免疫組化病理技術(shù)及質(zhì)量控制方式的研究

王立山 車 超 李占林 燕東陽 姜曉靜

（遼寧省健康產(chǎn)業(yè)集團(tuán)鐵煤總醫(yī)院，遼寧 鐵嶺 112700）

在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展和完善的過程中，免疫組化學(xué)技術(shù)在臨床病理診斷中的應(yīng)用也越來越廣泛，該技術(shù)的應(yīng)用也顯著提高了病理診斷水平[1]。免疫組化病理技術(shù)環(huán)環(huán)相扣、步步組合，每一環(huán)節(jié)失控都會(huì)影響制片質(zhì)量，質(zhì)量控制就成為了現(xiàn)階段病理學(xué)界需要及時(shí)解決的問題之一。要想對(duì)制片質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格控制，并為臨床病理診斷提供可靠和準(zhǔn)確的依據(jù)，病理技術(shù)室應(yīng)制定科學(xué)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)加強(qiáng)監(jiān)督[2]。本研究主要分析了質(zhì)量控制對(duì)免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量的影響，希望能有效提高臨床病理診斷的質(zhì)量和水平，具體情況如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：本文所選70例經(jīng)空心針穿刺活檢證實(shí)的乳腺癌患者均為我院2016年3月至2017年3月收治，全部患者均采用TE方案新輔助化療，不存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，未接受過內(nèi)分泌治療、放療或者化療。將其隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組均為35例。對(duì)照組患者年齡為33～78歲，平均為（54.4±4.6）歲；臨床分期為：21例患者為Ⅱ期，14例患者為Ⅲ期。實(shí)驗(yàn)組患者年齡為34～79歲，平均為（53.8±4.2）歲；臨床分期為：20例患者為Ⅱ期，15例患者為Ⅲ期。在一般資料方面兩組患者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法：實(shí)驗(yàn)組選擇免疫組化染色：選取癌組織標(biāo)本，連續(xù)切片處理，切片厚度為4 μm，對(duì)切片實(shí)施脫蠟處理，常溫狀態(tài)下將其放入到濃度為3%的雙氧水中，進(jìn)行20 min浸泡；完成浸泡后應(yīng)選擇PBS沖洗，清洗次數(shù)不小于3次，清洗時(shí)間應(yīng)超過15 min；在1000 mL燒杯中導(dǎo)入pH值為6.0檸檬酸緩沖液700 mL，將其加熱沸騰；在燒杯內(nèi)放入記CK19、ki67、HBcAg、HBsAg抗體的切片，而且應(yīng)認(rèn)真標(biāo)記，加熱15 min后將其取出；常溫冷卻后選擇pH值為7.4的PBS清洗切片；對(duì)全部切片實(shí)施一抗處理，放入到溫度為4 ℃的冰箱內(nèi)進(jìn)行過夜孵育；選擇pH值為7.4的PBS清洗，對(duì)切片滴加二抗，并放在常溫下進(jìn)行10 min孵育；選擇pH值為7.4的PBS沖洗，進(jìn)行5～10 min的DAB顯色；水洗后選擇蘇木精襯染，選擇脫水透明中型樹膠封固。

對(duì)照組選擇常規(guī)HE染色：將癌組織標(biāo)本及時(shí)放入到濃度為4%的中性甲醛內(nèi)，進(jìn)行4 h固定；分別選擇AF液、濃度為75%的乙醇、濃度為80%的乙醇、濃度為90%的乙醇、濃度為95%的乙醇、濃度為100%的乙醇Ⅰ、濃度為100%的乙醇Ⅱ各進(jìn)行1 h浸泡，選擇二甲苯Ⅰ進(jìn)行20 min浸泡，選擇二甲苯Ⅱ進(jìn)行30 min浸泡，選擇醋缸Ⅰ和醋缸Ⅱ各進(jìn)行1 h浸泡；醋缸溫度設(shè)置為60 ℃，烤箱設(shè)置為60 ℃，烤片2 h。

1.3 臨床觀察指標(biāo)：①對(duì)切片優(yōu)良率進(jìn)行觀察，GE染色的切片優(yōu)良標(biāo)準(zhǔn)為：肝臟穿刺組織的結(jié)構(gòu)完全，厚薄均勻，不存在裂痕損壞，染色明顯，細(xì)胞形態(tài)比較清楚，未出現(xiàn)收縮，能和核物質(zhì)進(jìn)行有效對(duì)比。免疫組化染色切片的優(yōu)良標(biāo)準(zhǔn)為：結(jié)構(gòu)不存在損壞，完好，能對(duì)陽性物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確定位，背景不存在干擾，沒有發(fā)生非特異性著色、脫片等情況。②對(duì)確診率進(jìn)行觀察比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：選擇SPSS軟件來分析和統(tǒng)計(jì)本實(shí)驗(yàn)相關(guān)數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料選擇卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料則選擇t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 切片優(yōu)良率觀察：實(shí)驗(yàn)組的切片優(yōu)良率顯著高于對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 切片優(yōu)良率觀察（n）

