環(huán)狀RNA 在腫瘤領(lǐng)域中的研究進(jìn)展△

劉歡妹，靖長(zhǎng)友，張曙光，王雪，張?chǎng)析?，于勝?/p>

國(guó)家癌癥中心/國(guó)家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心/中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院腫瘤醫(yī)院骨科，北京 100021

環(huán)狀RNA（circular RNA，circRNA）是一類以共價(jià)鍵結(jié)構(gòu)形成，不具有3'和5'末端頭尾結(jié)構(gòu)的環(huán)狀長(zhǎng)鏈非編碼RNA。circRNA因其閉環(huán)環(huán)狀結(jié)構(gòu)對(duì)核酸外切酶具有較高的耐受性，不易被降解，因此，可穩(wěn)定存在于真核生物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。1976年，Sanger等[1]利用電子顯微鏡首先在植物感染的病毒顆粒中觀察到了共價(jià)閉合環(huán)裝RNA分子，并將其命名為circRNA。circRNA最初被認(rèn)為是RNA剪接過(guò)程中產(chǎn)生的無(wú)功能產(chǎn)物。隨著高通量測(cè)序技術(shù)和生物信息學(xué)的發(fā)展，circRNA在基因轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后修飾及翻譯調(diào)控中的作用逐漸被證實(shí)。circRNA在神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病和腫瘤等領(lǐng)域均積累了一定的研究成果，這提示circRNA具有疾病特異性。乳腺癌、肝癌、膠質(zhì)瘤和結(jié)直腸癌等惡性腫瘤中均存在circRNA的異常表達(dá)，circRNA可成為潛在的腫瘤疾病診斷指標(biāo)和治療靶點(diǎn)。本文就circRNA的生物學(xué)特征及其在腫瘤領(lǐng)域的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 circRNA 的生成與降解

circRNA是由特殊的前體mRNA通過(guò)可變剪接產(chǎn)生的。根據(jù)前體mRNA的不同，circRNA可分為外顯子circRNA、內(nèi)含子circRNA、外顯子-內(nèi)含子circRNA和基因間型circRNA[2]。外顯子circRNA的形成機(jī)制為套索驅(qū)動(dòng)的環(huán)化和內(nèi)含子配對(duì)驅(qū)動(dòng)的環(huán)化[3]，前者是指一個(gè)外顯子的3'剪接供體與另一個(gè)外顯子的5'剪接受體共價(jià)結(jié)合后切除內(nèi)含子，然后形成circRNA；后者是指由兩個(gè)內(nèi)含子先通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，再切除內(nèi)含子，最后形成circRNA。內(nèi)含子circRNA由內(nèi)含子獨(dú)立環(huán)化而來(lái)，其結(jié)構(gòu)的形成依賴于含有鄰近5'剪接位點(diǎn)處的7個(gè)核苷酸GU富集元件和3'剪接位點(diǎn)處的11個(gè)核苷酸C富集元件[4]。某些環(huán)化的外顯子中間保留有內(nèi)含子，此類circRNA為外顯子-內(nèi)含子circRNA。circRNA具有特異的內(nèi)切酶位點(diǎn)，可通過(guò)堿基互補(bǔ)的方式調(diào)控靶基因mRNA的翻譯或降解[5]。有研究發(fā)現(xiàn)，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，circRNA通過(guò)進(jìn)入細(xì)胞外囊泡的方式進(jìn)行清除[6]，但該研究為體外實(shí)驗(yàn)，關(guān)于人體內(nèi)circRNA的降解機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

