不同產(chǎn)地南五味子藥材質(zhì)量評價△

李筱玲，鄧寒霜

(商洛學院 生物醫(yī)藥與食品工程學院，陜西 商洛 726000)

五味子始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心之功效，有2000多年的藥用歷史[1]。五味子有南北之分，北五味子為木蘭科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果實，習稱五味子[2]66；南五味子為木蘭科植物華中五味子SchisandrasphenantheraRehd.et Wils.的干燥成熟果實[2]244。長期以來南、北五味子同作五味子入藥[3]。經(jīng)過長期實踐人們認識到其差別，自2000年起，《中華人民共和國藥典》將南五味子與五味子分開收錄[4-5]?，F(xiàn)行藥典分別以五味子酯甲、五味子醇甲作為南、北五味子質(zhì)量控制的指標性成分。南、北五味子有效成分不盡相同，功能主治略有差異，但在臨床使用過程中，存在兩種五味子混用現(xiàn)象。筆者所在商洛市位于陜西南部山區(qū)，地處秦嶺南麓東段，為南五味子主產(chǎn)區(qū)，近年來有文獻報道該地區(qū)所產(chǎn)南五味子品質(zhì)較優(yōu)[6-8]。本文對陜南及周邊地區(qū)藥材市場南五味子質(zhì)量進行了初步調(diào)查、評價，以期為南五味子藥材質(zhì)量控制及指導(dǎo)臨床合理用藥提供參考。

1 試劑與材料

1.1 試劑與儀器

LC-20A型高效液相色譜儀(日本島津)，四元泵，自動進樣器，PDA檢測器；安五脂素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111844-201001)；南五味子對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：121118-200502)；五味子酯甲對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111529-200503)等。

1.2 實驗材料

南五味子藥材樣品，隨機從藥材市場或藥店采購，共計14份，詳見表1。

2 方法與結(jié)果

按照2015版《中華人民共和國藥典》第一部及第四部相關(guān)項下要求，對收集到的樣品進行性狀、鑒別、檢查、含量測定等分析，評價南五味子藥材質(zhì)量。

2.1 性狀

南五味子藥材呈扁球形或球形，直徑4～6 mm，表面顏色為棕紅色至暗棕色不等，果肉常貼于種子上且干癟皺縮，果肉氣微，味酸，種子1～2粒，腎形，表面棕黃色有光澤，種皮薄而脆，破碎后香氣弱，味辛，微苦。各樣品性狀見圖1。

表1 南五味子藥材樣品來源

經(jīng)觀察可知，5號與11號藥材樣品表面顯暗紫紅色、皺縮油潤、果肉柔軟，符合北五味子藥材性狀特征；其他樣品表面棕紅色至暗棕色、皺縮干癟、果肉緊貼種子上，符合南五味子藥材性狀特征。

2.2 微鑒別

取樣品適量，粉碎，過四號篩，以水合氯醛裝片，用顯微鏡先以10倍鏡調(diào)至清晰找到物像，再轉(zhuǎn)至40倍鏡下調(diào)試觀察。結(jié)果見表2、圖2。

圖1 南五味子藥材樣品性狀

樣品號種皮外層石細胞種皮內(nèi)層石細胞果皮表皮細胞導(dǎo)管1、2、3、4、6、7、8、9、10、12、13、 14多角形、長多角形,腔內(nèi)含棕色物,縱面觀為長方形,外側(cè)壁無突起,壁孔及孔溝不明顯長圓形、類圓形,壁孔及孔溝明顯類多角形,表面有角質(zhì)線紋,表皮中散有油細胞,垂周壁不呈連珠狀增厚螺紋、梯紋導(dǎo)管5、11表面觀呈多角形、長多角形,壁厚,孔溝極細密,細胞腔內(nèi)含深棕色物多角形,類圓形,不規(guī)則,壁稍厚,紋孔較大類多角形,垂周壁呈連珠狀增厚,表面有角質(zhì)線紋,表皮中散有油細胞螺紋導(dǎo)管

