r/min離心10 min，取上清液1.5 mL測定去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)水平。以熒光分光光度計(jì)檢測，發(fā)射光/激發(fā)光分別為NE 480 nm/385 nm，DA 375 nm/325 nm，5-HT 480 nm/365 nm。(4)神經(jīng)內(nèi)分泌因子：以放射免疫法(RIAS)檢測血清N端腦鈉肽前體(NT-proBNP)、血漿血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)及醛固酮(ALD)水平。

2 結(jié) 果

2.1海洛因成癮強(qiáng)度評(píng)定 B、C組大鼠扭體、濕狗樣顫抖、跳躍、站立、齒顫、上瞼下垂等戒斷癥狀評(píng)分均高于A組(P<0.05)；B、C組大鼠之間上述戒斷癥狀評(píng)分比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。海洛因成癮模型成功。

2.2行為學(xué)指標(biāo)比較 B、C組大鼠進(jìn)入開臂次數(shù)百分率、開臂滯留時(shí)間百分率低于A組(P<0.05)；C組大鼠進(jìn)入開臂次數(shù)百分率、開臂滯留時(shí)間百分率高于B組(P<0.05)，見表2。

2.3腦功能比較 B、C組大鼠腦干中(濕重腦干組織)NE、DA、5-HT水平高于A組(P<0.05)，B組大鼠腦干中NE、DA、5-HT水平高于C組(P<0.05)，見表3。

表1 3組大鼠戒斷癥狀評(píng)分比較分)

*：P<0.05，與A組比較

表2 3組大鼠行為學(xué)指標(biāo)比較

*：P<0.05，與A組比較；#：P<0.05，與B組比較

表3 3組大鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)水平比較

*：P<0.05，與A組比較；#：P<0.05，與B組比較

2.4神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平比較 B、C組大鼠血清NT-proBNP、AngⅡ、ALD水平高于A組，B組大鼠NT-proBNP、AngⅡ、ALD水平高于C組(P<0.05)，見表4。

表4 3組大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平比較

*：P<0.05，與A組比較；#：P<0.05，與B組比較

3 討 論

海洛因成癮患者中普遍存在情緒異常，其中以焦慮、抑郁癥狀最為常見，也是毒癮戒除的重要心理因素[12]。針刺對(duì)海洛因成癮者情緒異常的影響及其作用機(jī)制為目前針刺戒毒研究的熱點(diǎn)問題。高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)為藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用評(píng)價(jià)動(dòng)物焦慮程度與藥物抗焦慮效果的可靠實(shí)驗(yàn)方法[13]。利用動(dòng)物進(jìn)入新奇環(huán)境的探究特性，以及對(duì)高懸敞開臂的恐懼心理，形成動(dòng)物的矛盾行為，以動(dòng)物進(jìn)入開臂的次數(shù)占總進(jìn)入次數(shù)的百分率，進(jìn)入開臂時(shí)間占總時(shí)間的百分率反映動(dòng)物的焦慮狀態(tài)。本組研究中，海洛因成癮大鼠進(jìn)入開臂次數(shù)百分率、在開臂停留時(shí)間百分率均明顯下降，提示海洛因成癮大鼠表現(xiàn)出明顯的焦慮癥狀。經(jīng)針刺治療后，海洛因成癮大鼠進(jìn)入開臂次數(shù)百分率、開臂停留時(shí)間百分率較B組海洛因成癮模型大鼠明顯升高，但仍低于正常水平，提示針刺治療可減少海洛因成癮大鼠的焦慮癥狀。

