中國(guó)黃羽鵪鶉哈德氏腺發(fā)育的增齡變化及形態(tài)組織學(xué)觀察

趙 飄， 何 敏， 呂瑩瑩， 韋靖婧， 宋坤達(dá)， 陳小梅

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611130)

哈德氏腺(Harderian gland，HG)，亦稱(chēng)瞬膜腺、第三眼瞼腺、副淚腺，屬于眶腺的一種，是禽類(lèi)眼窩內(nèi)的外分泌腺體之一[1-2]，在兩棲動(dòng)物[3]、爬行動(dòng)物[4]、鳥(niǎo)類(lèi)[5]和哺乳動(dòng)物[6]等動(dòng)物體內(nèi)均有報(bào)道。不同動(dòng)物哈德氏腺的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)特征存在明顯的種屬差異，這些差異與動(dòng)物系統(tǒng)進(jìn)化水平相適應(yīng)。

鵪鶉簡(jiǎn)稱(chēng)鶉，在我國(guó)又名早秋、羅鶉、赤喉鶉等[7]，飼養(yǎng)量?jī)H次于雞。我國(guó)對(duì)鵪鶉的研究主要集中在營(yíng)養(yǎng)[8]、羽色[9]、抗性[10]、遺傳[11]及生產(chǎn)性能[12]等方面，對(duì)鵪鶉哈德氏腺的研究則是在胚胎期[13]，對(duì)哈德氏腺組織結(jié)構(gòu)的全發(fā)育過(guò)程報(bào)道較少。本研究通過(guò)觀察不同周齡中國(guó)黃羽鵪鶉哈德氏腺生長(zhǎng)指標(biāo)和形態(tài)組織結(jié)構(gòu)，旨在多角度闡明哈德氏腺發(fā)育的變化，豐富形態(tài)學(xué)資料，為鵪鶉臨床生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

選用0、1、2、3、4、5、6、10、14、18、22、26、30、34、38周齡健康黃羽鵪鶉90只，隨機(jī)分為15組，每組6只，購(gòu)自成都市邛崍市彭氏鵪鶉養(yǎng)殖場(chǎng)。

1.2 方法

1.2.1 形態(tài)學(xué)觀察

將黃羽鵪鶉稱(chēng)重后麻醉，解剖并取出哈德氏腺，觀察哈德氏腺的大小及形態(tài)。

1.2.2 宏觀生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定

測(cè)量哈德氏腺長(zhǎng)、寬及質(zhì)量，計(jì)算哈德氏腺生長(zhǎng)指數(shù)。

1.2.3 哈德氏腺組織學(xué)觀察

將取出的哈德氏腺立即放入Bouin’s固定液中24 h，流水沖洗24 h，常規(guī)脫水透明，石蠟包埋，制作4～6 μm厚石蠟切片，HE染色，顯微鏡觀察，用江蘇捷達(dá)圖像分析軟件測(cè)量腺體、導(dǎo)管、小葉和小梁的平均面積與平均直徑。

1.2.4 哈德氏腺超微結(jié)構(gòu)觀察

將取出的哈德氏腺置于2.5%戊二醛中固定，隨后經(jīng)取材、前固定、漂洗、后固定、漂洗、脫水、浸透、包埋、聚合、切片、染色和干燥，在透射電鏡下進(jìn)行組織超微結(jié)構(gòu)觀察，并攝片。

2 結(jié)果與分析

2.1 中國(guó)黃羽鵪鶉哈德氏腺的位置與形態(tài)

中國(guó)黃羽鵪鶉出生時(shí)就具備完整的哈德氏腺，位于眼眶內(nèi)、眼球的腹側(cè)和后內(nèi)側(cè)，在視神經(jīng)區(qū)呈喙?fàn)钛由?，一端游離，另一端由腺體導(dǎo)管開(kāi)口于第三眼瞼彎窿的內(nèi)角，腺體呈不規(guī)則帶狀，一端小，一端大，淺粉色，左右對(duì)稱(chēng)(圖1)。

2.2 宏觀生長(zhǎng)指標(biāo)

