LncRNA-PRNCR1多態(tài)性與腸癌易感性及預(yù)后的關(guān)系

周春燕 黃可可 陳小林 任妹 劉劍榮

【摘要】 目的：研究LncRNA-PRNCR1多態(tài)性與腸癌易感性及預(yù)后的關(guān)系。方法：分別比較對(duì)照組以及觀察組LncRNA-PRNCR1多態(tài)性之間的差異，分析LncRNA-PRNCR1多態(tài)性與結(jié)直腸癌患者的易感性以及預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果：兩組rs16901946中的基因型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與rs16901946中的AG、GG、AG/GG基因型位點(diǎn)相比，AA位點(diǎn)的腸癌發(fā)病率較高（P<0.05）。在≥58歲患者中，rs16901946中的AA基因型與腸癌的易感性相關(guān)，其OR值為1.801，在<58歲患者中，其OR值為0.960。同時(shí)，在加性模型中顯示，≥58歲患者中，每增加一個(gè)等位基因A，患者的結(jié)直腸癌風(fēng)險(xiǎn)增加33.3%;女性患者中，每增加一個(gè)等位基因A，患者直腸癌風(fēng)險(xiǎn)增加11.3%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。通過(guò)對(duì)不同基因型結(jié)腸癌患者的總體生存情況比較，患者的生存時(shí)間之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：患者LncRNA-PRNCR1中的rs16901946基因突變與患者的結(jié)直腸癌的進(jìn)展密切相關(guān)，未來(lái)可通過(guò)對(duì)患者的多基因量化分析，對(duì)腫瘤細(xì)胞的激活進(jìn)行預(yù)測(cè)。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)直腸癌 基因多態(tài)性 易感性 預(yù)后

[Abstract] Objective： To study the relationship between polymorphism of LncRNA-PRNCR1 and susceptibility and prognosis of intestinal cancer. Method： The differences of LncRNA-PRNCR1 polymorphism between control group and observation group were compared， and the correlation between LncRNA-PRNCR1 polymorphism and susceptibility and prognosis of patients with colorectal cancer was analyzed. Result： The difference of rs16901946 genotype between the two groups was statistically significant （P<0.05）， compared with the AG， GG and Ag/GG genotypes in rs16901946， the incidence of colorectal cancer at AA locus was higher （P<0.05）. In patients ≥58 years old， the AA genotype in rs16901946 was associated with the susceptibility to colorectal cancer， and OR value was 1.801; in patients <58 years old， the OR value was 0.960. At the same time， in the additive model， the risk of colorectal cancer increased by 33.3% for every allele A increased in patients ≥58 years old; for every allele A increased in female patients， the risk of rectal cancer increased by 11.3%， the differences were statistically significant （P<0.05）. The difference of survival time of patients with different genotypes of colon cancer was statistically significant （P<0.05）. Conclusion： The rs16901946 gene mutation in lncRNA-PRNCR1 is closely related to the progress of colorectal cancer in patients. In the future， the activation of tumor cells can be predicted by quantitative analysis of multiple genes in patients.

[Key words] Colorectal cancer Genetic polymorphism Susceptibility Prognosis

First-authors address： Pingxiang Peoples Hospital， Pingxiang 337000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.36.016