海洛因成癮過程中，單胺神經(jīng)遞質(zhì)與大鼠腦功能、焦慮、神經(jīng)組織受損程度等密切相關(guān)，主要包括DA、NE、5-HT 3種[14]。DA主要分布于黑質(zhì)-紋狀體通路、中腦邊緣多巴胺系統(tǒng)、結(jié)節(jié)-漏斗部等。其中中腦邊緣多巴胺系統(tǒng)為腦內(nèi)獎(jiǎng)賞中樞，與藥物的獎(jiǎng)賞效應(yīng)、藥物依賴性密切相關(guān)[15]。NE主要分布于腦干，尤其是腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、藍(lán)斑等，在藥物獎(jiǎng)賞效應(yīng)及藥物依賴中也具有明顯作用，可通過重新攝入神經(jīng)細(xì)胞或抑制中樞單胺氧化酶的活性，提高情緒、引發(fā)快感[16]。5-HT主要分布于腦干的中縫核內(nèi)，可作用于額前皮質(zhì)、邊緣系統(tǒng)、垂體活性系統(tǒng)，通過調(diào)節(jié)DA系統(tǒng)，活化5-HT受體，促進(jìn)神經(jīng)遞質(zhì)釋放，調(diào)節(jié)腦內(nèi)涉及動(dòng)機(jī)的獎(jiǎng)賞環(huán)路，從而引起海洛因成癮[17]。本組研究中，B組海洛因成癮模型大鼠較A組正常對(duì)照大鼠DA、NE、5-HT水平均明顯升高，提示海洛因成癮中單胺神經(jīng)遞質(zhì)大量釋放。經(jīng)針刺治療后，DA、NE、5-HT水平較B組海洛因成癮模型大鼠下降，提示針刺治療可改善腦內(nèi)受損神經(jīng)元，改善內(nèi)源性阿片肽系統(tǒng)及其他神經(jīng)體液調(diào)節(jié)系統(tǒng)的功能，改善成癮大鼠腦功能。分析針刺影響神經(jīng)遞質(zhì)的機(jī)制為：針刺太沖穴可通過非哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)依賴途徑調(diào)節(jié)腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元的自噬通路，恢復(fù)受損的自噬水平，清除α-突觸核蛋白在腦內(nèi)積累[18]。也可顯著上調(diào)小鼠腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元的溶酶體膜蛋白表達(dá)，修復(fù)受阻斷的自噬-溶酶體通路。自噬水平恢復(fù)后，小鼠多巴胺能神經(jīng)元損傷改善，多巴胺能神經(jīng)元活力、運(yùn)動(dòng)能力顯著提升。

臨床報(bào)道顯示，神經(jīng)內(nèi)分泌因子過度激活，可引起血管內(nèi)膜增厚，冠狀動(dòng)脈血管結(jié)構(gòu)功能損傷[19]。與藥物成癮密切相關(guān)的神經(jīng)內(nèi)分泌因子包括NT-proBNP、AngⅡ、ALD等。其中NT-proBNP為腦鈉肽(BNP)激素原分裂后產(chǎn)生的無活性的N端片段，在心肌細(xì)胞收到的容量負(fù)荷、壓力負(fù)荷增高時(shí)由左心室分泌，為評(píng)價(jià)心力衰竭的常用指標(biāo)。AngⅡ主要存在于神經(jīng)元細(xì)胞體、軸突、神經(jīng)末梢上，對(duì)中樞、外周系統(tǒng)有著多重調(diào)節(jié)作用，可調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、性行為、血管收縮、壓力感受反射、情感、記憶鞏固等，可通過與ATR1結(jié)合在中樞系統(tǒng)中發(fā)揮調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、交感、應(yīng)激系統(tǒng)的作用。ALD為類固醇類激素，主要作用于腎臟，為增強(qiáng)腎臟對(duì)離子、水分再吸收的激素，也是腎素-血管緊張素系統(tǒng)的一部分，可調(diào)節(jié)腎素經(jīng)腎靜脈進(jìn)入血液系統(tǒng)，啟動(dòng)鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，生成血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)、AngⅡ等[20-21]。本組研究中，對(duì)大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌因子的觀察結(jié)果表明，B組海洛因成癮模型大鼠血清神經(jīng)內(nèi)分泌因子NT-proBNP、AngⅡ、ALD水平均較A組正常對(duì)照大鼠升高，提示海洛因成癮模型大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌因子被激活，證實(shí)海洛因成癮模型大鼠中存在血管內(nèi)皮功能障礙、微血管結(jié)構(gòu)及內(nèi)皮功能損傷等。經(jīng)針刺治療后，上述指標(biāo)明顯改善，提示針刺治療可通過調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平，發(fā)揮治療海洛因成癮的作用。

綜上所述，針刺太沖穴可明顯改善海洛因成癮戒斷大鼠焦慮癥狀，可能通過減少全腦中單胺神經(jīng)遞質(zhì)水平，減輕血清中神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平來實(shí)現(xiàn)。