如表1所示，鵪鶉體質(zhì)量隨周齡逐漸增加，在14周齡達(dá)到最大，為(156.58±2.42) g。哈德氏腺的絕對(duì)質(zhì)量隨周齡逐漸增加，22周齡達(dá)到最大，為(23.21±6.23) mg；哈德氏腺的絕對(duì)質(zhì)量在0～22周齡保持上升趨勢(shì)，22周齡與0～1周齡相比差異顯著(P<0.05)，22周齡與26～38周齡相比差異不顯著(P>0.05)。哈德氏腺指數(shù)呈下降趨勢(shì)，在0周齡達(dá)到最大；4周齡與0～38周齡相比，差異不顯著(P>0.05)。哈德氏腺的左、右長(zhǎng)徑、寬徑隨周齡增加逐漸增加，6周齡時(shí)達(dá)到最大。

2.3 哈德氏腺組織學(xué)觀察

中國(guó)黃羽鵪鶉哈德氏腺為復(fù)管泡狀腺，腺體外有結(jié)締組織被膜，被膜延伸至腺體實(shí)質(zhì)中，將腺體分為多個(gè)大小不等的小葉(圖2-a、b)。小葉由腺泡和腺管組成，腺泡腔匯集成次級(jí)收集管，次級(jí)收集管匯成三級(jí)收集管，最后匯成一條幾乎縱貫腺體全長(zhǎng)的主導(dǎo)管，主導(dǎo)管位于整個(gè)腺體的中心(圖2-c、d、e)。哈德氏腺的腺泡呈球形，由柱狀上皮細(xì)胞排列而成，細(xì)胞核位于細(xì)胞的基底部，腺泡間有結(jié)締組織填充(圖3-a)，在各級(jí)導(dǎo)管周?chē)缓馨图?xì)胞，細(xì)胞間隙明顯，形成彌散淋巴組織(圖3-c、d)，各級(jí)導(dǎo)管間隙能見(jiàn)到散在的紅細(xì)胞或聚集成團(tuán)的紅細(xì)胞(圖3-b)。

A，解剖圖，示哈德氏腺位置(箭頭)，5周齡；B，鵪鶉哈德氏腺的具體形態(tài)。A， Anatomical image showed the location of the harderian gland (arrow)， at 5 weeks old; B， The specific morphology of quail Harderian gland.圖1 黃羽鵪鶉哈德氏腺的形態(tài)觀察Fig.1 The morphological observation of Harderian gland of the yellow quail

表1不同周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺的常規(guī)形態(tài)學(xué)

Table1The morphological measurement in the Harderian gland of the different-week old yellow quail