2 circRNA 的生物學(xué)功能

2.1 miRNA 的海綿作用

微小RNA（microRNA，miRNA）是內(nèi)源性非編碼雙鏈線性RNA，具有一定的分子特異性和靶向性，是基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的重要元件，可競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合并降解靶mRNA，從而影響疾病的發(fā)生與發(fā)展。circRNA可與相應(yīng)的miRNA競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，從而調(diào)控靶基因的表達(dá)。Hansen等[7]在人和小鼠的大腦中發(fā)現(xiàn)了一種高表達(dá)的circRNA，即ciRS-7，并證實(shí)miRNA-7的環(huán)狀RNA海綿（circular RNA sponge for miRNA-7，ciRS-7）包含70多個(gè)選擇性保守的miRNA靶位點(diǎn)，可明顯抑制miRNA-7的表達(dá)。circRNA腦降解相關(guān)蛋白1（cerebellar degeneration-related protein 1，CDR1）/ciRS-7的過(guò)表達(dá)上調(diào)了miRNA靶基因的表達(dá)，而敲除它具有相反的作用；同時(shí)證實(shí)睪丸特異性circRNA Sry9是一種miRNA-138海綿，表明circRNA產(chǎn)生的miRNA海綿作用是一種普遍現(xiàn)象，這也是首次對(duì)circRNA自然表達(dá)功能進(jìn)行分析的研究。Hairong等[8]研究表明，競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA ciRS-7可通過(guò)調(diào)控其靶點(diǎn)miRNA-7/KLF4和核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）信號(hào)途徑促進(jìn)食管鱗狀細(xì)胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）細(xì)胞的遷移和侵襲，表明circRNA作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA（competitive endogenous RNA，ceRNA）與miRNA競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，對(duì)上下游的基因通路進(jìn)行調(diào)控，從而調(diào)控基因的表達(dá)。

2.2 翻譯蛋白

circRNA為非編碼RNA。有學(xué)者認(rèn)為，理論上通過(guò)插入病毒內(nèi)部核糖體始動(dòng)位點(diǎn)，將circRNA翻譯成多肽或蛋白質(zhì)，這從circRNA結(jié)構(gòu)上是可以實(shí)現(xiàn)的[9]。Yang等[10]研究證實(shí)，circRNA可以通過(guò)堿基修飾的N6-甲基腺苷（m6A）位點(diǎn)驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄起始，翻譯蛋白。Legnini等[11]通過(guò)對(duì)人和鼠的肌細(xì)胞體外分化過(guò)程中的circRNA進(jìn)行高通量基因組測(cè)序及對(duì)其表達(dá)譜進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，circ-ZNF609可特異性控制成肌細(xì)胞的增殖。circ-ZNF609包含開(kāi)放閱讀框，與線性轉(zhuǎn)錄相同，從起始密碼子開(kāi)始，終止于終止密碼子，且認(rèn)為circ-ZNF609翻譯蛋白質(zhì)的功能與其含有核糖體結(jié)合位點(diǎn)有關(guān)，提供了真核生物中circRNA編碼蛋白的有力證據(jù)。叉頭框蛋白O3（forkhead box O3，F(xiàn)OXO3）在腫瘤的進(jìn)展中起重要作用，Du等[12]發(fā)現(xiàn)circ-FOXO3是一種circRNA，其作為一種內(nèi)源性細(xì)胞質(zhì)，可以與E3泛素蛋白連接酶MDM2結(jié)合，并調(diào)節(jié)其在多泛素化修飾和降解靶蛋白中的作用，從而發(fā)揮促進(jìn)、定位和管理蛋白質(zhì)的功能。因此，越來(lái)越多的研究證實(shí)了circRNA可結(jié)合并編碼蛋白從而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。

2.3 調(diào)節(jié)RNA 結(jié)合蛋白

RNA結(jié)合蛋白（RNA binding protein，RBP）在轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)的調(diào)節(jié)中起著重要作用，可發(fā)揮RNA選擇性剪接、維持RNA穩(wěn)定、RNA轉(zhuǎn)運(yùn)和翻譯等多種生物學(xué)功能，并參與細(xì)胞的增殖、分化、遷移、衰老、凋亡及對(duì)氧化應(yīng)激的細(xì)胞應(yīng)答。有研究表明，circRNA可競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合RBP，充當(dāng)RBP的海綿，從而改變剪接模式或mRNA的穩(wěn)定性。與對(duì)應(yīng)的線性mRNA相比，circRNA上的RBP結(jié)合位點(diǎn)較少，但仍有證據(jù)證實(shí)circRNA與RBP具有相互作用的關(guān)系。這可能是因?yàn)閏ircRNA可以采用與相同序列的相關(guān)線性分子不同的三級(jí)結(jié)構(gòu)，或者可通過(guò)circRNA中結(jié)合在一起的序列產(chǎn)生新的蛋白結(jié)合位點(diǎn)[12]。另外，circRNA還可調(diào)控RBP的表達(dá)，且由腫瘤抑制因子WWOX的親本基因編碼的2個(gè)circRNA（KIRKOS-73和KIRKOS-71）可以調(diào)節(jié)p53的生成。同時(shí)新的研究結(jié)果表明，hsa_circ_0055538通過(guò)p53/Bcl-2/caspase信號(hào)通路參與口腔鱗狀細(xì)胞癌的進(jìn)展[13]。

