乙肝病毒X蛋白調(diào)控肝癌干細(xì)胞維持肝細(xì)胞癌生物學(xué)行為的研究進(jìn)展

孫為民，查勇

（云南省腫瘤醫(yī)院/昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院 腹部外科，云南 昆明 650118）

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC，以下簡稱肝癌）在惡性消化道腫瘤中病死率僅次于胃、食管，在中國范圍內(nèi)肝癌病死率在所有惡性腫瘤中排名第二，我國每年死于肝癌約11萬例，占全世界肝癌死亡人數(shù)的45%[1]。乙型肝炎病毒X（hepatitis B virus X protein，HBx）蛋白與肝癌發(fā)生密切相關(guān)[2]。HBx能夠維持肝癌干細(xì)胞（liver cancer stem cells，LCSCs）的干性相關(guān)表型，在肝癌的發(fā)生發(fā)展中起到了促進(jìn)作用[3]。傳統(tǒng)化療藥物，如阿霉素、5-氟尿嘧啶、鉑類等都不能有效消除腫瘤干細(xì)胞（cancer stem cells，CSCs），而殘存的CSCs因其高度耐藥性和自我更新能力，成為腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和耐藥的根源。肝癌干細(xì)胞的存在使肝癌缺乏有效治療方法，臨床上通過手術(shù)切除、放化療、介入等治療，仍不能防止肝癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。

1 HBx

HBx是一種小的17 kDa可溶性蛋白，由HBV基因組4個(gè)開放閱讀框架（ORF）中最小的X基因編碼，在HBV生物學(xué)和肝癌發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。HBx是一種多功能蛋白，研究表明HBx基因缺陷的HBV在體內(nèi)外病毒復(fù)制量明顯減少，提示HBx對(duì)于HBV持續(xù)復(fù)制以及在人體不斷感染起著重大作用[4]。有研究[5]表明病原微生物可以誘導(dǎo)成熟細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榘┌Y干細(xì)胞，HBV促進(jìn)肝癌發(fā)生便是一個(gè)例子，HBV刺激肝臟成熟細(xì)胞去編程化，轉(zhuǎn)變?yōu)長CSCs，維持自我更新。

HBV并不能直接誘導(dǎo)肝癌發(fā)生[6]，而HBx能通過轉(zhuǎn)錄因子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)誘導(dǎo)功能轉(zhuǎn)變，是促進(jìn)肝癌進(jìn)展的關(guān)鍵因子[7]。最近研究[8]顯示，HBx參與各種細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑，包括Wnt/β-連環(huán)蛋白（catenin），核因子κB（NF-κB），Janus激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子（STAT）以及Ras/Raf/絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等途徑。在線粒體中，HBx通過下調(diào)線粒體酶和促進(jìn)活性氧（ROS）產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化作用破壞線粒體穩(wěn)定性；阻斷Fas/Fasl凋亡信號(hào)通路，干預(yù)細(xì)胞凋亡，這些變化可以解釋腫瘤細(xì)胞的能量代謝異常以及HBV相關(guān)肝癌中的細(xì)胞死亡抵抗；在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)，HBx通過誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激維持慢性肝臟炎癥和增殖[9]，以上結(jié)果提示HBx通過這些信號(hào)通路及相關(guān)機(jī)制參與到肝癌干細(xì)胞的生物學(xué)行為中，促進(jìn)HBV相關(guān)肝癌發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移。

此外，有研究[10]表明，當(dāng)HBV基因組整合到宿主細(xì)胞中時(shí)，作為基因突變和mRNA編輯的結(jié)果，HBx經(jīng)歷序列突變，尤其是羧基末端截短的HBx（Ct-HBx），在肝癌組織中經(jīng)常被檢測到，但在相鄰的非腫瘤組織中很少發(fā)現(xiàn)。表明Ct-HBx蛋白在肝癌發(fā)展中選擇性存在，Ct-HBx蛋白可能影響對(duì)肝癌起始和進(jìn)展至關(guān)重要的生物學(xué)過程。實(shí)際上，突變HBx蛋白增加信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transducers and activators of transcription 3，STAT3）、NF-κB和PI3K/Akt信號(hào)的閾值并誘導(dǎo)C-jun/MMP-10活化以促進(jìn)肝癌腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移[6]。