結(jié)直腸癌是臨床常見(jiàn)的消化道腫瘤性疾病之一，流行病學(xué)調(diào)查顯示，結(jié)腸癌僅次于肺癌，位于全球腫瘤疾病的第二位[1]。近年來(lái)，隨著我國(guó)生活水平的不斷提高，居民的飲食習(xí)慣以及生活方式發(fā)生顯著變化，我國(guó)結(jié)腸癌的發(fā)病率以及死亡率呈現(xiàn)顯著上升趨勢(shì)[2]，根據(jù)2014年全國(guó)流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)的結(jié)腸癌患者的發(fā)病率和死亡率分別為23.37/10萬(wàn)以及13.90/10萬(wàn)[3]，從目前的治療效果評(píng)價(jià)，由于結(jié)直腸癌的早期診斷存在一定的困難，患者一旦確診，均已經(jīng)發(fā)展為中晚期，制約著患者的治療[4]。在對(duì)結(jié)腸癌患者的細(xì)胞生物學(xué)的研究中，非編碼的RNA（ncRNA）區(qū)別于編碼RNA，在由患者的基因組進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后，不再進(jìn)行編碼蛋白質(zhì)，有研究顯示，此類(lèi)ncRNA主要通過(guò)對(duì)患者的正常細(xì)胞的時(shí)間以及空間的表達(dá)進(jìn)行干預(yù)而發(fā)揮其生物學(xué)功能[5]。而長(zhǎng)鏈非編碼RNA（LncRNA）在物種之間的序列保守性較差，結(jié)構(gòu)具有多樣化，同時(shí)其顯著的亞細(xì)胞定位功能也成為腫瘤細(xì)胞調(diào)控的靶點(diǎn)之一。研究顯示，LncRNA對(duì)患者的DNA甲基化、基因組印記、染色體修飾以及X染色體的沉默具有積極的調(diào)控作用，而隨著LncRNA基因的突變，勢(shì)必會(huì)造成患者腫瘤細(xì)胞的惡性增殖，嚴(yán)重影響患者的生命質(zhì)量[6]。LncRNA-PRNCR1存在遺傳多態(tài)性位點(diǎn)，本研究通過(guò)LncRNA-PRNCR1多態(tài)性與腸癌易感性及預(yù)后的關(guān)系分析，為臨床診斷提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究對(duì)象均來(lái)自2012年1月-2016年1月在本院治療的結(jié)直腸癌患者50例作為觀察組，其中病程：0～1年29例，1～2年21例;所有患者的臨床TNM分期均為Ⅱa期以及Ⅲ期，其中Ⅱa期19例，Ⅲ期31例。另選取本院健康體檢表觀健康者50例為對(duì)照組。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合結(jié)直腸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7];所有患者入院前均未進(jìn)行抗腫瘤治療。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重心臟、肝、腎功能障礙的患者;中途停止治療或者轉(zhuǎn)院患者;不配合隨訪患者。研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)論證通過(guò)。

1.2 方法 DNA提取方法：所有研究對(duì)象入組后，均進(jìn)行靜脈采血4 mL，離心后，取患者的血漿部分，采用磁珠法對(duì)患者的DNA進(jìn)行提取，設(shè)備以及試劑盒由西安金磁納米生物技術(shù)有限公司提供。采用PCR擴(kuò)增儀對(duì)患者的樣本進(jìn)行DNA擴(kuò)增，采用的PCR擴(kuò)增儀器由美國(guó)ABI公司提供，引物由上海生物工程股份有限公司提供，采用美國(guó)thermo提供的蛋白核酸檢測(cè)儀對(duì)樣本的核酸進(jìn)行檢測(cè)，采用美國(guó)sequenom提供的基因分型massarray平臺(tái)，對(duì)基因分型進(jìn)行比較。

1.3 觀察指標(biāo) 采用NIBI數(shù)據(jù)庫(kù)獲得LncRNA-PRNCR1的不同編碼區(qū)域位點(diǎn)，分析rs16901946，rs13252298，rs7463708以及rs7007694的不同基因型與結(jié)直腸癌患者的關(guān)系。分別對(duì)患者不同基因型的年齡以及性別進(jìn)行分層后，分析與結(jié)直腸癌患者發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)性。對(duì)患者開(kāi)展為期3年的隨訪，以患者死亡作為終點(diǎn)事件，分析不同基因型患者的生存情況之間的差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本研究數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（x±s）表示，比較t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，基因分布之間的差異采用HWP進(jìn)行分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線(xiàn)資料比較 兩組的性別、年齡、體重指數(shù)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見(jiàn)表1。

2.2 兩組不同基因位點(diǎn)結(jié)腸癌情況比較 通過(guò)對(duì)不同基因位點(diǎn)與患者的結(jié)腸癌相關(guān)性分析，rs16901946中的基因型兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與rs16901946中的AG、GG、AG/GG基因型位點(diǎn)相比，AA位點(diǎn)的腸癌發(fā)病率較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 rs16901946易感性分層分析 通過(guò)對(duì)患者的分層分析，在≥58歲患者中，rs16901946中的AA基因型與腸癌的易感性相關(guān)，其OR值為1.801，在<58歲患者中，其OR值為0.960。同時(shí)，在加性模型中顯示，≥58歲患者中，每增加一個(gè)等位基因A，患者的結(jié)直腸癌風(fēng)險(xiǎn)增加33.3%;女性患者中，每增加一個(gè)等位基因A，患者直腸癌風(fēng)險(xiǎn)增加11.3%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 rs16901946基因位點(diǎn)不同基因型結(jié)腸癌患者的總體生存情況比較 結(jié)腸癌患者rs16901946基因位點(diǎn)的基因型AA、AG、GG、AG/GG平均生存時(shí)間分別為（30.25±2.12）、（29.11±2.32）、（27.34±2.67）、（25.11±2.55）個(gè)月，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.544，P=0.000）。