2.4 調(diào)控親本基因表達(dá)

研究表明，circRNA在轉(zhuǎn)錄后和基因表達(dá)的調(diào)控中起著舉足輕重的作用，在人類細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)一類與RNA聚合酶Ⅱ（polymeraseⅡ，PolⅡ）相關(guān)的一類circRNA，其結(jié)構(gòu)為內(nèi)含子循環(huán)包繞外顯子，即外顯子-內(nèi)含子circRNA（exon-intron circRNA，EIciRNA）。EIciRNA主要定位于細(xì)胞核內(nèi)，與U1核小核糖核蛋白（U1 small nuclear ribonucleoprotein，U1 snRNP）顆粒和RNA PolⅡ相互作用，促進(jìn)其親本基因的轉(zhuǎn)錄[14]。

3 circRNA 在腫瘤中的研究

3.1 乳腺癌

近年來(lái)，越來(lái)越多的研究報(bào)道circRNA在乳腺癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中異常表達(dá)。Smid等[15]分析了348例原發(fā)性乳腺癌的RNA序列數(shù)據(jù)，最后確定了95 843個(gè)circRNA，其中20 441個(gè)circRNA是已知的。在與同一基因外顯子邊界相匹配的環(huán)狀結(jié)構(gòu)中，668個(gè)circRNA與線性基因表達(dá)水平的相關(guān)性較差甚至呈負(fù)相關(guān)；同時(shí)，確定了與乳腺癌亞群相關(guān)的circRNA表達(dá)譜，并進(jìn)行了詳細(xì)的生物信息學(xué)分析；驗(yàn)證了敲除siRNA介導(dǎo)的circCONT2基因可明顯降低乳腺癌細(xì)胞系MCF-7和BT-474的存活率，從而證實(shí)了circRNA的生物學(xué)功能。Yin等[16]將乳腺癌患者和健康志愿者的血液進(jìn)行了circRNA芯片測(cè)序，結(jié)果顯示，共19種circRNA的表達(dá)上調(diào)，22種circRNA的表達(dá)下調(diào)，并通過(guò)繪制乳腺癌表達(dá)譜，認(rèn)為hsa_circ_0001785可作為診斷乳腺癌的分子標(biāo)志物；通過(guò)對(duì)三陰性乳腺癌患者的乳腺癌組織進(jìn)行circRNA芯片測(cè)序發(fā)現(xiàn)，circEPSTI 1（hsa_circRNA_000479）明顯升高。Chen等[17]進(jìn)行的體內(nèi)試驗(yàn)表明，circEPSTI1與miRNA-4753、miRNA-6809結(jié)合可發(fā)揮海綿的作用，調(diào)節(jié)bcl11a的表達(dá)，從而影響腫瘤壞死因子的增殖和凋亡。Liu 等[18]研 究證實(shí) circRNA-MTO1（hsa_circRNA_007874）與腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子4（tumor necrosis factor receptor associated factor 4，TRAF4）相互作用，阻斷了TRAF4激活Eg5翻譯，從而抑制了Eg5蛋白的表達(dá)水平，并降低了乳腺癌細(xì)胞的活力，這些通路有望成為乳腺癌靶向治療的新靶點(diǎn)。