2 LCSCs

近來研究[11]發(fā)現(xiàn)，在腫瘤組織中存在極少量CSCs，CSCs是指具有無限增殖、自我更新和分化潛能的一類腫瘤細(xì)胞，并且與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移、化療耐藥密切相關(guān)。近年來，相關(guān)專家學(xué)者在白血病、乳腺癌、肺癌、腦腫瘤、結(jié)直腸癌、前列腺癌等多種腫瘤中均已成功分離出CSCs，均證實(shí)了CSCs學(xué)說[12-14]。肝癌被認(rèn)為也是一種CSCs疾病，在其癌組織中同樣存在LCSCs，與臨床上肝癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、抵抗化療有關(guān)。越來越多的研究人員認(rèn)為，提高肝癌治療療效的關(guān)鍵在于根除LCSCs，肝癌的治療可能僅僅殺死癌細(xì)胞，減少腫瘤體積，卻不根除LCSC[15]。

關(guān)于LCSCs來源有兩種學(xué)說：一是成熟肝臟細(xì)胞或膽管細(xì)胞去分化；二是肝干細(xì)胞突變。兩種不同來源細(xì)胞最后均演變?yōu)楦伟┢鹗技?xì)胞（cancer cell of origin，CCO），共同組成LCSCs。LCSCs能夠通過DNA損傷修復(fù)、多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）表型、CSCs的相對(duì)靜止、生長通路和干性相關(guān)通路激活等途徑維持自我更新[16-17]。

LCSCs的分離鑒定一直是研究的難點(diǎn)，其數(shù)量較腫瘤細(xì)胞少且現(xiàn)有技術(shù)手段很難將他們分離。隨著CSCs表面分子標(biāo)志物的明確，越來越多的學(xué)者對(duì)LCSCs展開研究，希望通過干性表面標(biāo)志物將LCSCs從肝癌組織中成功分離出來，作為治療靶點(diǎn)克服癌癥復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和耐藥的難題。目前已鑒定出LCSCs的多種表面標(biāo)志物，主要有細(xì)胞表面抗原決定簇CD分子，包括CD133、CD90、CD44、OV6、CD24、CD13、K19、上皮細(xì)胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule，EpCAM亦稱CD326）等[18-21]。此外，側(cè)群（side population，SP）細(xì)胞分選也被用于CSCs的分離，SP細(xì)胞是指通過ABC（ATP binding cassette）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白將DNA染料Hoechst 33342泵出細(xì)胞外的一類細(xì)胞群，與非SP細(xì)胞相比，SP細(xì)胞在肝癌組織中具有更高的增殖潛能、成瘤能力和抗凋亡屬性[22]。SP高表達(dá)多藥耐藥相關(guān)蛋白（ABCG2、ABCB），對(duì)常見化療藥物5-FU、多柔比星更為耐藥，而多藥耐藥相關(guān)蛋白可促進(jìn)化療藥物的外排，介導(dǎo)LCSCs自我更新、致瘤性及抵抗化療藥物等特性[23-25]。表面標(biāo)志物顯然不能去定義CSCs，而且更重要的是這些標(biāo)志物也并非CSCs所特有。CD133存在與LCSCs表面，也存在于正常腦干細(xì)胞中，CD44與許多生理過程有關(guān)，如白細(xì)胞歸巢，被認(rèn)為是胞外基質(zhì)中的主要黏附分子[26-27]。因此獨(dú)立應(yīng)用單一標(biāo)志物分選得到LCSCs，在目前來說很難令人信服，而利用聯(lián)合標(biāo)志物分離鑒定LCSCs在許多文獻(xiàn)見報(bào)道[28]。

