miR-432在神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者中的表達(dá)和其臨床意義

劉文術(shù)，王 賀，牛佳義，林 楊，江 威

（1．黑龍江省齊齊哈爾市第一醫(yī)院急診內(nèi)科，黑龍江 齊齊哈爾 161000；2．黑龍江省齊齊哈爾市第一醫(yī)院腦外科，黑龍江 齊齊哈爾 161000；3．黑龍江省齊齊哈爾市第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，黑龍江 齊齊哈爾 161000）

神經(jīng)膠質(zhì)瘤（簡稱為膠質(zhì)瘤）是一種發(fā)生在神經(jīng)外胚層的惡性腫瘤，是神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一（30%）。膠質(zhì)瘤具有生長速度較快、治愈率低、術(shù)后復(fù)發(fā)率較高、存活率低、預(yù)后較差等特點(diǎn)，患者通常出現(xiàn)顱內(nèi)壓增高、癲癇、嘔吐等臨床癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生命安全[1]。因此，膠質(zhì)瘤已成為臨床和基礎(chǔ)研究的重點(diǎn)問題。

本研究主要探究miR-432在神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者中的表達(dá)及其臨床意義，為今后神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2018年1月我院收治的膠質(zhì)瘤患者的腦組織15例，并收集同期在我院接受治療的創(chuàng)傷性腦損傷患者腦組織15例作為正常對照組。膠質(zhì)瘤患者年齡10～75歲，平均（42.5±26.75）歲，其中男8例，女7例，根據(jù)《WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類》分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期1例，Ⅱ期3例，Ⅲ期3例，Ⅳ期8例。膠質(zhì)瘤患者年齡10～75歲，平均（41.75±27.05）歲，其中男8例，女7例。兩組患者在年齡、性別比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染

膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87細(xì)胞購于南京科佰生物科技有限公司（中國）。U87細(xì)胞采用含有10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素混合物的DMEM培養(yǎng)液（Hyclone公司，美國），并置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱（Thermo公司，美國）中培養(yǎng)。

1.3 RNA提取和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）

根據(jù)Trizol Reagent試劑（Invitrogen，美國）說明書提取組織、血清和細(xì)胞中總RNA，并使用NanoDrop2000檢測RNA濃度和純度。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（ABI，美國）說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。

1.4 CCK-8實(shí)驗(yàn)

采用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞活力。首先，將細(xì)胞以1×104個(gè)細(xì)胞/孔密度接種于96孔板中，細(xì)胞轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，在每孔中加入10 μL CCK-8溶液（北京百奧萊博，中國），孵育4小時(shí)。采用酶標(biāo)儀檢測450 nm處的吸光度。每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔取平均值，另設(shè)單孔只加入培養(yǎng)基作為空白對照。

1.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力。首先，將細(xì)胞接種于六孔板中，細(xì)胞轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，利用一次性進(jìn)口吸頭在每孔中豎直劃一條直線，用PBS（索萊寶，中國）清洗細(xì)胞，以去掉漂浮的細(xì)胞，然后更換新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。分別于0小時(shí)、24小時(shí)后觀鏡下觀察并拍照，對比不同時(shí)間細(xì)胞劃痕寬度。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，用graphpad軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。t值用以檢驗(yàn)計(jì)量資料，x2用以檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料，組間差異經(jīng)P值進(jìn)行判定，當(dāng)*P＜0.05，**P＜0.0和***P＜0.001時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

質(zhì)瘤患者和非膠質(zhì)瘤患者血清中miR-432的表達(dá)，結(jié)果顯示，與非膠質(zhì)瘤患者相比，膠質(zhì)瘤患者血清中miR-432的表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.0228＜0.05）。

2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染后miR-432的表達(dá)量變化

CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與mimic-NC組相比，miR-432 mimic顯著降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87細(xì)胞的活力，而與inhibitor-NC組相比，miR-432 inhibitor顯著升高U87細(xì)胞活力。

3 討 論

本研究應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測miR-432在15例膠質(zhì)瘤患者的癌癥組織和15例非膠質(zhì)瘤患者的腦組織中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，miR-432在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)顯著降低。qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，miR-432在膠質(zhì)瘤患者血清中miR-432的表達(dá)水平顯著低于非膠質(zhì)瘤患者。