高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定美白祛斑類化妝品中的8種激素探討

劉洪亮 杜金鳳 郭航紅 宋鑒達(dá)

摘要：通過(guò)運(yùn)用高效液相色譜法來(lái)測(cè)定美白祛斑類化妝品申的8種激素。這八種激素分別為曲安西龍、氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松龍、醋酸氫化可的松、醋酸潑尼松、醋酸可的松和醋酸地塞米松。在檢測(cè)過(guò)程中，分別以甲醇溶液為基礎(chǔ)來(lái)提取不同形態(tài)的化妝品。再結(jié)合HIB固相萃取柱富集凈化之后，再采用專業(yè)的色譜柱儀器進(jìn)行分離。其中，可以將乙腈和水作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。在短短6mm之內(nèi)就可以對(duì)8種激素進(jìn)行分離和檢測(cè)。結(jié)果：各個(gè)激素成分在0.03579-0.8639ug的范圍內(nèi)都可以在一定面積內(nèi)呈現(xiàn)線性的關(guān)系。且相關(guān)系數(shù)都大于0.999。結(jié)論：本操作方法相對(duì)比較簡(jiǎn)單，且分析的時(shí)間也較短。不僅有著很好的操作性，而且可以大范圍地被用于測(cè)定美白祛斑類化妝品中。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;美白祛斑化妝品;多種激素

中圖分類號(hào)：TQ072文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1671-0460（2019）06-0139-04

隨著時(shí)代的不斷發(fā)展，女性朋友對(duì)美白祛斑的需求正變得越來(lái)越強(qiáng)烈。所以越來(lái)越多的女性也開(kāi)始關(guān)注美白祛斑化妝品的安全性。雖然國(guó)家一再對(duì)美白祛斑類化妝品進(jìn)行檢測(cè)。但是有些化妝品生產(chǎn)商為了能夠生產(chǎn)出見(jiàn)效快的美白祛斑產(chǎn)品，都會(huì)在那些產(chǎn)品中加入一些激素。雖然這些激素能夠在短時(shí)間內(nèi)美白產(chǎn)品，甚至大家在使用過(guò)后會(huì)使得皮膚變得更加白嫩。但是，如果長(zhǎng)時(shí)間使用這些產(chǎn)品，則會(huì)使得面部皮膚遭受損害。甚至?xí)谥笫沟没颊叩男玛惔x出現(xiàn)紊亂。一些美白化妝品中添加的性激素則會(huì)在短時(shí)間內(nèi)促進(jìn)毛發(fā)的生長(zhǎng)，甚至有效地防止皮膚老化。但是，如果長(zhǎng)時(shí)間使用就會(huì)使得皮膚萎縮變薄，甚至誘發(fā)癌癥。所以，在實(shí)際生產(chǎn)的過(guò)程中，需要對(duì)美白化妝品中的激素進(jìn)行嚴(yán)格地檢測(cè)，才能夠在之后有效地控制化妝品的質(zhì)量，確保化妝品在使用的過(guò)程中變得更加安全。這對(duì)保障大家的身體健康也有很重要的意義。本文主要采用高效液相色譜法對(duì)美白祛斑化妝品中的8種激素成分進(jìn)行檢測(cè)。

1 儀器與試劑

1.1一般儀器

本次試驗(yàn)所使用的儀器為Agilent1100型的高效液相色譜儀。此儀器內(nèi)部主要是由G1322A、在線脫氣、G1316A柱溫箱和其他配套的儀器一起組成。并需要配合電子分析天平進(jìn)行檢測(cè)。

1.2使用試劑

在本次實(shí)驗(yàn)中所使用的試劑主要包括醋酸可的松、地塞米松、醋酸潑尼松龍、醋酸潑尼松、曲安西龍、氫化可的松和其他試劑都來(lái)自于中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所。在確定其純度之后被應(yīng)用于試驗(yàn)中。

2 試驗(yàn)方法

2.1色譜分析條件

整個(gè)色譜的柱長(zhǎng)度為EcosilC18，其長(zhǎng)度保持在250mmX1.6mm。其中檢測(cè)的波長(zhǎng)被控制在242nm。流動(dòng)相內(nèi)部乙腈和水的比例被控制在40：60左右。整體柱子的溫度控制在40℃。圖1為各個(gè)成分對(duì)照品高效液相分析結(jié)果。

