Cyclin D1及TNFR1在腺瘤性息肉與胃癌中的表達(dá)意義

周洪濤 李山林 劉學(xué)進(jìn)

胃癌是當(dāng)前常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，我國(guó)胃癌發(fā)病率的增速是世界平均水平的2倍左右，當(dāng)前每年新發(fā)病例接近50萬(wàn)，嚴(yán)重威脅著居民的健康[1-2]。腺瘤性息肉是指胃黏膜局限性良性上皮或間質(zhì)成分增生形成的病變，通常被認(rèn)為是胃癌的癌前病變。流行病學(xué)調(diào)查顯示腺瘤性息肉的癌變率比較高，在胃組織的癌變率在50.0%以上[3-4]。腺瘤性息肉與胃癌患者的早期診斷率較低，患者確診時(shí)大多數(shù)已經(jīng)屬于中晚期，預(yù)后比較差[5]。腺瘤性息肉與胃癌的影像學(xué)檢查有一定的誤差性，病理學(xué)檢查也存在檢查的創(chuàng)傷性、取樣部位的誤差大、閱片者自身偏倚等不足[6]。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)、現(xiàn)代免疫組織化學(xué)的不斷發(fā)展，通過(guò)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞特異抗原等來(lái)診斷蛋白水平的變化已成為了可能。cyclin D1的擴(kuò)增和過(guò)表達(dá)與人體多種腫瘤有關(guān)，cyclin D1的過(guò)度表達(dá)促使細(xì)胞過(guò)度增殖繼而發(fā)生惡變[7-8]。TNFR在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到了重要作用，TNFR1可促進(jìn)IL-6的表達(dá)、激活NF-KB信號(hào)通路，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖以及細(xì)胞程序化死亡，從而參與調(diào)控多種腫瘤血管發(fā)生相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄[9-10]。本研究收集相關(guān)胃癌病例，對(duì)患者的臨床特征進(jìn)行了回顧性研究，并用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Cyclin D1及TNFR1的表達(dá)水平，探討Cyclin D1及TNFR1在腺瘤性息肉與胃癌中的表達(dá)意義。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

采用回顧性、隨機(jī)抽樣研究方法，選擇2011年12月到2016年8月在我院進(jìn)行診治的120例胃癌患者與120例腺瘤性息肉患者的組織標(biāo)本作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：患者臨床病例資料齊全；原發(fā)于胃部疾病，非其他部位轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的胃部疾病病例；所有病例均為初次治療或外院術(shù)后治療不徹底3個(gè)月以內(nèi)；研究得到了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：組織病理學(xué)不明確的病例；未行手術(shù)或活檢病例；妊娠孕婦與哺乳期婦女；精神疾病患者。

1.2 免疫組化分析

所有標(biāo)本都給予免疫組化分析，采用 Envision法染色兩步法，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。兔抗人Cyclin D1、TNFR1多克隆抗體都由英國(guó)Abcam公司提供，工作濃度為1∶100?？焖倜庖呓M化檢測(cè)試劑盒由福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作；英國(guó)Abcam公司提供Breast carcinoma作為陽(yáng)性質(zhì)控片。95%乙醇、85%乙醇、蘇木精、PBS 緩沖液、二甲苯、無(wú)水乙醇、蒸餾水、內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑、中性樹(shù)膠等由本院保存。

由兩名高年資病理醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行染色結(jié)果判斷，TNFR1陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，cyclin D1陽(yáng)性染色為腫瘤細(xì)胞的胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒。雙盲法隨機(jī)抽取有代表性的10個(gè)連續(xù)的高倍視野(×400倍)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，TNFR1、cyclin D1陽(yáng)性染色的腫瘤細(xì)胞占所有腫瘤細(xì)胞的比例≥20%被視為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 調(diào)查分析

選擇Microsoft Excel 2010軟件收集2組的臨床資料信息，進(jìn)一步調(diào)閱胃癌患者的病史，通過(guò)查閱隨訪資料和電話等方式對(duì)患者進(jìn)行隨訪，記錄內(nèi)容包括患者患病年齡、聯(lián)系人及聯(lián)系電話、性別、通訊地址、病理診斷、臨床診斷等。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

選擇SPSS 20.00軟件進(jìn)行分析，TNFR1、cyclin D1腺瘤性息肉與胃癌組織間表達(dá)差異的比較采用卡方分析檢驗(yàn)，TNFR1、cyclin D1和患者臨床病理資料間的關(guān)系采用卡方分析檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 一般資料對(duì)比

在120例胃癌患者中，男性68例，女性52例；年齡35～83歲，平均年齡(54.22±12.49)歲；Dukes分期：A期+B期48例，C期+D期72例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有60例，無(wú)60例；分化程度：高分化60例，中分化40例，低分化20例；黏液癌：有20例，無(wú)100例；浸潤(rùn)深度：<肌層40例，≥肌層80例。

在120例腺瘤性息肉患者中，男性65例，女性55例；年齡32～84歲，平均年齡(54.11±9.78)歲。2組性別、年齡對(duì)比無(wú)顯著差異(P>0.05)。