3.2 肺癌

Zhu等[19]通過(guò)對(duì)肺癌組織進(jìn)行circRNA測(cè)序發(fā)現(xiàn)，39個(gè)circRNA的表達(dá)上調(diào)，20個(gè)circRNA的表達(dá)下調(diào)。其中hsa_circ_0013958的表達(dá)明顯上調(diào)，并能夠促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖、侵襲，并抑制其凋亡，可作為肺癌早期篩查的重要指標(biāo)。Tan等[20]研究證明F-circEA-4a是由EML4-ALK-v3b后剪接產(chǎn)生的促腫瘤型的circRNA，是一種新型的非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）生物標(biāo)志物；此外，EML4-ALK-v3b衍生的circRNAF-circEA-2a主要位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，可促進(jìn)NSCLC細(xì)胞的遷移和侵襲，但對(duì)NSCLC細(xì)胞增殖的影響較?。欢鳩-circEA-2a存在于腫瘤中，而不存在于EML4-ALK融合基因的NSCLC患者的血漿中，進(jìn)一步支持了F-circEA-4a對(duì)EML4-ALK陽(yáng)性NSCLC的診斷價(jià)值。circRNA是肺癌的重要分子標(biāo)志物，在肺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。Wang等[21]研究證實(shí)了circPTK2（hsa_circ_0008305）對(duì) miRNA-429/miRNA-200b-3p的海綿作用，可通過(guò)控制轉(zhuǎn)錄中介因子 1-γ（transcriptional intermediary factor 1-γ，TIF1γ）抑制TGF-β誘導(dǎo)的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化和NSCLC細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，且表明circPTK2過(guò)表達(dá)對(duì)NSCLC的轉(zhuǎn)移具有抑制作用。

3.3 結(jié)直腸癌

Jim等[22]研究發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0136666可通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合結(jié)直腸癌細(xì)胞中的miRNA-136從而上調(diào)SH2B1的表達(dá)；SH2B1的過(guò)表達(dá)可逆轉(zhuǎn)hsa_circ_0136666對(duì)結(jié)直腸癌進(jìn)展的抑制作用，表明hsa_circ_0136666可通過(guò)miRNA-136/SH2B1軸促進(jìn)結(jié)直腸癌的進(jìn)展。Li等[23]研究發(fā)現(xiàn)，circITGA7可與miRNA-370-3p結(jié)合，拮抗miRNA-370-3p對(duì)神經(jīng)纖維蛋白1的抑制，通過(guò)阻斷Ras信號(hào)通路和促進(jìn)整合素α7（integrin subunit alpha 7，ITGA7）基因的轉(zhuǎn)錄從而抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。circRNA不僅與結(jié)直腸癌的進(jìn)展關(guān)系密切，還可用于評(píng)估患者對(duì)化療藥物的耐藥性。Abu等[24]通過(guò)對(duì)化療耐藥和化療敏感的結(jié)直腸癌細(xì)胞進(jìn)行circRNA測(cè)序及對(duì)差異表達(dá)譜進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，共有773個(gè)circRNA的表達(dá)上調(diào)，732個(gè)circRNA的表達(dá)下調(diào)，其中，差異表達(dá)的hsa_circ_32883可能是化療敏感的生物學(xué)標(biāo)志物。

3.4 神經(jīng)膠質(zhì)瘤

Renjie等[25]研究發(fā)現(xiàn)，circNT5E通過(guò)直接結(jié)合miRNA-422A并抑制其活性，降低NT5e、sox4、磷酯酰肌醇-3激酶催化亞單位α（phosphatidylinositol-3 kinase catalytic subunit alpha，PI3KCA）、磷酸化蛋白激酶 B（phosphorylation protein kinase B，p-AKT）和磷酸化 Smad2（phosphorylated Smad2，P-Smad2）的表達(dá)水平，從而影響神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。Zhang等[26]通過(guò)核糖體新生鏈復(fù)合物結(jié)合RNA測(cè)序（RNC-seq）發(fā)現(xiàn)了幾種可能由環(huán)RNA編碼的肽，并進(jìn)一步鑒定出由基因間長(zhǎng)鏈非蛋白編碼RNA p53誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄物（long intergenic non-protein-coding RNA p53-induced transcript，LINC-PINT）編碼的87-氨基酸肽，直接與聚合酶相關(guān)因子復(fù)合物（polymerase associated factor complex，PAF1C）相互作用，抑制多種腫瘤基因的轉(zhuǎn)錄；與正常組織相比，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織中的87-氨基酸肽和circRNA的表達(dá)水平較低，這為circRNA編碼蛋白及其在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的潛在作用提供了新的證據(jù)。circ-SHPRH在內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)（internal ribosome entry site，IRES）元件的驅(qū)動(dòng)下產(chǎn)生一種新的腫瘤抑制蛋白SHPRH-146aa，SHPRH-146aa與全長(zhǎng)蛋白協(xié)同發(fā)揮作用，保護(hù)誘導(dǎo)分子免于被降解，從而發(fā)揮腫瘤抑制劑的作用。Begum等[27]研究表明SHPRH-146aa高表達(dá)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的生存期較長(zhǎng)。