3 討論

隨著細(xì)胞生物學(xué)的不斷發(fā)展，目前認(rèn)為，結(jié)直腸癌患者的發(fā)生以及發(fā)展是一個(gè)較為復(fù)雜的突變過(guò)程[8]，長(zhǎng)鏈非編碼RNA廣泛存在于哺乳動(dòng)物中，在機(jī)體細(xì)胞的增殖以及分化過(guò)程中扮演重要角色[9]。大量研究證實(shí)，患者的腫瘤細(xì)胞的無(wú)序增殖以及細(xì)胞周期的變化，與患者的長(zhǎng)鏈非編碼RNA密切相關(guān)[10-11]。

本研究中，通過(guò)在已有的基因數(shù)據(jù)庫(kù)中的LncRNA-PRNCR1數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，可得rs16901946中的基因型兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與rs16901946中的AA位點(diǎn)相比，AG、GG、AG/GG基因型的腸癌發(fā)病率較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。秦芹[12]通過(guò)對(duì)患者的長(zhǎng)鏈非編碼RNA與結(jié)直腸癌易感性的研究中指出，患者的rs16901946基因突變，可造成患者的結(jié)直腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的升高，與本研究一致。另外，在對(duì)患者的等位基因突變情況的分析中，為避免混雜因素的感染，本研究對(duì)患者不同的性別、年齡情況展開(kāi)分層分析，在≥58歲患者中，rs16901946中的AA基因型與腸癌的易感性相關(guān)，其OR值為1.801;在<58歲患者的人群中，其OR值為0.960，同時(shí)，在加性模型中顯示，≥58歲患者中，每增加一個(gè)等位基因A，患者的結(jié)直腸癌風(fēng)險(xiǎn)增加33.3%，在女性患者中，每增加一個(gè)等位基因A，患者的及直腸癌風(fēng)險(xiǎn)增加11.3%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。有研究報(bào)道顯示，LncRNA-PRNCR1可以通過(guò)對(duì)患者的腫瘤細(xì)胞周期的影響而發(fā)揮作用[13]。而rs16901946在整個(gè)作用過(guò)程中，可能通過(guò)對(duì)患者的LncRNA-PRNCR1二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)揮作用，影響患者的靶基因結(jié)合，進(jìn)而造成患者的腫瘤細(xì)胞的無(wú)需增殖[14]，而在進(jìn)一步的分層分析中，認(rèn)為年齡和性別之間存在顯著差異，提示年齡和性別是導(dǎo)致患者發(fā)生細(xì)胞生物學(xué)差異的關(guān)鍵性指標(biāo)[15]。同時(shí)全國(guó)性的流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，男性患者的結(jié)腸癌患者的發(fā)病情況高于女性[16]，且隨著患者的年齡的升高，患者的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)以及疾病的惡化風(fēng)險(xiǎn)顯著升高[17]，與本研究相互印證。

另外在對(duì)患者的預(yù)后分析中，通過(guò)對(duì)不同基因型患者的生存情況進(jìn)行分析，隨著患者的基因突變情況的增加，患者的生存期顯著縮短，分析認(rèn)為，在對(duì)患者的腫瘤細(xì)胞的調(diào)控中，由于LncRNA-PRNCR1對(duì)于患者腫瘤細(xì)胞無(wú)須增殖情況的失衡[18-19]，導(dǎo)致患者可能會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的腫瘤細(xì)胞增殖以及變性，最終激活腫瘤活性，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的無(wú)序增殖[20]。

本研究還存在一定的局限性，由于在結(jié)直腸癌患者的發(fā)病過(guò)程中，患者的生活方式、飲食習(xí)慣等都可能成為結(jié)直腸癌發(fā)病的重要影響因素。由于本研究樣本量較小，所以，本研究結(jié)果的一致性有待在大樣本研究中進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上所述，患者LncRNA-PRNCR1中的rs16901946基因突變與患者的結(jié)直腸癌的進(jìn)展密切相關(guān)，未來(lái)可通過(guò)對(duì)患者的多基因量化分析，對(duì)腫瘤細(xì)胞的激活進(jìn)行預(yù)測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]張惠博，楊琰英，宋啟斌.MTHFR基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌的相關(guān)性[J].國(guó)際腫瘤學(xué)雜志，2017，44（8）：619-621.