3 HBx對(duì)LCSCs調(diào)控的相關(guān)信號(hào)通路

3.1 Wnt/β-catenin信號(hào)通路

經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)被認(rèn)為是干細(xì)胞生物學(xué)中的基本途徑[29]。Wnt/β-catenin通路是進(jìn)化上高度保守的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在細(xì)胞增殖、分化、癌變中起著重要作用，Wnt/β-catenin信號(hào)通路異常激活后能夠促進(jìn)細(xì)胞增值、調(diào)節(jié)血管生成因子如MMP-2、VEGF-A的水平而導(dǎo)致肝細(xì)胞癌的發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移[30]。Shen等[31]利用Ad-HBx感染小鼠胎肝祖細(xì)胞（hepatic progenitor cells，HPCs）發(fā)現(xiàn)在HBx處理后富集在胞質(zhì)中的β-catenin蛋白轉(zhuǎn)向胞核，進(jìn)一步PCR分析HBx也促進(jìn)β-catenin mRNA和蛋白水平的表達(dá)，這說明在HPCs中HBx的表達(dá)激活了Wnt/β-catenin信號(hào)通路，Wnt與受體復(fù)合物結(jié)合后被激活，抑制下游蛋白質(zhì)復(fù)合物（AXIN、APC、GSK-3β）的活性，從而激活β-catenin，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF形成復(fù)合體，啟動(dòng)包括c-myc、cyclin D1、CD44等一系列靶基因的轉(zhuǎn)錄[32]。也有研究[33]報(bào)道，HBx增強(qiáng)趨化因子CXCR4（C-X-C chemokine receptor type 4，CXCR4）和CXCL12表達(dá)，CXCR4/CXCL12隨后激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，增強(qiáng)OV6（+）LCSCs增殖、遷移能力，并且表現(xiàn)出對(duì)吡柔比星、奧沙利鉑及羥基樹堿化療耐藥，而在隨后加入CXCR4 抑制劑AMD3100后，OV6+肝癌干細(xì)胞特性被明顯減弱。Shen等[34]用相同劑量的索拉非尼或順鉑處理時(shí)肝癌細(xì)胞，與對(duì)照細(xì)胞相比，敲低KLF8（krupple-like factor 8，KLF8）的肝癌細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡顯著增加，而KLF8通過激活Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路并促進(jìn)化療抗性維持干細(xì)胞樣特征，在肝癌發(fā)生中起著潛在的致癌作用，因此，靶向KLF8可以提供抑制肝癌致瘤能力的有效治療方法。因此研究Wnt/β-catenin信號(hào)通路能夠幫助理解肝癌轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的分子機(jī)制，對(duì)于我們靶向此通路為徹底治愈肝癌提供參考依據(jù)。

