半枝蓮提取物對胃癌細胞周期及凋亡的影響

黃京華 樸正日 林昌岫

基金支持：國家自然科學(xué)基金（搭載IL-12和反義VEGF165的腺病毒與放療聯(lián)合治療腫瘤研，81660478 ）

作者簡介：黃京華，1968-03-20，籍貫吉林省龍井市，男，朝鮮族，博士研究生，副主任醫(yī)師，研究腫瘤免疫，腫瘤放射治療方面。

通訊作者：林昌岫，1971-03-01，籍貫吉林省汪清縣，男，朝鮮族，博士研究生，研究腫瘤學(xué)，炎癥學(xué)，免疫學(xué)方面。

【摘 要】

目的：探討半枝蓮提取物對胃癌細胞周期及凋亡的影響。方法：采用流式細胞儀測定中藥半枝蓮藥材中醇提物（SBE）和水提物（SBW）對人胃癌細胞株BGC823細胞周期及凋亡情況，觀察半枝蓮提取物對體外腫瘤細胞的抑制作用。結(jié)果：體外抑瘤實驗表明，SBE和SBW的細胞凋亡率較50%乙醇明顯升高，SBE和SBW的G0/G1期細胞比率較50%乙醇亦明顯增多，S期、G2/M期細胞明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：半枝蓮提取物SBE和SBW體外均有很強的抗腫瘤作用。

【關(guān)鍵詞】 半枝蓮；醇提取物；水提取物；抗腫瘤

【中圖分類號】

R365 【文獻標(biāo)志碼】

A 【文章編號】1005-0019（2018）21-060-02

半枝蓮（Scutellaria Barbata D. Don）是唇形科植物的干燥地上部分，是傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物，它具有清熱解毒，活血化瘀，消腫止痛，抗癌等功效[1]?！缎Ｕ静菥V目》的記載“半枝蓮開紫白色花，草紫紅色，對結(jié)對葉，七八月采用”。在民間草藥中，有許多品種以半蓮花或“半枝”命名[2]。目前的文獻研究發(fā)現(xiàn)半枝蓮提取物具有良好的抗腫瘤活性，為了進一步了解其抗腫瘤作用，本研究通過采用流式細胞儀，研究半枝蓮中的 SBE和 SBW提取物對人胃癌細胞系BGC823的增殖抑制作用，旨在為日后臨床進行體內(nèi)抗腫瘤活性研究提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器、藥品及試劑

半枝蓮購自福建中醫(yī)藥大學(xué)國醫(yī)堂；人胃癌細胞株BGC823購自上海中科院細胞庫；流式細胞儀為美國BD FACS Calibur。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的配置

SBE：取干燥的產(chǎn)品，在乙醇中浸泡15天，減壓濃縮，無菌過濾器滅菌，濃度調(diào)節(jié)至10 mg / ml，儲存于4°C；SBW：取5g干燥產(chǎn)品，加入100 ml蒸餾水，浸泡過夜，然后在100°C下水浴1小時。通過減壓濃縮制備，通過無菌過濾器滅菌，調(diào)濃度為10mg。

1.2.2 腫瘤細胞株懸液的制備

將腫瘤細胞株在含有10～20%胎牛血清、100單位青霉素和鏈霉素以及0.03%谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。將培養(yǎng)箱置于37℃，飽和濕度，5%CO2，每隔一天更換一次液體，并等待細胞進入對數(shù)生長期，棄去貼壁細胞上清，洗滌磷酸鹽緩沖液兩次，用0.25%胰蛋白酶消化細胞（通過懸浮生長的細胞收集）。用磷酸鹽緩沖液沖洗兩次，并用RPMI 1640完全培養(yǎng)基調(diào)節(jié)濃度為1×105ml的細胞懸液，以備使用。

1.2.3 流式細胞儀

試劑：PI染液為Sigma 產(chǎn)品。儀器：美國BD FACS Calibur流式細胞儀。①取對數(shù)生長期細胞，細胞計數(shù)，調(diào)整細胞數(shù)目為1x105個/ml，加入半枝蓮提取物含藥培養(yǎng)基共同孵育，每濃度設(shè)3個復(fù)瓶。②在培養(yǎng)48小時后收集細胞，PBS洗滌細胞兩次，1200 r/min離心8min，棄去培養(yǎng)液。③300ulPBS洗滌1次。④離心去PBS，加入冰預(yù)冷的70%的乙醇固定過夜。⑤離心棄去固定液，3mIPBS 重懸5min。⑥400目的篩網(wǎng)過濾1次，500-1000r/min離心5min，棄去PBS。⑦用1mlPI染液染色，4°C避光30min。上機檢測分析細胞周期及誘導(dǎo)凋亡情況。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

體外抑瘤實驗表明，SBE和SBW的細胞凋亡率較50%乙醇明顯升高，SBE和SBW的G0/G1期細胞比率較50%乙醇亦明顯增多，S期、G2/M期細胞明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3 討論

半枝蓮又名并頭草、狹葉韓信草，為目前國內(nèi)外最熱門的抗腫瘤研究中藥之一。半枝蓮刺激性強，其味辛、甘，性寒，具有清熱解毒、活血化瘀，消腫止痛的功效，對肝癌、肺癌、直腸癌和胃癌有顯著療效[3]。然而，其活性成分和作用機制仍不清楚。

在本研究中，使用流式細胞儀，并選用人胃癌細胞系 BGC823測定了中藥半枝蓮SBE和SBW的抗腫瘤活性。結(jié)果顯示：體外抑瘤實驗表明，SBE和SBW的細胞凋亡率較50%乙醇明顯升高，且相比單純50%乙醇，SBE和SBW的G0/G1期細胞比率較50%乙醇亦明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），S期、G2/M期細胞明顯減少，提示半枝蓮提取物可將腫瘤細胞周期阻滯于G0/G1期，由此得出延緩腫瘤細胞周期、誘導(dǎo)細胞凋亡是該提取物抗腫瘤作用機制之一。半枝蓮的抗癌功效，可對急性粒細胞型白血?。?NvIL）血細胞有輕度抑制作用，有學(xué)者用細胞呼吸器法篩選實驗表明[4]，發(fā)現(xiàn)其對急性粒細胞型白血病血細胞的抑制率大于75%。同時半枝蓮能夠提高免疫系統(tǒng)功能，但大劑量注射可抑制小鼠胸腺指數(shù)；有抑菌作用；有較強的對抗由組胺引起的平滑肌收縮作用；有很好的解痙祛痰作用。同時具有利尿、興奮呼吸及解蛇毒的作用[5]。

綜上所述，SBW和SBE在體外具有較強的抗腫瘤作用，而作為抗腫瘤藥物的半枝蓮需要進一步開發(fā)，其作用機制尚需進一步研究。

參考文獻

[1] 汪維佳，李照，華育暉等.半枝蓮不同極性提取物對人胚腎細胞體外活性的影響[J].實用腫瘤雜志，2016，31（3）：228-231.

[2] 石銳，郭素青，劉珊等.半枝蓮對白血病K562細胞VEGF表達的影響[J].中國實驗血液學(xué)雜志，2016，24（5）：1339-1342.

[3] 周凌凌，胡筱希，丁霞等.半枝蓮提取物抗乙肝病毒體外實驗研究[J].中藥材，2015，38（5）：1042-1045.

[4] 梁彩霞，曹英夕，張東等.半枝蓮中1個新克羅烷二萜化合物[J].中草藥，2015，46（19）：2843-2845.

[5] 梁晨，楊國春，李丹慧等.半枝蓮化學(xué)成分研究[J].中草藥，2016，47（24）：4322-4325.