Notch-1、Notch-3和Hes-1在胃癌中的表達及其臨床意義*

張映城，矯健鵬，李勇進，秦志豐，岳小強，魏品康，顏兵

（1.中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院 中醫(yī)科，上海 200003；2.中國人民解放軍總醫(yī)院海南醫(yī)院 腫瘤科，海南 三亞 572000）

Notch信號通路可能在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起到一定的作用。在哺乳動物中，目前發(fā)現Notch信號通路存在Notch-1、Notch-2、Notch-3、Notch-4 4個受體及Jag-1、Jag-2和DLL-1、DLL-3、DLL-4 5個配體，其常見的經典下游基因有Hes-1[1]。在惡性腫瘤中，Notch信號通路不同的配體和受體表達具有不同的意義，比如REEDIJK等[2]研究發(fā)現，在乳腺癌中高Notch-1和Jag-1共表達提示患者不良預后；LIN等[3]在頭頸部腫瘤中亦有類似發(fā)現；LEE等[4]在非小細胞肺癌中發(fā)現Notch-3高表達和T分期負相關。然而，對Notch信號通路相關受體和配體在胃癌中的表達及其臨床意義尚不明確。基于此背景，本研究旨在分析Notch-1、3及Hes-1在胃癌中的表達及其與相關臨床病理參數的聯系。

1 資料與方法

1.1 臨床標本

選取2014年1月—2016年1月中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院首次活檢病理確診的胃腺癌患者30例，所有患者術前均未接受新輔助治療?；颊卟±矸制趨⒄盏?版美國癌癥聯合委員會（AJCC）指南，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 試劑及實驗方法

人胃癌標本的處理采取本院病理科標準法處理，免疫組織化學（以下簡稱免疫組化）染色簡述如下：取4 μm薄層切片，常規(guī)處理后按比例加入一抗[兔抗人Notch-1單克隆抗體（ab52627）、兔抗人Notch-3多克隆抗體（ab23426）、兔抗人Hes-1單克隆抗體購（ab108937）購自美國Abcam公司]，過夜加入二抗后常規(guī)顯色，樹脂封片后晾干保存。

1.3 數據讀取

免疫組化結果分別由2位獨立的病理科醫(yī)師完成，取兩者均數為最終結果。讀數標準如下：取染色良好切片，顯微鏡100倍視野下隨機選取5個視野。采用下列方法判斷染色結果。將染色強度（0：無染色，1：輕度，2：中度，3：高度）和染色范圍（0：1%～10%，1：＞10%～25%，2：＞25%～50%，3：＞50%～75%，4：＞75%）兩者取乘積，按0～12分為4個等級，以0得0分，1～4得1分，5～8得2分，9～12得3分的方法取值。

1.4 統計學方法

數據分析采用SPSS 18.0統計軟件，計數資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法；相關分析采用Spearman法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者一般情況

本研究共納入30例不同分期的胃癌患者。其中，男性21例，女性9例，男∶女約為2.3∶1，符合我國胃癌男性多于女性的特點；年齡22～85歲，平均54.10歲。

2.2 Notch-1、Notch-3和Hes-1與TNM分期的相關性

Notch-1和Hes-1陽性率在不同的T分期中差異有統計學意義（P＜0.05），其中在中晚期患者中較高。Notch-3的陽性率僅在不同年齡的患者間差異有統計學意義（P＜0.05），其他臨床病理參數比較差異無統計學意義（P＞0.05）（見附表）。通過進一步相關性分析表明，Notch-1的表達和Hes-1有相關性（r=0.471，P=0.009），而 Notch-1 和 Notch-3（r=0.308，P=0.097）、Notch-3和Hes-1（r=0.218，P=0.247）的表達無相關性。

Notch-1表達多表現為細胞膜染色，核陽性少見，在胃癌細胞中表達高于周邊細胞；Notch-3在胃癌細胞中多呈核陽性；Hes-1表達以細胞核陽性為主。見附圖。

附表 不同影響因素Notch-1，Notch-3，Hes-1表達陽性率的比較 例

附圖 Notch-1、Notch-3和Hes-1在胃癌中的表達 （×100）

3 討論

本研究結果顯示，N otch信號通路相關受體Notch-1、Notch-3及其下游基因Hes-1在不同分期的胃癌患者中均存在一定表達，Notch-1和Hes-1的表達有相關性，兩者在不同的T分期中表達均有差異。本研究提示Notch-1和Hes-1在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中可能比Notch-3作用更重要，但未來仍需進一步研究。