3.2 PI3K/Akt信號(hào)通路

PI3K信號(hào)通路通過與絡(luò)氨酸殘基結(jié)合，激活P85的SH2構(gòu)域從而進(jìn)一步活化P85-P110復(fù)合物或者直接通過Ras和P110直接結(jié)合，導(dǎo)致P13K的活化。激活后的PI3K與下游Akt結(jié)合，AKT能直接磷酸化多種轉(zhuǎn)錄因子，可以抑制凋亡因子表達(dá)和增強(qiáng)抗凋亡因子表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活[35]。此外，Akt也能正調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和Bcl-2，NF-κB與許多細(xì)胞因子和生長因子引起的細(xì)胞分化、凋亡和生存有關(guān)，在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活方面起著重要作用[36]。Zhu等[37]利用免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)HBV（+）/AFP（+）肝癌患者組織中干性轉(zhuǎn)錄因子Oct4、Klf4、Sox2 和c-myc以及抗凋亡通路中pAKT的表達(dá)均高于正常組織，隨后Western blot檢測發(fā)現(xiàn)干性標(biāo)志物CD44、CD133和EpCAM相比較HBV（-）/AFP（-）組織也高表達(dá)，提示HBv可以驅(qū)動(dòng)AFP表達(dá)，增加干性標(biāo)志物及轉(zhuǎn)錄因子高表達(dá)，而且AFP本身很可能也是一個(gè)干性標(biāo)志物。而進(jìn)一步細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HBx驅(qū)動(dòng)AFP表達(dá)，抑制PTEN活性，隨后激活PI3K/Akt信號(hào)通路，激活的PI3K/Akt信號(hào)通路誘導(dǎo)重編程相關(guān)蛋白的表達(dá)，且利用siRNA抑制AFP表達(dá)能夠抑制集落形成并抑制重編程相關(guān)蛋白和pAkt（Ser473）表達(dá)，因此AFP通過激活PI3K/Akt信號(hào)通路在誘導(dǎo)干細(xì)胞生成和促進(jìn)肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中起關(guān)鍵作用[38]。以上結(jié)果表明HBx能誘導(dǎo)肝臟正常細(xì)胞向干細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并且HBx可以優(yōu)先驅(qū)動(dòng)AFP的表達(dá)，促進(jìn)重編程相關(guān)蛋白Oct4、Klf4、Sox2和c-myc表達(dá)，促進(jìn)肝臟細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，研究AFP/PI3K/Akt信號(hào)通路可以了解并掌控肝癌轉(zhuǎn)移及侵襲的分子機(jī)制，為進(jìn)一步探討靶向LCSCs徹底治愈肝癌提供重要參考依據(jù)，其可能成為肝癌基因診斷和治療的新靶點(diǎn)。

3.3 STAT3/NANOG信號(hào)通路

STAT3參與許多細(xì)胞過程，如增殖、存活、抗凋亡、侵襲、血管生成和轉(zhuǎn)移以及免疫逃逸等[39]。NANOG是干細(xì)胞效能和胚胎干細(xì)胞自我更新的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子[40]。有研究[39]發(fā)現(xiàn)STAT3可以通過結(jié)合OCT3/4上調(diào)NANOG轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，兩者協(xié)同維持多能性和自我更新能力。Ching等[41]研究發(fā)現(xiàn)HBx增加了干性相關(guān)基因NANOG和SOX2以及干性標(biāo)志物CD133和CD47的表達(dá)，STAT3信號(hào)傳導(dǎo)活性在HBx表達(dá)細(xì)胞和HBx轉(zhuǎn)基因小鼠中增強(qiáng)，導(dǎo)致致癌作用，提示HBx對(duì)CSCs干性表達(dá)及維持有重要作用，而Western blot檢測分析HBx優(yōu)先誘導(dǎo)STAT3和干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子NANOG的表達(dá)，在加入STAT3抑制劑S3I-201后，NANOG的表達(dá)處于下調(diào)狀態(tài)，并且球體形成實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)HBx誘導(dǎo)的自我更新消失了?？傊?，這些研究結(jié)果表明HBx通過STAT3介導(dǎo)的NANOG上調(diào)增強(qiáng)LCSCs高致瘤性和干性特征。HBx通過調(diào)節(jié)CSCs在肝癌發(fā)展和進(jìn)展中起關(guān)鍵作用，其涉及STAT3/NANOG途徑的優(yōu)先激活，更好地了解HBx蛋白的分子機(jī)制將提高對(duì)肝癌發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)，目的是為這種致命疾病開發(fā)更有效的管理。希望能開發(fā)針對(duì)HBx誘導(dǎo)的STAT3/NANOG的靶向治療以及鑒定預(yù)測疾病結(jié)果和腫瘤復(fù)發(fā)的新標(biāo)記提供了新的見解。STAT3、NANOG基因可能在乙肝相關(guān)肝癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其可能成為肝癌基因診斷和治療的新靶點(diǎn)。