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

可以分別先稱取8種激素樣品，并融入甲醇溶液進(jìn)行配置。在經(jīng)過(guò)加工之后就可以配置成一定濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。并將已經(jīng)配置好的混合溶液稀釋成為8種標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量濃度為2.0、3.0、4.0、8.0、20.0和40.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以便在后續(xù)試驗(yàn)中應(yīng)用。

2.3樣品溶液的配置

稱取每一樣化妝品0.5g，并將其放置在25ml的容量瓶?jī)?nèi)部，并在之后加入一定量的甲醇。等到在超聲加工提取20min之后再放置冷卻，并有效地將甲醇補(bǔ)充道一定的刻度。完成上述操作之后，可以選取適量的溶液放置在離心管內(nèi)部，并在10000r/min轉(zhuǎn)速的條件下離心加工10min。在加工之后再取出上部的清液。等到經(jīng)過(guò)過(guò)濾之后再供測(cè)定使用。

2.4線性關(guān)系和檢測(cè)限

將事先調(diào)制好的混合對(duì)照液稀釋成8種標(biāo)準(zhǔn)的溶液。其溶液的濃度分別為2.75ug/ml、5.50ug/ml、11.00ug/ml、22.00ug/ml和44.00ug/ml，之后就會(huì)形成新的混合對(duì)照溶液。配置好之后再按照一定的色譜條件進(jìn)行全面測(cè)定，再記錄之后的色譜圖。在得到相關(guān)數(shù)據(jù)之后，可以以對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)，并以對(duì)照峰的面積為縱坐標(biāo)。再在調(diào)整之后繪制合理的工作曲線。表1有效地顯示了各個(gè)激素成分的線性回歸方程。并分析其他相關(guān)的系數(shù)。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

可以先取同一濃度的對(duì)照品，并將其沉淀0h、2h、4h、6h和8h。并按照一定的色譜條件進(jìn)行分析。在分析結(jié)束之后就可以有效地計(jì)算各個(gè)激素內(nèi)部的峰面積。在試驗(yàn)之后就能夠有效地確保對(duì)照樣品溶液在8h小時(shí)內(nèi)都變得更加穩(wěn)定。

2.6加樣回收試驗(yàn)

可以先選取特定的試品溶液，之后再有效地進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果得出：內(nèi)部確實(shí)存在不含有激素的樣品，數(shù)量為6份。將每份溶液平均劃為0.5g，之后再有效地分析各個(gè)成分內(nèi)部的回收率。在經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的計(jì)算之后，可以得到如下的結(jié)論：曲安西龍為98.43%，RSD=0.66%;氫化可的松為98.43%，RSD=0.66%;地塞米松為98.47%，RSD=0.75%;醋酸氫化可的松為98.32%，RSD=0.65%。醋酸潑尼送為98.45%，RSD=0.69%。醋酸可的松為98.45%，RSD=0.66%。醋酸地塞米松為98.46%，RSD=0.65%

2.7樣品分析

根據(jù)上面的試驗(yàn)方法對(duì)各類美白祛斑類化妝品進(jìn)行檢測(cè)，并檢測(cè)內(nèi)部的8種激素。之后再用特定的時(shí)間檢測(cè)出的光譜圖進(jìn)行定性分析。但是都沒(méi)有檢測(cè)出額外的激素。其樣品分離的色譜圖如圖2所示。從圖中可以看出，樣品在經(jīng)過(guò)處理以后，內(nèi)部的基質(zhì)對(duì)激素檢測(cè)并不會(huì)存在較多的干擾。并可以采用光譜圖鑒來(lái)排除存在于樣品中的防腐劑成分。在通過(guò)對(duì)不同的樣品進(jìn)行測(cè)定之后，就可以測(cè)定出陽(yáng)性樣品。