既往研究提示，Notch信號通路的不同的受體和配體均在胃癌中有所表達，如DU等[5]通過一項包含15項研究的Meta分析發(fā)現Notch-1、Notch-2、Notch-3、Jag-1、Jag-2、DLL-4及Hes-1在胃癌中高表達，但部分研究結論并不完全一致。相比其他的受體和配體，Notch-1在胃癌組織中的表達及其臨床意義基本明確。研究顯示Notch-1在胃癌中高表達，且和不良預后因素相關，如YEH等[6]報道Notch-1在胃癌組織中的激活能夠促進腫瘤的進展；李大衛(wèi)等[7]通過免疫組化對比168例胃癌和27例正常胃黏膜發(fā)現，Notch-1在胃癌組織中表達增加且和腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、血管侵襲等相關，Notch-1陽性的患者3年生存率低于陰性的患者；SUN等[8]同樣發(fā)現Notch-1在胃癌中高表達，且和腸型胃癌聯系密切；DU等[5]報道盡管Notch-1和腫瘤體積、淋巴結侵襲和遠處轉移等相關，但卻和彌漫型胃癌相聯系。綜合既往的研究基本可看出，Notch-1在胃癌中提示不良預后，在本研究中，Notch-1和高T分期中更傾向于高表達，這和既往研究結果較為一致，但在其他病理參數上（如胃癌Lauren分型）并未得出有意義結論，提示未來仍需進一步擴大樣本量。

Notch-3在分子結構上和Notch-1并不完全一致，兩者功能不完全重疊。對Notch-3在腫瘤中的意義有不少報道，如在膽囊癌中，LIU等[9]報道，Notch-3在腺鱗癌及鱗癌中表達較高，且和小瘤塊、TNM分期較早相關；但不論是在何種病理類型的膽囊癌中，Notch-3的高表達都和不良預后相關；在非小細胞肺癌中，LEE等[4]報道Notch-3和高T分期呈負相關，但無預后意義。在胃腸道腫瘤中，SERAFIN等[10]報道Notch-3高表達可促進結腸癌細胞增殖；與之類似，OZAWA等[11]報道Notch-3核陽性在Ⅱ期和Ⅲ期結腸癌中和腫瘤復發(fā)相關。在胃癌中關于Notch-3的報道較少，結論也極為不一致。如DU等[5]通過Meta分析發(fā)現Notch-3在胃癌中高表達且和彌漫性胃癌相關；KANG等[12]卻發(fā)現Notch-3在腸型胃癌中高表達且和良好預后相關。本研究發(fā)現，Notch-3在胃癌中呈現核陽性表達，但其與相關臨床病理參數尚無相關，提示未來對于Notch-3在胃癌中的表達狀態(tài)及其臨床意義仍需要進一步的研究。

HES和HEY是Notch信號通路經典下游基因，在惡性腫瘤中，Notch-1和Hes-1信號通路常常是調節(jié)腫瘤細胞增殖的關鍵通路（如膠質瘤[13]）。Hes-1基因對于調控胃腸道正常干細胞具有至關重要的作用[14]，也是促成消化道腫瘤的關鍵[15]。值得注意的是由于Notch-1在消化道腫瘤中的高表達，Notch-1也往往是Hes-1高表達的主要原因（如胰腺癌[16]、腸癌[17]），盡管在胃癌細胞株中同樣發(fā)現Notch-1可導致Hes-1高表達[18]，但在胃癌標本中此類研究較少。本研究中發(fā)現Notch-1高表達和Hes-1相關，和既往研究結論較為一致。

本研究尚存在以下不足，首先是樣本量較小有可能導致結論不準確，盡管部分結論和既往研究較為一致，但仍存在不一致之處，且無法明確解釋，需要進一步擴大樣本量。二是本研究納入患者含所有臨床分期，因不同分期患者后續(xù)治療上無法統一，即便隨訪存在部分生存數據，但因無法排除不同治療方法等混雜因素，尚無法分析上述指標和患者最終生存的關系，需后續(xù)進一步研究。