2.2 Cyclin D1及TNFR1表達(dá)對(duì)比

胃癌組織的Cyclin D1及TNFR1陽(yáng)性表達(dá)率分別為75.0%和65.0%，腺瘤性息肉組織分別為3.3%和15.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 胃癌與腺瘤性息肉組織的Cyclin D1及TNFR1陽(yáng)性表達(dá)率對(duì)比(例，%)

2.3 Cyclin D1及TNFR1表達(dá)的相關(guān)性

120例胃癌組織中有75例Cyclin D1及TNFR1蛋白的表達(dá)同時(shí)呈陽(yáng)性，腺瘤性息肉組織中只有3例同時(shí)呈陽(yáng)性，Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示Cyclin D1及TNFR1蛋白在胃癌中的表達(dá)呈正相關(guān)(γ=0.563,P=0.002)。

2.4 胃癌組織Cyclin D1及TNFR1表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性

Cyclin D1及TNFR1在胃癌組織中的陽(yáng)性率與胃癌的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、黏液癌、Dukes分期呈正相關(guān)(P<0.05)，與腫瘤的分化程度呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 胃癌組織Cyclin D1、TNFR1陽(yáng)性表達(dá)率與臨床特征的相關(guān)性(例，%)

3 討論

胃癌的發(fā)生與發(fā)展是由多因子參與調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程，早期癥狀不明顯，多由腺瘤性息肉發(fā)展而來(lái)，病情發(fā)現(xiàn)時(shí)多為癌癥中晚期，因此死亡率一直居高不下[11-12]。

目前胃癌與腺瘤性息肉發(fā)病機(jī)理尚未完全了解，與其它腫瘤一樣，胃癌與腺瘤性息肉的發(fā)生歸因于基因與環(huán)境的相互作用，正是這些基因多態(tài)影響或“修飾”不同個(gè)體對(duì)環(huán)境因素作用的敏感性[13]。不同基因的表達(dá)在息肉形成、癌變過(guò)程中的作用及其胃癌發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系當(dāng)前被廣泛深入分析與研究[14]。

細(xì)胞周期調(diào)控紊亂是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的重要環(huán)節(jié)，Cyclin D1是細(xì)胞周期調(diào)控因子，是癌基因，有正性調(diào)節(jié)作用[15]。有研究表明cyclin D1隨著胃黏膜病理變化加重，Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率顯著增加[16]。TNFR1是分子量為55 kD的Ⅰ型跨膜糖蛋白，廣泛分布于正常細(xì)胞膜與腫瘤細(xì)胞表面。TNFR1在引起細(xì)胞凋亡、抗腫瘤和抗病毒感染中發(fā)揮重要作用，也參與自身免疫性疾病[17]。本研究顯示胃癌組織的Cyclin D1及TNFR1陽(yáng)性表達(dá)率分別為75.0%和65.0%，腺瘤性息肉組織分別為3.3%和15.0%，對(duì)比有顯著性差異(P<0.05)；Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示Cyclin D1及TNFR1蛋白在胃癌中的表達(dá)呈正相關(guān)(γ=0.563,P=0.002)。相關(guān)研究也表明TNFR1也可以介導(dǎo)細(xì)胞活化信號(hào)和增殖信號(hào)，誘導(dǎo)一氧化氮合成酶和白介素-8的活性，活化核轉(zhuǎn)錄因子和激活蛋白[18]。cyclin D1基因的擴(kuò)增是重要的胃癌促發(fā)因素，可能發(fā)生在胃黏膜上皮癌變的早期階段，可作為一個(gè)潛在的胃癌早期診斷分子標(biāo)志物[19]。

生長(zhǎng)在人體黏膜表面上的贅生物統(tǒng)稱為息肉，也是指人體組織表面長(zhǎng)出的多余腫物。腺瘤性息肉是胃癌的癌前狀態(tài)之一，也決定著胃癌的發(fā)生與發(fā)展。cyclin D1基因既是細(xì)胞周期G1/S期轉(zhuǎn)換的正向調(diào)節(jié)因子，也是G1期細(xì)胞增殖信號(hào)的關(guān)鍵蛋白[20]。臨床研究表明在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、肺癌、肝細(xì)胞癌、乳腺癌、食管癌等多種惡性腫瘤中存在cyclin D1基因擴(kuò)增、重排及過(guò)表達(dá)[21-22]。

TNFR1引起的作用比較廣，包括殺細(xì)胞活性、抗病毒活性等。本研究顯示Cyclin D1及TNFR1在胃癌組織中的陽(yáng)性率與胃癌的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、黏液癌、Dukes分期呈正相關(guān)(P<0.05)，與腫瘤的分化程度呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。有研究表明在胃癌的不同分化程度上，Cyclin D1及TNFR1表達(dá)的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是Cyclin D1及TNFR1的表達(dá)呈正相關(guān)，提示兩者在腺瘤性息肉與胃癌的發(fā)生中可能具有協(xié)同作用[23]。然而本研究也存在缺陷，沒(méi)有在腺瘤性息肉與胃癌組織中針對(duì)Cyclin D1及TNFR1做動(dòng)態(tài)的檢測(cè)，將在下一步進(jìn)行深入分析。

總之，Cyclin D1及TNFR1在腺瘤性息肉與胃癌中都呈現(xiàn)過(guò)表達(dá)狀況，與腺瘤性息肉與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，兩者的早期檢測(cè)可為進(jìn)一步提高胃癌的診治水平提供思路。