4 HBx調(diào)節(jié)表觀遺傳增加干性表達(dá)

表觀遺傳調(diào)控在癌癥生物學(xué)中起到了關(guān)鍵的作用，基因表達(dá)的表觀遺傳調(diào)控是一個(gè)積極和動(dòng)態(tài)的過程，包括組蛋白修飾，DNA甲基化和染色質(zhì)重塑。DNA甲基化是干細(xì)胞分化過程重要的調(diào)控因子，能使干細(xì)胞向不同的亞型分化，DNA甲基化被認(rèn)為是維持CSCs的潛在表觀遺傳機(jī)制[42]。異常的表觀遺傳調(diào)控與癌癥的發(fā)生直接相關(guān)，尤其是組蛋白的去甲基化，引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)改變，進(jìn)而促進(jìn)癌癥進(jìn)展。

組蛋白去甲基化酶（histonelysine demethylases，KDMs）能夠參與到腫瘤生長、血管生成、侵襲、轉(zhuǎn)移以及化療耐藥等多種腫瘤行為中。Wang等[43]研究發(fā)現(xiàn)在乙肝感染相關(guān)肝癌患者病例中，肝臟祖細(xì)胞干性標(biāo)志物，如EpCAM、AFP、PROM1以及NANOG大量表達(dá)在KDM5B高表達(dá)的肝癌患者當(dāng)中，并且KDM5B水平和EpCAM、AFP水平成正相關(guān)，這些結(jié)果表明KDM5B是維持干細(xì)胞特性的重要分子。而接下來作者研究發(fā)現(xiàn)，HBx能夠上調(diào)KDM5B、EpCAM、AFP、PROM1和NANOG表達(dá)，其具體機(jī)制仍然不是很明確。以上結(jié)果表明，HBx通過上調(diào)KDM5B，而KDM5B特異性去除甲基化殘留，抑制基因轉(zhuǎn)錄，增加肝癌干細(xì)胞成球、轉(zhuǎn)移和侵襲能力，而且基于KDM5B在維持干性相關(guān)中的作用，與HBx相互作用，成為肝癌患者預(yù)后不良因素。Fan等[44]研究發(fā)現(xiàn)HBx能通過DNA甲基化誘導(dǎo)EpCAM表達(dá)，EpCAM是肝癌干細(xì)胞重要的上皮黏附分子，利用染色質(zhì)免疫沉淀測定證明HBx依賴NF-κB/RelA通路，NF-κB/RelA位點(diǎn)位于EpCAM轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)下游的CpG島中，敲低RelA則抑制CpG去甲基化和EpCAM表達(dá)，而在HBx表達(dá)后， RelA結(jié)合甲基轉(zhuǎn)移酶EZH2、TET2和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT3L）形成復(fù)合物，激活下游轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)肝癌干細(xì)胞中EpCAM表達(dá)上調(diào)。有研究[45]報(bào)道，HBx也能激活DNMT，促進(jìn)鈣黏蛋白啟動(dòng)子甲基化，影響Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活，進(jìn)而影響下游靶點(diǎn)EpCAM表達(dá)，并且DNMT對(duì)于CSC是必需的，DNMT的缺失可以通過限制CSCs庫來減少腫瘤發(fā)生。因此，靶向表觀遺傳修飾因子尤其是DNA甲基化提供了治療人類癌癥的可選策略。

