外周血microRNA-146a水平與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性

朱秀蘭　于長青　閆慶凱　謝鳳

【摘要】目的探究冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者外周血微小核糖核酸-146a（microRNA-146a）表達(dá)水平與其冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性。方法將120例住院治療的冠心病患者作為觀察組，按病情嚴(yán)重程度分為輕度組（Gensini評分<25，n=48）和中重度組（Gensini評分>25，n=72），另選取同期門診體檢的60例健康人作為對照組。測定所有研究對象血漿microRNA-146a表達(dá)水平，以及促炎介質(zhì)腫瘤壞死因子-a（tumornecrosisfactor-a，TNF-a）和干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ），抗炎因子白介素-10（interleukin-10，IL-10）的表達(dá)水平。分析血漿microRNA-146a表達(dá)水平與患者病情的相關(guān)性。結(jié)果觀察組血漿microRNA-146a表達(dá)水平明顯高于對照組，且中重度組microRNA-146a表達(dá)水平明顯高于輕度組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）;血漿microRNA-146a表達(dá)水平與TNF-a、IFN-γ和Gensini評分呈正相關(guān)（r=0.56～0.71，P<0.01），與IL-10呈負(fù)相關(guān)（r=-0.49，P=0.02）。結(jié)論冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者外周血microRNA-146a表達(dá)水平與其冠狀動脈病變嚴(yán)重程度有較好的相關(guān)性，值得在臨床推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】微小核糖核酸-146a;冠狀動脈粥樣硬化性心臟病;Gensini評分

中圖分類號：R54

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1009-816X（2019）06-0504-03

doi：10.3969/j.issn.1009-816x.2019.06.005

The Correlation Study between Plasma MicroRNA-146a Level and the Severity of Coronary Artery Lesion. ZHU Xiu-lan ， YU Chang-qing， YAN Qing-kai， et al. Department of Cardiovascular Medicine， People ' s Hospital of Bishan District ， Chongqing 401320， China

[Abstract] Objective To explore the corelation between plasma micoRNA-146a level and severity of coronay artery lesion . Meth ods 120 cases of hospitalized patients with coronary heart disease were obtained as observation group . According to the severity of le sion ， the patients were divided into mild group （ Gensini score < 25 ， n = 48 ） and moderate-severe group （ Gensini score > 25 ， n = 72 ） 60 cases of healthy people taking a physical examination were seleted as onol oup . Determination of plasma microRNA-146a lev el ， tumor necrosis factor-a （ TNF-a ） interferon-（ IFN-y ） and anti-in ammatory factor interleukin-10 （ IL-10 ） expression levels were executed . Analyzed thecorrelation between plasma microRNA-14a evel and severityof oronaryar erylesion . Results The plasma mi croRNA-146a of observation group was higher than control roup ， the plasma microRNA-146a of moderate-severe group was higher han mild group ， the differences were statistically significant （ all P < 0 . 05 ） ; The plasma microRNA-146a expression level was posi tively correlated with TNF-a ， IFN-y and Gensini score （ r = 0 . 56-0 . 71 ， P < 0 . 01 ） ， was negatively correlated with IL-10 （ r = 0 49 ， P = 0 . 49 ） . Conclusions The plasma microRNA-146a expression level of coronary heart disease patients has good correlation with severity of coronary artery lesion ， is worth popularizing in clinical application/

[Key words ] MicroRNA-146a ; Coronary heart disease ; Gensini score

動脈粥樣硬化在本質(zhì)上屬于一種慢性炎癥性疾病，是導(dǎo)致心血管疾病的發(fā)病率和死亡二率大幅度升高的主要原因[1]，動脈粥樣硬化的病理過程包括內(nèi)皮功能障礙、白細(xì)胞的浸潤、脂蛋白沉積和泡沫細(xì)胞的出現(xiàn)。白細(xì)胞的積累，細(xì)胞因子和生長因子的分泌，氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）的細(xì)胞毒性效應(yīng)進(jìn)一步加速炎癥，導(dǎo)致動脈粥樣硬化患者病情進(jìn)展及預(yù)后不良[2]。在不同細(xì)胞類型中表達(dá)的外周血微小核糖核酸（microRNA參與了血管系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)已經(jīng)被廣泛的報(bào)道[3，4]。本文通過檢測120例冠心病患者Gensini評分、血漿microRNA-146a表達(dá)水平以及炎癥介質(zhì)水平，來探討microRNA-146a水平與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性。報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料：選取2017年1月至2019年1月在我院心內(nèi)科就診的120例冠心病患者作為觀察組，冠心病的診斷參照《中國心血管病預(yù)防指南（2017）》[5]中的標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重心瓣膜病、急性肺栓塞、心肌炎，或有嚴(yán)重的免疫性疾病、感染性疾病，于半年內(nèi)服用過免疫抑制劑或近一周服用過糖皮質(zhì)激素及抗生素的患者。按病情嚴(yán)重程度分為輕度組（Gensini評分≤25，n=48）和中重度組（Gensini評分>25，n=72）。另選取同期門診體檢的60例健康人作為對照組。觀察組與對照組在性別、年齡、心率、BMI及糖尿.病史等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。所有受試者均簽署知情同意書，本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方法：