[2]張德志，張宇，朱少功.VEGFR2基因rs10013228多態(tài)性對(duì)R_0切除結(jié)直腸癌患者預(yù)后的影響[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2018，197（5）：45-49.

[3]葉石才，鄭學(xué)寶，朱朱，等.IL-22基因單核苷酸多態(tài)性與結(jié)直腸癌易感性和臨床病理參數(shù)的相關(guān)性[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，54（4）：119-123.

[4]王鑫，謝甲貝，曹名波，等.漢族結(jié)直腸癌患者胞苷脫氨酶基因單核苷酸多態(tài)性與卡培他濱治療不良反應(yīng)的關(guān)系[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2018，32（5）：79-83.

[5]劉劍榮，陳小林.miR-124 rs531564、miR-26A rs7372209和miR-126 rs4636297基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的相關(guān)性研究[J].重慶醫(yī)學(xué)，2017，46（36）：5076-5080.

[6]許曄瓊，崔燕紅，趙一琳，等.HOTAIR基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2019（5）：364-368.

[7]顧晉，邢加迪.結(jié)腸癌治療指南[J].中華胃腸外科雜志，2005，8（3）：269-272.

[8]徐佳佳.MTHFR基因多態(tài)性與先兆流產(chǎn)和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系[J].中國(guó)婦幼保健，34（6）：1326-1328.

[9]李濤，賴(lài)春鳳，鄭敏莉，等.MTHFR基因多態(tài)性與客家人群食管癌易感性的關(guān)系[J].廣東醫(yī)學(xué)，2018，39（7）：61-64.

[10] Fang D，Ye Y.C-reactive protein gene rs1205 polymorphism is not associated with the risk of colorectal cancer[J].Bioscience Reports，2017，37（4）：BSR20170872.

[11] Xie M，Zhao F，Zou X，et al.The association between CCND1 G870A polymorphism and colorectal cancer risk：A meta-analysis[J].Medicine，2017，96（42）：e8269.

[12]秦芹.長(zhǎng)鏈非編碼RNA與結(jié)直腸癌易感性及預(yù)后相關(guān)研究[D].武漢：華中科技大學(xué)，2016.

[13] Portela P，Merzoni J，Lindenau J D，et al.KIR genes and HLA class I ligands in a Caucasian Brazilian population with colorectal cancer[J].Human Immunology，2017，78（3）：263-268.

[14] Huszno J，Grzybowska E，Bochenek M N，et al.Abstract P2-07-13： TP53 gene polymorphisms （c.[215G>C]） in breast cancer patients and predisposition to family cancers- Single center experience[J].Cancer Research，2017，77（4 Supplement）：P2-07-13-P2-07-13.

[15] Chen T W，Lee C C，Liu H，et al.APOBEC3A is an oral cancer prognostic biomarker in Taiwanese carriers of an APOBEC deletion polymorphism[J].Nature Communications，2017，8（1）：465.

[16] Aggarwal N，Donald N D，Malik S，et al.PWE-002 The association of low penetrance variants in dna repair genes with colorectal cancer： a systematic review and meta-analysis[J].Gut，2017，66（Suppl 2）：A126.

[17] Okazaki S， Stintzing S， Sunakawa Y，et al.Predictive value of TLR7 polymorphism for cetuximab-based chemotherapy in patients with metastatic colorectal cancer[J].International Journal of Cancer，2017，141（6）：1-9.

[18] Li B，Shi X，Yuan Y，et al.ERCC1rs11615 polymorphism increases susceptibility to breast cancer： a meta-analysis of 4547 individuals[J].Bioscience Reports，2018，38（3）：BSR20180440.

[19] Rai V，Abdo J，Agrawal S，et al.Vitamin D Receptor Polymorphism and Cancer： An Update.[J].Anticancer Research，2017，37（8）：3991-4003.

[20] Wu S， Wang S， Fu Y， et al. A novel mechanism of rs763110 polymorphism contributing to cervical cancer risk by affecting the binding affinity of CEBP/β and OCT1 complex to chromatin[J]. International Journal of Cancer， 2017， 140（4）：756.

（收稿日期：2019-07-11） （本文編輯：周亞杰）