周齡Week-old體質(zhì)量Body weight/g絕對(duì)質(zhì)量Absolute weight/mg哈德氏腺指數(shù)Organ index/g·mg-1左側(cè)長(zhǎng)徑Length of left/mm左側(cè)寬徑Width of left/mm右側(cè)長(zhǎng)徑Length of right/mm右側(cè)寬徑Width of right/mm08.66±0.58 j2.81±0.61 b0.32±0.06 a3.78±1.02 e1.13±0.08 c3.86±1.03 c0.98±0.11 e121.90±2.91 i6.56±1.62 b0.31±0.09 ab4.75±0.70 e1.66±0.46 bc4.50±0.44 c1.96±0.64 d256.43±2.41 h15.48±3.30 a0.27±0.06 ab5.86±0.90 d2.18±0.27 ab6.95±1.16 ab2.40±0.65 cd373.45±1.36 g17.83±4.42 a0.24±0.06 ab6.66±0.97 cd2.41±0.42 ab6.33±0.76 b2.55±0.29 bc4102.85±2.13 f18.08±4.75 a0.17±0.04 ab7.30±1.03 abc3.01±0.45 a7.16±0.93 ab2.56±0.52 abc5117.90±2.23 e18.96±3.13 a0.16±0.02 b6.76±0.79 cd2.45±0.22 ab7.01±1.17 ab2.38±0.39 cd6139.25±1.57 d21.30±2.31 a0.15±0.01 b8.10±0.68 a2.76±0.22 ab8.28±0.30 a3.05±0.08 a10153.65±3.03 abc21.74±2.11 a0.14±0.01 b8.03±1.32 a2.34±0.23 ab8.13±0.90 ab2.90±0.49 ab14156.58±2.42 a22.06±3.35 a0.14±0.02 b7.93±0.22 ab2.68±0.32 ab7.02±0.84 ab2.50±0.53 bc18154.30±2.33 ab22.70±2.46 a0.14±0.01 b6.95±1.06 bc2.48±0.14 ab6.50±0.31 b2.75±0.32 abc22152.15±2.46 abc23.21±6.23 a0.15±0.04 b6.82±0.77 cd2.81±0.44 a6.90±1.10 ab2.51±0.38 bc26150.31±3.26 abc21.56±4.48 a0.14±0.03 b7.10±0.58 abc 2.50±0.17 ab7.30±0.50 ab2.86±0.30 abc30147.28±1.80 c21.41±2.62 a0.14±0.01 b7.40±1.42 abc3.00±0.62 a7.38±0.76 ab2.60±0.51 abc34148.83±1.97 bc21.06±2.58 a0.14±0.01 b7.40±0.63 abc2.80±0.37 a6.44±0.46 b2.80±0.27 abc38146.70±2.58 c20.56±2.44 a0.14±0.01 b6.98±0.65 bc2.98±0.30 a6.95±1.53 ab2.85±0.41 abc

同列數(shù)據(jù)后無(wú)相同字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

Data marked without the same letters within the same row indicated significant difference atP<0.05. The same as below.

0～1周齡時(shí)，淋巴細(xì)胞呈分散狀；2～3周齡時(shí)，淋巴細(xì)胞排列成不規(guī)則的團(tuán)索狀淋巴小結(jié)和淋巴索(圖3)。如表2所示，哈德氏腺腺體直徑隨周齡增長(zhǎng)而增大，到6周齡時(shí)達(dá)到最大；6周齡與0～5周齡和10～38周齡相比差異顯著(P<0.05)。小葉直徑在4周齡時(shí)達(dá)到最大；4周齡與0～2周齡相比差異顯著(P<0.05)。導(dǎo)管直徑在2周齡時(shí)達(dá)到最大，2周齡與0～1周齡和4～38周齡相比，差異顯著(P<0.05)。小梁直徑在6周齡達(dá)到最大；6周齡與0～2周齡和18～38周齡相比，差異顯著(P<0.05)。

2.4 哈德氏腺超微結(jié)構(gòu)觀察

在電鏡下可見(jiàn)，中國(guó)黃羽鵪鶉哈德氏腺在2周齡與26周齡時(shí)差異不大，為小管泡型，小葉間小梁含有成纖維細(xì)胞和血管，腺管內(nèi)襯有柱狀上皮細(xì)胞，細(xì)胞腔的頂端表面被微絨毛覆蓋，富含淋巴細(xì)胞(圖4-f)，含有豐富的線粒體和發(fā)達(dá)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，大部分線粒體嵴清晰可見(jiàn)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)排列緊密，略為擴(kuò)張。在細(xì)胞質(zhì)中可見(jiàn)3種類(lèi)型的囊泡：Ⅰ型囊泡電子密度較低，染色較淺，包括不同的均勻染色的類(lèi)脂物質(zhì)(圖4-b)；Ⅱ型囊泡電子密度最高，染色最深，且通常出現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)頂端(圖4-b)；Ⅲ型囊泡電子密度介于Ⅰ型囊泡和Ⅱ型囊泡之間，通常位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)周?chē)?圖4-a)。