1.2.1冠心病病情評估：采用Gensini評分[6]對冠心病患者進(jìn)行病情嚴(yán)重程度評估。根據(jù)冠狀動脈造影（CAG）顯示的冠狀動脈狹窄面積，無狹窄計(jì)0分，25%以下計(jì)1分，介于26%～50%之間計(jì)2分，介于51%～75%之間計(jì)4分，介于76%～90%之間計(jì)8分，介于91%～99%之間計(jì)16分，完全閉塞計(jì)32分。根據(jù)病變支所在部位乘以相應(yīng)的系數(shù)，左冠狀動脈主干計(jì)系數(shù)5，左前降支和左回旋支近端計(jì)系數(shù)2.5，中段計(jì)系數(shù)1.5，遠(yuǎn)端計(jì)系數(shù)1，右冠狀動脈計(jì)系數(shù)1，第一、第二對角支計(jì)系數(shù)1，其他血管計(jì)系數(shù)0.5。Gensini評分等于各冠狀動脈分支狹窄面積計(jì)分*系數(shù)的總和。

1.2.2血漿microRNA-146a表達(dá)水平及炎癥因子測定：患者于清晨抽取空腹?fàn)顟B(tài)下肘部靜脈血5mL ，離心吸取上清。加入1mL trizol溶液（美國invitrogen公司后按步驟提取總microRNA，然后加入microRNA-146.上下游引物逆轉(zhuǎn)錄成雙鏈cDNA，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)，讀取Ct值。采用酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒（美國abcam公司）按步驟說明書檢測患者血漿TNF-a，IFN-γ和IL-10的含量，在450nm處測得吸光度值并計(jì)算相應(yīng)濃度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)均采用SPSS24.0版進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（x±s）來表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，三組數(shù)據(jù)比較采用one-wayANOVA分析，其中組間兩兩分析采用student一t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用率（%）的形式來表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組血漿microRNA-146a、炎癥因子水平和Gensini評分比較：輕度組和中重度亞組的血漿mi-CroRNA-146a表達(dá)水平、血漿TNF-a、IFN-y表達(dá)水平和Gensini評分明顯高于對照組，血漿IL-10表達(dá)水平明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。中重度組的血漿microRNA-146a表達(dá)水平、血漿TNF-a、IFN_γ表達(dá)水平和Gensini評分明顯高于輕度組，血漿.IL-10表達(dá)水平明顯低于病情輕度患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見表2。

2.2血漿microRNA-146a表達(dá)水平與病情相關(guān)性分析：血漿microRNA-146a表達(dá)水平與TNF-a（r=0.56，P=0.01）、IFN-γ（r=0.64，P<0.05）、Gensini評分（r=0.71，P<0.01）呈正相關(guān)，與IL-10呈負(fù)相關(guān)（r=-0.49，P<0.05）。

3討論

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是導(dǎo)致我國人口死亡的主要原因之一，其重要的病理生理基礎(chǔ)是動脈粥.樣硬化。動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，包括內(nèi)皮完整性的破壞、平滑肌的異常增殖和遷移、炎癥介質(zhì)的釋放和脂質(zhì)的內(nèi)膜下沉積等[7]。microRNA通過靶向結(jié)合相應(yīng)的基因位點(diǎn)，抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄，從而實(shí)現(xiàn)對各生理病理過程的調(diào)控[8]。在不同細(xì)胞類型中表達(dá)的microRNA參與了血管系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)已經(jīng)被廣泛的報(bào)道。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明microRNA-146a可以通過直接作用于靶基因TLR-4，增加促炎因子IL-6局部分泌量，對ox-LDL誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激有促進(jìn)作用[9]。另外，microRNA-146a還可以通過作用于腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（tumornecrosisfactorreceptor-associ-atedfactor-6，TRAF6）發(fā)揮促炎作用[10]。給予小鼠敲除microRNA-146a，可以促進(jìn)Treg細(xì)胞對效應(yīng)性T細(xì)胞的抑制功能[11]。這些研究都提示microRNA-146a與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本文研究結(jié)果顯示，血漿microRNA-146a表達(dá)水平隨冠心病病情發(fā)展而逐漸升高，抑制患者microRNA-146a表達(dá)水平可能成為臨床新的治療靶點(diǎn)。