3.5 前列腺癌

有研究通過(guò)對(duì)前列腺癌（prostate cancer，PCA）組織和癌旁組織中的circRNA進(jìn)行測(cè)序，篩選了1021個(gè)異常表達(dá)的circRNA，證實(shí)了PCA中circRNA的異常表達(dá)[28]。Chen等[29]對(duì)144例PCA組織進(jìn)行全RNA基因組測(cè)序，篩選出了7232個(gè)與腫瘤相關(guān)的circRNA，其中，circCSNK1G3與miRNA-181結(jié)合可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)；circRNA可調(diào)節(jié)其親本基因的轉(zhuǎn)錄水平，90%的circRNA在腫瘤的增殖過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，而其線性對(duì)應(yīng)產(chǎn)物卻無(wú)此種作用，表明circRNA在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中獨(dú)立發(fā)揮作用。Yang等[30]研究發(fā)現(xiàn)，Amotl1基因衍生的circRNA circAMOTL1L在人類PCA中的表達(dá)水平較低，而下調(diào)的circAMOTL1L通過(guò)下調(diào)E-鈣黏蛋白的表達(dá)和上調(diào)波形蛋白的表達(dá)從而促進(jìn)PCA細(xì)胞的遷移和侵襲，導(dǎo)致上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化和PCA進(jìn)展。此外，該研究還發(fā)現(xiàn)RBM25基因可直接與circAMOTL1L結(jié)合并誘導(dǎo)其發(fā)生生物作用，而p53通過(guò)直接激活RBM25基因?qū)ι掀?間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程進(jìn)行調(diào)節(jié)。這些研究證實(shí)，p53/RBM25介導(dǎo)的circAMOTL1L-miRNA-193a-5p-Pcdha調(diào)控軸與PCA細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程有密切關(guān)系。

3.6 肝癌

Qiu等[31]通過(guò)繪制肝癌組織和癌旁組織circRNA表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)有38個(gè)circRNA的表達(dá)下調(diào)，4個(gè)circRNA的表達(dá)上調(diào)，其中，circADAMTS13表達(dá)上調(diào)與腫瘤大小呈負(fù)相關(guān)，與患者的預(yù)后呈正相關(guān)，可作為肝細(xì)胞癌預(yù)后的評(píng)價(jià)指標(biāo)。Wei等[32]通過(guò)對(duì)mRNA、circRNA、miRNA進(jìn)行全基因組測(cè)序發(fā)現(xiàn)，circ-CDYL在早期肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平明顯升高，可作為miRNA-892a和miRNA-328-3p的海綿，與編碼肝癌衍生生長(zhǎng)因子（hepatomaderived growth factor，HDGF）和缺氧誘導(dǎo)因子天冬酰胺羥化酶（hif1an）的mRNA相互作用，激活磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）-蛋白激酶 B（protein kinase B，PKB，也稱AKT）-雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物1（mammalian target of rapamycin complex 1，MTORC1）/β-catenin 和Notch2通路，促進(jìn)原癌基因含重復(fù)凋亡結(jié)構(gòu)桿狀病毒抑制劑5（baculoviral inhibitor of apoptosis protein repeat containing 5，BIRC5）、survivin和myc效應(yīng)蛋白桿狀病毒凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）重復(fù)序列的表達(dá)，這揭示了肝細(xì)胞癌早期以circRNA為中心的非編碼調(diào)控RNAS網(wǎng)絡(luò)和早期肝癌鑒別腫瘤標(biāo)志物。除了circRNA-miRNA-mRNA軸在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用得到了初步證實(shí)外，circRNA與mRNA結(jié)合蛋白協(xié)同調(diào)控肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制也逐漸受到學(xué)者們的重視。Liang等[33]的研究證實(shí)了circβ-catenin（circ-0004194）可通過(guò)拮抗糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β，GSK3β）誘導(dǎo)的β-連環(huán)蛋白磷酸化和降解從而穩(wěn)固全長(zhǎng)β-連環(huán)蛋白表型，激活WNT信號(hào)通路，調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。