2.2 確診率觀察：對(duì)照組的確診率為74.3%（26/35），實(shí)驗(yàn)組的確診率為97.1%（34/35）；實(shí)驗(yàn)組的確診率顯著高于對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

免疫組織化學(xué)技術(shù)也被稱為免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，是開展病理學(xué)診斷的主要方法之一，具體是指通過對(duì)特異性抗體或者抗原在組織細(xì)胞原位進(jìn)行標(biāo)記，利用抗體的組織化學(xué)呈色反應(yīng)和抗原抗體的免疫反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗體或抗原進(jìn)行定性分析和定位[3]。在實(shí)際的臨床病理診斷中，要想讓診斷準(zhǔn)確性顯著提高，首先就需要對(duì)免疫組化的制片質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格控制[4]。分析免疫組化制片技術(shù)現(xiàn)階段的實(shí)際情況發(fā)現(xiàn)，常見問題主要為免疫組化染色、免疫組化試劑、組織切片以及取材等。

取材是進(jìn)行免疫組化制片的基礎(chǔ)，在對(duì)病變組織進(jìn)行選取時(shí)，如果體積不合理則會(huì)導(dǎo)致質(zhì)量問題。針對(duì)上述問題，應(yīng)合理選擇標(biāo)本進(jìn)行制片，取材后應(yīng)及時(shí)處理標(biāo)本，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行合理保存，標(biāo)本保存的環(huán)境應(yīng)合理，防止標(biāo)本發(fā)生污染，進(jìn)而讓質(zhì)量控制效果得以保證。對(duì)于新鮮組織來講，只有對(duì)其進(jìn)行有效固定后，才能讓原有細(xì)胞的固有形態(tài)得以保留，細(xì)胞內(nèi)的水解酶種類較多，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生缺氧時(shí)，則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的水解酶分解破壞蛋白質(zhì)，讓組織發(fā)生自溶。針對(duì)上述問題，臨床中在將組織標(biāo)本切除后，應(yīng)及時(shí)將其放入到固定液內(nèi)，充分固定標(biāo)本。染色試劑會(huì)對(duì)標(biāo)本的染色效果產(chǎn)生直接影響，臨床中應(yīng)及時(shí)更新透明、脫水、浸水以及拖拉所以的酒精和二甲苯等，讓著色質(zhì)量得以保證，讓著色能力顯著提高，讓制片染色質(zhì)量得以保證。免疫組化的試劑質(zhì)量也會(huì)對(duì)病理學(xué)診斷質(zhì)量產(chǎn)生直接影響。在經(jīng)一段時(shí)間的使用后，試劑純度會(huì)下降，進(jìn)而降低組織切片的質(zhì)量，對(duì)病理診斷結(jié)果造成影響。因此在臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)中，免疫組化試劑應(yīng)定期更換，在配置、使用和采購試劑時(shí)應(yīng)嚴(yán)格把關(guān)，在開展免疫組化工作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵循相關(guān)的無菌操作原則，避免發(fā)生不良現(xiàn)象。在對(duì)免疫組化質(zhì)量進(jìn)行控制時(shí)，應(yīng)對(duì)免疫組化的染色過程加以關(guān)注，對(duì)染色質(zhì)量進(jìn)行不斷提升；首先應(yīng)對(duì)抗原進(jìn)行高壓修復(fù)，并設(shè)定免疫組化抗原的陽性和陰性對(duì)照；其次應(yīng)嚴(yán)格遵循相關(guān)的操作規(guī)范和要求，讓染色質(zhì)量得以保證，避免因染色隨意而導(dǎo)致的制片污染。

總之，加強(qiáng)質(zhì)量控制能讓免疫組化病理技術(shù)的制片質(zhì)量顯著提高，進(jìn)而讓病理檢查診斷的質(zhì)量提高。在開展免疫組化病理技術(shù)檢查時(shí)，每一環(huán)節(jié)失控都會(huì)對(duì)制片質(zhì)量造成影響，因此在實(shí)際的臨床工作中應(yīng)加強(qiáng)免疫組化病理技術(shù)的質(zhì)量控制，讓臨床免疫分析的有效性和準(zhǔn)確性得以保證，讓醫(yī)療衛(wèi)生服務(wù)的形象得以保證，值得臨床推廣和應(yīng)用。