TNF-a和IFN-γ是常見的一類促炎因子，在免疫炎癥反應(yīng)中起重要的介導(dǎo)作用，已有基礎(chǔ)研究證明TNF-a和IFN-γ在動脈粥樣硬化動物模型的外周血和局部病變血管組織中大量表達(dá)，兩者可以一方面可以促進(jìn)自身表達(dá)增加，另一方面還能增加其他炎癥因子和黏附分子等表達(dá)水平，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，血管平滑肌異常增生，血管張力異常，從而促進(jìn)動脈粥樣硬化斑塊的形成[12～14]。IL-10是一種常見的免疫抑制因子，已有研究證明IL-10可以抑制巨噬細(xì)胞等的激活，發(fā)揮抗炎穩(wěn)定斑塊的作用[15]。臨床研究顯示，冠心病患者血漿中炎癥因子的表達(dá)水平和患者的預(yù)后密切相關(guān)[16]，[17]。本文研究結(jié)果顯示，血漿microRNA-146a表達(dá)水平不僅可以反映冠心病患者的病情嚴(yán)重程度，可能與患者預(yù)后也有一定關(guān)系，需要進(jìn)一步長期隨訪驗(yàn)證。

綜上，冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者外周血microRNA-146a表達(dá)水平與其冠狀動脈病變嚴(yán)重程度有較好的相關(guān)性，值得在臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

【1】孔博，程詩堯，費(fèi)洪文.冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者動脈粥樣硬化性狹窄的臨床特點(diǎn)分析【J】.嶺南心血管病雜志，2018，24（6）：617-620.

【2】徐莉，王勇，馬麗.冠心病患者外周血炎癥標(biāo)志物與冠狀動脈狹窄程度的關(guān)系【J】.臨床內(nèi)科雜志，2017，34（9）：634-635.

【3】Raitoharju E，Oksala N，Lehtimaki T.MicroRNAs in the atheroscleroticplaque【J】.Clin Chem，2013，59（12）：1708-1721.

【4】Bai X，Zhang J，Cao M，et al.MicroRNA-146a protects against LPS-induced organ damage by inhibiting Notch1 in macrophage【J】.Int Im-munopharmacol ，2018，63（4）：220-226.

【5】中華心血管病雜志編輯委員會.中國心血管病預(yù)防指南（2017）【J】.中華心血管病雜志，2018，46（1）：10-25.

【6】中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)會介入心臟學(xué)學(xué)組.中國經(jīng)皮冠狀動脈介入治療指南（2016）【J】.中華心血管病雜志，2016，44（5）：382-400.

【7】鐘巧青，朱凌燕，張國剛，等.動脈粥樣硬化性心血管疾病合并糖尿病患者發(fā)病機(jī)制與臨床特點(diǎn)及治療對策【J】.中國心血管病研究，2018，16（12）：1069-1072.

【8】陳笑梅，牟雅琳，呂鵬，等.miRNAs調(diào)控動脈粥樣硬化相關(guān)細(xì)胞功能研究進(jìn)展【J】.廈門大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2018，57（5）：593-601

【9】林新，徐禮裕，李小華，等.微RNA-146a對機(jī)械通氣大鼠肺損傷TLR4炎癥信號通路的影響及機(jī)制【J】.中華醫(yī)學(xué)雜志，2018，98（34）：2749-2753.

【10】楊開雯，強(qiáng)鄭，靳貝芳，等.MicroRNA-146在糖尿病心肌病中的調(diào)控作用【J】.中國病理生理雜志，2018，34（11）：1947-1952.

【11】Huang W，Tian ss，Hang PZ，et al.Combination of microRNA-21 andmicroRNA-146a attenuates cardiac dysfunction and apoptosis during acutemyocardial infarction in mice【J】.Mol Ther Nucleic Acids，2016，5（12）：e296.

【12】JMehta NN，Teague H，Swindell WR，et al.IFN-gamma and TNF-alphasynergism may provide a link between psoriasis and inflammatory atherogen-esis【J】.Sci Rep，2017，7（1）：13831.

【13】Tavakoli S，Downs K，Short JD，et al.Characterization of macrophagepolarization states using combined measurement of 2-Deoxyglucose and glu-tamine accumulation：implications for imaging of atherosclerosis【J】.Arte-rioscler Thromb Vasc Biol，2017，37（10）：1840-1848.

【14】Dinh QN，Chrissobolis S，Diep H，et al.Advanced atherosclerosis is as-sociated with inflammation，vascular dysfunction and oxidative stress，butnot hypertension【J】.Pharmacol Res，2017，116（2）：70-76.

【15】楊天睿，苗云波.血液化驗(yàn)與老年動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的相關(guān)性【J】.中國老年學(xué)雜志，2019，39（1）：27-29.

【16】胡文，匡雪.吡格列酮改善非糖尿病冠心病患者臨床預(yù)后的研究進(jìn)展【J】.心血管病學(xué)進(jìn)展，2018，39（3）：375-378.

【17】沈正軍.冠心病合并高脂血癥患者血脂水平與主要炎癥因子的相關(guān)性【J】.心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2017，26（4）：388-390.

（收稿日期：2019-4-25）