3.7 胃癌

circPVT1在胃癌組織中高表達(dá)，可作為miRNA-125家族的海綿從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。Chen等[34]研究表明，circPVT1可作為胃癌患者總生存情況和無(wú)瘤生存情況的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)。Ding等[35]研究發(fā)現(xiàn)circ-DONSON在胃癌組織中高表達(dá)，通過(guò)激發(fā)NURF復(fù)合物啟動(dòng)SOX4從而調(diào)控轉(zhuǎn)錄，且其高表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展和不良預(yù)后呈正相關(guān)。Huang等[36]發(fā)現(xiàn)，來(lái)源于AKT3基因外顯子8、9、10和11的circAKT3（hsa_circ_0000199）在順鉑耐藥的胃癌細(xì)胞和組織中高表達(dá)，circAKT3作為miRNA-198的海綿可以上調(diào)PIK3R1的表達(dá)，增加對(duì)順鉑的耐藥性。

3.8 骨肉瘤

有研究表明，Hsa_circ_0081001可作為骨肉瘤診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)的生物標(biāo)志物，可動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)和反映骨肉瘤患者的病情[37]。circTADA2A在骨肉瘤組織和細(xì)胞中呈高表達(dá)，并可作為miRNA-203a-3p的海綿上調(diào)腫瘤啟動(dòng)子CREB3，從而調(diào)控骨肉瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移[38]。

3.9 多腫瘤的研究

有部分研究同時(shí)納入了幾種腫瘤進(jìn)行觀察。Zheng等[39]通過(guò)對(duì)6例正常組織標(biāo)本（腦、肺、胃、肝、心臟和結(jié)腸）和7例腫瘤組織標(biāo)本（膀胱癌、腎癌、胃癌、肝細(xì)胞癌、乳腺癌、前列腺癌和結(jié)直腸癌）進(jìn)行RNA測(cè)序，檢測(cè)出27 000多個(gè)circRNA，證實(shí)在正常組織和腫瘤組織中，不同circRNA的表達(dá)情況是不同的。circHIPK3是來(lái)源于HIPK3基因外顯子2的一類circRNA，通過(guò)沉默circHIPK3能夠明顯抑制人類細(xì)胞的生長(zhǎng)；該研究通過(guò)熒光素酶篩選分析發(fā)現(xiàn)，circHIPK3對(duì)9個(gè)miRNA具有海綿作用，且有18個(gè)潛在的結(jié)合位點(diǎn)，其中circHIPK3可與miRNA-124直接結(jié)合并抑制其活性。Chen等[40]發(fā)現(xiàn)，circAGO2在胃癌、結(jié)腸癌、前列腺癌和神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)上調(diào)，且與人抗原R蛋白相互作用，從而減少其與親本基因AGO2的結(jié)合，抑制AGO2/miRNA介導(dǎo)的基因沉默功能，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)外的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。

4 小結(jié)與展望

近年來(lái)，腫瘤的發(fā)病率逐漸升高，腫瘤的早期篩查和靶向治療已成為目前腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。circRNA起初被認(rèn)為是RNA中拼接錯(cuò)誤的產(chǎn)物，是無(wú)功能的，而進(jìn)一步的深入研究使人們改變了對(duì)circRNA的認(rèn)知。盡管對(duì)circRNA的研究處于起步階段，但已代替miRNA、lncRNA成為非編碼RNA研究中的一個(gè)新方向。由于circRNA具有閉環(huán)結(jié)構(gòu)使其可穩(wěn)定存在于細(xì)胞質(zhì)中不被降解，其疾病特異性使其可作為腫瘤早期篩查和預(yù)后評(píng)價(jià)的標(biāo)志物，對(duì)于闡明腫瘤發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制、作為新的有效靶點(diǎn)具有重要意義。目前關(guān)于circRNA-miRNA-mRNA軸的研究較多，也有少量關(guān)于circRNA與RNA結(jié)合蛋白通路的研究，然而對(duì)circRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的具體生物學(xué)功能及其機(jī)制尚未明確，但隨著目前高通量測(cè)序技術(shù)的逐步完善和測(cè)序價(jià)格的降低，使更多的研究者將投入大量的人力、物力、財(cái)力研究更多關(guān)于腫瘤的測(cè)序數(shù)據(jù)以及非編碼RNA的網(wǎng)絡(luò)作用關(guān)系，為腫瘤基因治療提供新的方向。