3 討論

禽類(lèi)與哺乳動(dòng)物的哈德氏腺在形態(tài)學(xué)和組織學(xué)上存在較大差異。禽類(lèi)哈德氏腺呈扁平型、橢圓形或者沙漏型，通常位于眼球的腹側(cè)和后內(nèi)側(cè)[2]。在哺乳動(dòng)物中，哈德氏腺是一種外分泌腺，一般呈弓形，凸面緊靠眶骨，凹面緊靠眼球，游離緣呈半月形，通常位于眶腔的后側(cè)和鼻側(cè)，有時(shí)比眼球本身更大，能與真正的淚腺區(qū)分開(kāi)[14]，腺體分支的管狀泡端部具有寬大的腔室，并且很少有管道系統(tǒng)，在組織切片中難以反映出來(lái)[15]。哺乳動(dòng)物的哈德氏腺主要分泌脂質(zhì)，其分泌的脂質(zhì)可能轉(zhuǎn)化為色素或作為脂蛋白復(fù)合物附著于色素上，以此來(lái)參與機(jī)體的脂質(zhì)代謝過(guò)程[16]。不同禽類(lèi)哈德氏腺的形態(tài)與大小有所不同，顯微結(jié)構(gòu)差異較小。雞的哈德氏腺呈扁啞鈴形，兩端粗大鈍圓(后端大于前端)，中間細(xì)小，淡紅色或紅褐色，表面可見(jiàn)大小不等的圓形或多邊形凸起的分葉狀結(jié)構(gòu)[17]，為復(fù)管泡狀腺，腺體外由一層薄的結(jié)締組織包裹，結(jié)締組織深入腺體，將其分成大小不等的小葉，其間的導(dǎo)管分為初級(jí)、次級(jí)和三級(jí)導(dǎo)管[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，中國(guó)黃羽鵪鶉哈德氏腺腺體呈不規(guī)則帶狀，一端小，一端大，淺粉色，基本組織結(jié)構(gòu)與雞的哈德氏腺相似，結(jié)締組織深入腺體，將其分成大小不等的小葉，含有初級(jí)、次級(jí)和三級(jí)導(dǎo)管，各級(jí)導(dǎo)管間及管腔可見(jiàn)大量淋巴細(xì)胞，在電鏡下偶見(jiàn)脂質(zhì)，電鏡下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體發(fā)育良好，同時(shí)可觀察到不同數(shù)量和顏色的分泌囊泡，細(xì)胞頂部有微絨毛，與已有報(bào)道一致[19]。已有研究表明，鵪鶉哈德氏腺管腔分泌物主要是中性黏蛋白、酸性黏蛋白與堿性黏蛋白，且存在大量漿細(xì)胞[20]，漿細(xì)胞主要由淋巴細(xì)胞發(fā)育而來(lái)[21]，并能在哈德氏腺中檢測(cè)到IgG、IgM、IgA等相關(guān)因子[22]，與本研究發(fā)現(xiàn)哈德氏腺存在大量淋巴細(xì)胞的研究結(jié)果一致。

a～o 為0、1、2、3、4、5、6、10、14、18、22、26、30、34、38周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺組織結(jié)構(gòu)。Rc，紅細(xì)胞；T，小梁；A，腺泡；L，小葉；Lu，管腔；Bv，血管；Pd，主導(dǎo)管；Sd，次級(jí)導(dǎo)管；Td，三級(jí)導(dǎo)管。a-o showed histological observation of 0， 1， 2， 3， 4， 5， 6， 10， 14， 18， 22， 26， 30， 34， 38 week-old yellow quail Harderian gland. Rc， Red blood; T， Trabecalae; A， Acini; L， Lobus; Lu， Lumen; Bv， Blood vessel; Pd， Primary duct; Sd， Secondary duct; Td， Tertiary duct.圖2 不同周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺的組織結(jié)構(gòu)觀察(100×)Fig.2 Histological observation of different week-old yellow quail Harderian gland(100×)

a～d為0、1、2、3周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺組織結(jié)構(gòu)。Rc，紅細(xì)胞；Lc，淋巴細(xì)胞；A，腺泡。a-d showed histological observation of 0， 1， 2， 3 week-old yellow quail Harderian gland. Rc， Red blood；Lc， Lymphocyte；A， Acini.圖3 0～3周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺的組織結(jié)構(gòu)觀察(400×)Fig.3 Histological observation of 0-3 week-old yellow quail Harderian gland(400×)