5 HBx促進(jìn)LCSCs的增殖及抑制凋亡

LCSCs的增殖成為肝癌復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的重要原因之一，如何抑制其增殖成為治療的一大研究方向。越來越多的證據(jù)表明，HBx能調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生存和凋亡途徑中多種轉(zhuǎn)錄因子的活性，包括細(xì)胞周期相關(guān)蛋白（p27、cyclin D1、p21和p53）和促凋亡蛋白（PARP）等[46]。Yu等[47]研究HBx促進(jìn)小鼠胚胎祖細(xì)胞（fetal HPCs，F(xiàn)HPCs）增殖實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)這些FHPCs陽性表達(dá)EpCAM、CD133等干細(xì)胞表面標(biāo)記物，在體外實(shí)驗(yàn)中，F(xiàn)HPCs能轉(zhuǎn)變分化為成熟肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞，組成肝癌起始細(xì)胞，這些行為類似于肝癌干細(xì)胞。而HBx的C末端能促進(jìn)FHPCs的增殖，表明HBx能通過調(diào)節(jié)FHPCs的增殖，增加干性的表達(dá)。有研究[46,48]發(fā)現(xiàn)HBx通過降低Bax/Bcl2比例，抑制caspase-3和caspase-9的表達(dá)，進(jìn)而抑制caspase下游靶標(biāo)PARP（poly ADP-ribose polymerase）激活，從而抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡。另外，HBx能通過PI3K/AKT通路中的Akt直接或者通過Raf-1和P65-PAK來磷酸化Bad的Serl36位殘基，終止Bad對(duì)Bcl-2或Bcl-XI拮抗作用，釋放后的Bcl-2或Bcl-XI恢復(fù)抗細(xì)胞凋亡的功能，而且Akt也能抑制caspase-9的活性，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞生存能力并且表現(xiàn)出對(duì)缺氧和營養(yǎng)不良的耐受[49]。以上研究結(jié)果提示，HBx通過改變細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，改變細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑的表達(dá)或蛋白水解降解來引起不受控制的細(xì)胞增殖。

6 結(jié)論與展望

肝癌是世界范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤，是癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一[50]。在過去的幾十年中，自早期診斷和綜合治療進(jìn)展以來，肝癌患者的預(yù)后逐漸得到改善，但是總生存率仍不理想，特別是對(duì)于失去治愈性治療機(jī)會(huì)的晚期肝癌患者。雖然手術(shù)切除和肝移植是肝癌患者的治愈性治療方法，但大多數(shù)肝癌容易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移，長期預(yù)后仍然不能令人滿意。對(duì)于晚期肝癌患者，經(jīng)動(dòng)脈栓塞化療（TACE）是二線治療，但由于腫瘤的高化學(xué)耐藥性，其整體效果不盡如人意[28,51]。LCSCs存在于肝細(xì)胞癌中，其特征在于無限增殖，自我更新和多向分化能力，近來相關(guān)研究通過靶向干性分子標(biāo)記物CD90、CD44、CD133和EpCAM等，通過聯(lián)合多個(gè)標(biāo)記物可以區(qū)分LCSCs和肝癌細(xì)胞[52-55]。LCSCs的存在可能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞對(duì)化療抵抗以及術(shù)后復(fù)發(fā)等問題，因此，臨床肝癌治療應(yīng)更多地關(guān)注LCSCs治療，尤其在手術(shù)、放療和/或化療后必須考慮如何治療LCSCs[56]。

乙型肝炎病毒X蛋白在啟動(dòng)和促進(jìn)HBV誘導(dǎo)的肝癌發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。HBx調(diào)控LCSCs促進(jìn)肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移浸潤和復(fù)發(fā)，已經(jīng)成為HBV-肝癌發(fā)展的重要生物指標(biāo)。雖然研究人員已經(jīng)確定了導(dǎo)致HBx誘導(dǎo)的肝癌腫瘤發(fā)生的一些因素，如相關(guān)干性通路的調(diào)節(jié)，基因組不穩(wěn)定性，插入突變，表觀遺傳變化和增殖以及抑制凋亡等[57]，但迄今為止，大多數(shù)研究只局限在細(xì)胞和動(dòng)物模型中，尚未對(duì)人類進(jìn)行全面科學(xué)研究。相關(guān)研究報(bào)道了針對(duì)HBx的5'-三磷酸RNA（3p-siHBx）的小干擾RNA可通過HBx沉默賦予有效的抗乙型肝炎病毒功效，通過3p-siHBx療法可改善HBV載體肝臟中的免疫微環(huán)境并抑制HBV復(fù)制，從而達(dá)到抑制HBx表達(dá)，消除HBx的功能[58]。HBx調(diào)控LCSCs生物學(xué)行為和功能的機(jī)制可能成為治療肝癌新的突破點(diǎn)，因此，在乙肝相關(guān)肝癌腫瘤中靶向HBx的策略需要進(jìn)一步的研究。