3結(jié)果討論

3.1優(yōu)化樣品提取方法

只有采用超聲的方式有效地提取樣品，才能夠更好地提高提取的效率。在考察包括甲醇、無(wú)水乙醇、水和流動(dòng)相體內(nèi)部的不同提取時(shí)間之后在分析提取效果。多數(shù)結(jié)果表明，如果能夠以甲醇為提取溶液，并將提取的時(shí)間控制在20min左右，其本身的提取效率更高。所有的成分也能夠被更好地提取出來(lái)。

3.2選擇合適的固相萃取柱

根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道內(nèi)容，其激素化合物在C18在SPE柱子上將會(huì)表現(xiàn)出良好的色譜保留行為，并在之后表現(xiàn)出良好的萃取效果。常規(guī)而言，OasisHLB-SPE是一種新型的反相色譜保留固相萃取柱。與傳統(tǒng)的C18SPE柱子相比，其本身的吸附容量更寬，也能夠更好地對(duì)激素物質(zhì)進(jìn)行凈化。

3.3選擇合適的柱溫

通過(guò)上述研究的數(shù)據(jù)可以得知，這8種激素之間的分力度正有著顯著的影響。只有在先后25～50℃等一系列的柱溫條件下進(jìn)行試驗(yàn)，才能夠考察出不同激素之間的分離效果。最后得出，在28℃柱溫度下降會(huì)表現(xiàn)出最佳的分離效果。

3.4選擇合適的流動(dòng)相

在此次試驗(yàn)的過(guò)程中，可以得出如下的結(jié)論：如果采用乙腈一水系來(lái)有效地進(jìn)行洗脫，就可以得到最佳的梯度洗脫比例，最終也能夠獲得最佳的流動(dòng)色譜條件。應(yīng)該說(shuō)，各個(gè)色譜峰內(nèi)部的數(shù)值可以被有效地分離。

3.5選擇檢測(cè)波長(zhǎng)

在通過(guò)采用DAD紫外全波長(zhǎng)進(jìn)行掃描之后，可以比較與單個(gè)激素成分相關(guān)的光譜圖?？梢园l(fā)現(xiàn)本次醋酸可的松、地塞米松、醋酸潑尼松龍、醋酸潑尼松、曲安西龍、氫化可的松和其他試劑等對(duì)照品的最大吸收波長(zhǎng)可以被控制在196～240nm之間。所以，在實(shí)際選擇的過(guò)程中，可以選擇196-240nm之間的數(shù)值作為波長(zhǎng)。這樣不僅能夠有效地提高檢測(cè)的靈敏度，還能夠避免波長(zhǎng)太過(guò)單一而使得內(nèi)部的靈敏度有所降低。

以上從“樣品提取方法”、“合適的固相萃取物”、“合適的流動(dòng)相”和“選擇合適的檢測(cè)波長(zhǎng)“等幾個(gè)方面進(jìn)行分析?？梢钥闯?，本次對(duì)八種激素進(jìn)行檢測(cè)的方法選用得當(dāng)，確實(shí)能夠取得好的檢測(cè)效果。這種檢測(cè)方法也值得被推廣。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，本文先選擇合適的儀器和試驗(yàn)試劑，之后再將“色譜分析條件”、“標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置”、“樣品溶液的配置”、“線性關(guān)系和檢測(cè)限”、“穩(wěn)定性試驗(yàn)”、“加樣回收試驗(yàn)”和“樣品分析”的過(guò)程有效地結(jié)合在一起。在做好實(shí)驗(yàn)之后，再有效地就包括“優(yōu)化樣品提取方法”、“選擇合適的固相萃取柱”、“選擇合適的柱溫”、“選擇合適的流動(dòng)相”和“選擇檢測(cè)波長(zhǎng)”的方式分析結(jié)果?？梢钥闯?，本文所建立的方法非常簡(jiǎn)便準(zhǔn)確。不僅有著很好的重現(xiàn)性，而且可以有效地被運(yùn)用于化妝品8種激素的檢測(cè)過(guò)程中，樣品的檢出率也很高。相關(guān)部門也確實(shí)可以通過(guò)運(yùn)用這種方法來(lái)檢測(cè)美白化妝品。也只有全面對(duì)美白祛斑類產(chǎn)品中的激素進(jìn)行測(cè)定，才能夠更好地保證美白類化妝品本身的質(zhì)量。