注：a，b南五味子果皮表皮細胞；c，d 北五味子果皮表皮細胞；e 南五味子螺紋導(dǎo)管；f 南五味子種皮外層石細胞；g 南五味子種皮外層石細胞縱面觀；h 南五味子種皮內(nèi)層石細胞。圖2 藥材樣品顯微鑒別結(jié)果

南、北五味子藥材顯微鑒別特征類似，主要區(qū)別在于表皮細胞是否垂周壁呈連珠狀增厚[9]。由表2、圖2可知，5號與11號樣品表皮細胞垂周壁明顯呈連珠狀增厚，而其他樣品未發(fā)現(xiàn)此類情況。由此，可以初步判斷5號與11號樣品應(yīng)為北五味子，其他樣品為南五味子。本次實驗使用水合氯醛裝片，未觀察到淀粉粒。

2.3 薄層鑒別

照《中華人民共和國藥典》(2015版，一部)南五味子鑒別項下有關(guān)規(guī)定進行，實驗結(jié)果如圖3所示。

注：1.安五脂素對照品；2.南五味子對照藥材；3.樣品；4.樣品。圖3 藥材樣品薄層鑒別結(jié)果

由圖3可知，5號、11號樣品薄層色譜與南五味子對照藥材相比有明顯差異，且5號與11號樣品色譜圖中未出現(xiàn)安五脂素斑點，由此可以進一步判斷5號、11號2個樣品應(yīng)為北五味子；其余12個樣品均在與對照藥材和對照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的深藍色斑點，符合南五味子薄層鑒別特征。

2.4 檢查項目

取南味子藥材樣品適量，照《中華人民共和國藥典》有關(guān)規(guī)定，進行雜質(zhì)、水分、總灰分檢查，詳細結(jié)果見表3。

表3 藥材樣品檢查項測定結(jié)果

注：《中華人民共和國藥典》規(guī)定，本品雜質(zhì)不得過1%，水分不得過12.0%，總灰分不得過6.0%。

由表3可知，全部樣品雜質(zhì)、水分、總灰分平均含量分別為0.61%、10.69%、4.25%；利用SPSS 13.0對3組數(shù)據(jù)進行單樣本t檢驗得知，所有樣品雜質(zhì)、總灰分含量顯著低于藥典要求(P<0.01)，水分含量與藥典標準比較無顯著差異(P=0.107)。

2.5 含量測定

2.5.1 色譜條件 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，檢測波長為254 nm，以四氫呋喃-水(38∶62)為流動相，流速0.8 mL·min-1，柱溫40 ℃，按五味子酯甲色譜峰計算其理論塔板數(shù)應(yīng)不低于3000。

2.5.2 樣品前處理 對照品溶液的制備 精密稱取五味子酯甲對照品5.8 mg于5 mL容量瓶中，加入少量甲醇，加熱使其溶解，待冷卻至室溫后以甲醇定容至刻度，即得濃度為1.16 mg·mL-1的對照品溶液。

供試品溶液的制備 精密稱取藥材粉末(過三號篩)0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，在250 W、40 kHz的條件下超聲處理30 min，放冷至室溫，再次稱定重量，以甲醇補足減失重量，搖勻，過濾，收集續(xù)濾液，即得供試品溶液[10-12]。

2.5.3 線性關(guān)系考察 分別精密吸取五味子酯甲對照品溶液0、1、2、3、4、5，置5 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，進樣分析。以峰面積對濃度(mg·mL-1)進行回歸分析，得五味子酯甲回歸方程Y=3.0×107X+61 214，r=0.999 9，表明五味子酯甲在濃度0～1.16 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，詳細結(jié)果見圖4。

圖4 五味子酯甲標準曲線

2.5.4 供試品含量測定 取前述方法所得供試品溶液20 μL，照2.5.1項下的色譜條件進樣分析，計算五味子酯甲含量。實驗結(jié)果見表4，標準品及樣品色譜圖見圖5。