表2不同周齡黃羽鵪鶉哈德氏腺的組織學(xué)顯微測(cè)量

Table2The histology micrometric in the Harderian gland of the different-week old yellow quail

周齡Week-old腺體直徑Gland diameter/mm小葉直徑Lobule diameter/μm導(dǎo)管直徑Catheter diameter/μm小梁直徑Trabecular diameter/μm061.0±7.56 j286.12±29.37 e44.28±2.97 e5.83±0.35 e177.87±3.80 j490.63±34.88 cd77.46±5.88 bcd13.93±0.49 bcd2135.87±1.20 f628.39±68.52 ab95.83±2.33 a16.28±1.68 bc3152.93±2.33 e599.90±60.70 ab87.89±5.84 ab20.11±0.79 ab4206.35±7.15 bc696.83±44.75 a77.86±7.75 bcd20.37±1.43 ab5216.84±10.95 b610.16±49.57 ab84.24±3.54 b21.94±3.39 ab6253.23±4.34 a611.02±56.40 ab89.34±3.96 ab28.47±4.04 a10223.76±11.34 b596.72±20.65 ab81.66±6.15 bc20.39±2.16A ab14218.99±7.47 b618.19±39.24 ab84.12±2.86 b18.84±4.11 abc18205.56±7.01 bc603.34±58.95 ab73.27±3.71 cd16.93±3.04 bc22190.41±7.26 cd577.56±29.13 b67.39±5.71 cd15.85±2.47 bcd26169.43±12.79 de554.00±17.00 bc65.51±6.03 cd14.95±4.59 bcd30152.32±10.02 ef531.57±59.08 bcd70.07±13.77 cd14.50±3.3 bcd34148.62±6.46 ef493.01±33.57 bcd65.20±9.75 cde11.89±1.39 d38141.69±4.80 ef470.68±34.12 d60.74±7.81 de12.05±2.46 cd

a～c，2周齡；d～e ，26周齡。N，核仁；M，線粒體；ER，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；Ld，脂滴；TⅠ，Ⅰ型囊泡；TⅡ，Ⅱ型囊泡；TⅢ，Ⅲ型囊泡；Mi，微絨毛；Lu，管腔。a-c， 2 week-old; d-f， 26 week-old. M， Mitochondrion; ER， Endoplasmic reticulum; N， Nucleoli; Ld， Lipid drop; TⅠ， Type Ⅰ vesicles; TⅡ， Type Ⅱ vesicles; TⅢ， Type Ⅲ vesicles; Mi， Microvilli; Lu， Lumen.圖4 哈德氏腺的超微結(jié)構(gòu)變化Fig.4 Ultrastructural changes of Harderian gland

禽類(lèi)哈德氏腺隨年齡發(fā)育的變化稍有差異，如雞的哈德氏腺?gòu)呐咛テ诘牡?1～12天結(jié)膜的上皮細(xì)胞發(fā)育而來(lái)。哈德氏腺的發(fā)育分為2個(gè)階段：在上皮發(fā)育階段(胚胎生活的第13～17天)，腺泡上皮分化為腺上皮附近的管腔，基底上皮細(xì)胞的分離層；在胚胎期的第17～18天，間質(zhì)組織被嗜酸性粒細(xì)胞填充；在第17～20天，腺上皮經(jīng)歷分泌轉(zhuǎn)化。在第21天，分泌功能得到充分發(fā)展[23]。Salah[13]研究發(fā)現(xiàn)，在胚胎期的第7天，鵪鶉的哈德氏腺首次出現(xiàn)，開(kāi)始發(fā)育為長(zhǎng)管，其近端具有狹窄的管腔并且在遠(yuǎn)端具有未分化的腔；隨后幾天，腺泡、導(dǎo)管逐漸形成，在孵化后期達(dá)到成熟，與本研究發(fā)現(xiàn)中國(guó)黃羽鵪鶉的哈德氏腺出生時(shí)就存在，且具備完整形態(tài)的研究結(jié)果一致。