表4 五味子酯甲含量測定結(jié)果

注：《中華人民共和國藥典》規(guī)定，本品按干燥品計算，含五味子酯甲不得少于0.20%。

注：1.五味子酯甲標準品；2.南五味子樣品；3.北五味子樣品。圖5 高效液相檢測色譜圖

由圖5可知，五味子酯甲保留時間在18.7 min左右，南五味子樣品色譜圖中可明顯看到五味子酯甲色譜峰；北五味子樣品中未檢出五味子酯甲。由表5可知，全部南五味子樣品五味子酯甲平均含量為0.63%，顯著高于《中華人民共和國藥典》標準(P<0.01)；其中2號樣品含量最低，9號樣品含量最高，全部樣品有效成分含量在藥典標準的2.5～3.9倍之間，表明陜南及周邊地區(qū)所產(chǎn)南五味子品質(zhì)較優(yōu)。

3 討論與分析

中藥五味子根據(jù)來源不同有南北之分，具有收斂固澀，益氣生津，補腎寧心的作用。被稱為南五味子的植物較多，有長梗南五味子KadsuralongipedunculataFinet et Gagnep.[13]、異形南五味子Kadsuraheteroclita(Roxb.)Craib.[14]、內(nèi)南五味子KadsurainteriorA.C.Smith[15]等，上述3種南五味子與華中五味子同科不同屬，且藥用部位為根及藤莖，因此不常作為五味子偽品出現(xiàn)。陜南地區(qū)藥材市場上流通的五味子主要是華中五味子的干燥成熟果實，其主要成分為木質(zhì)素類，如五味子酯甲、五味子甲素、安五脂素等[16]。因近年來北五味子向南引種及外地藥材流入等原因，在銷售及使用過程中存在部分南、北五味子混用的情況。兩種五味子在2015版《中華人民共和國藥典》中收錄的性味歸經(jīng)、功能主治等內(nèi)容完全相同，但因南、北五味子有效成分有明顯差異，臨床上仍習慣將二者區(qū)別使用。

本文調(diào)查發(fā)現(xiàn)，部分藥店人員不能正確區(qū)分五味子藥材，將兩種五味子同等銷售，在藥品監(jiān)督管理過程中應(yīng)引起注意。本文共收集五味子藥材樣品14份，其中5號、11號2份樣品在性狀及顯微鑒別中呈現(xiàn)明顯北五味子特征；在薄層色譜鑒別中該2份樣品與南五味子對照藥材有明顯差異，且未檢出安五脂素；在利用高效液相色譜法進行含量測定過程中，上述2份樣品色譜圖亦表現(xiàn)出與其他樣品的顯著差異且未檢出五味子酯甲，由此可以判斷5號及11號樣品應(yīng)為北五味子。

所有南五味子樣品中，除少數(shù)樣品水分或總灰分含量未達到藥典標準外，其他指標均符合藥典要求，且有效成分含量均達到藥典標準2倍以上，說明陜南地區(qū)出產(chǎn)的南五味子藥材品質(zhì)較為優(yōu)良。部分藥材樣品中混有果梗、樹枝等非藥用部位，應(yīng)是藥材采收、收購、加工時未經(jīng)嚴格操作而引入的雜質(zhì)，雖未超出藥典規(guī)定范圍，但也影響了藥材質(zhì)量。部分樣品水分含量超標，影響了用量準確性，同時更易使藥材發(fā)生霉變?？偦曳值南薅纫髮τ诒ＷC中藥的品質(zhì)和潔凈程度，有一定的意義，個別樣品總灰分超標也對藥材質(zhì)量帶來隱患。在以后的生產(chǎn)、銷售過程中應(yīng)注意加強產(chǎn)地初加工管理，嚴格按照《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(GAP)要求操作，規(guī)范藥材凈制、干燥等環(huán)節(jié)，防止非藥用部位及其它雜質(zhì)混入，有效控制藥材含水量、雜質(zhì)及總灰分，進一步提高南五味子藥材品質(zhì)。